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川崎病患儿体内中性粒细胞CD64表达水平的变化及临床意义

更新时间:2016-07-05

川崎病(Kawasaki disease,KD)是一种全身性、免疫性血管炎,主要见于5岁以下的儿童。目前,KD的发病机制尚不明确,可能与细菌等病原体感染所致超抗原引起的免疫反应有关[1-3]。临床常用白细胞计数(leukocyte count,WBC)、中性粒细胞百分比(percentage of neutrophils,Neu%)、C反应蛋白(C reactive protein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)等水平判断患者是否有细菌感染,但特异性不高。多项研究[4-6]证实,中性粒细胞CD64是诊断细菌感染的敏感指标,但关于KD患儿体内中性粒细胞CD64表达水平的研究较少。本研究通过检测KD患儿体内中性粒细胞CD64的水平,拟探讨其在KD患儿体内表达水平的变化及临床意义。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以2016年6月至2017年6月安徽医科大学第一附属医院儿科住院的初诊KD患儿为研究对象。纳入标准:①诊断符合美国心脏协会KD指南[7];②初次发病,患儿既往无KD史及其他风湿免疫系统疾病史;③入院前未行静脉用丙种球蛋白和激素治疗。根据指南,将KD患儿分为典型KD组(n=38)和不典型KD组(n=25)。选取同期于安徽医科大学第一附属医院体检健康儿童15例作为对照组,入选标准:①与KD患儿同期且年龄、性别构成相匹配;②近期无急性感染史,且无基础疾病史。根据指南[7],典型KD诊断标准:发热>5 d,排除其他疾病,同时至少满足以下5项中的4项:①急性期掌跖红斑,手足硬肿,恢复期指(趾)端蜕皮;②多形性皮疹;③双侧球结膜非化脓性充血;④口唇潮红皲裂,口腔弥漫充血,草莓舌;⑤颈部淋巴结肿大(直径>1.5 cm);如未能满足4项,但超声心动图有冠状动脉损害,也可确诊。不典型KD诊断标准:如不满足以上5项中的4项,但疾病发展符合KD的特点,并排除其他疾病,可诊断为不典型KD。KD患儿共63例,男性42例,女性21例,年龄0.2~9岁,平均(2.81±2.35)岁。典型KD组38例,男性27例,女性11例,平均年龄(2.91±2.71)岁;不典型KD组25例,男性15例,女性10例,平均年龄(2.64±1.70)岁。对照组15例,男性7例,女性8例,年龄0.17~7岁,平均(2.69±2.48)岁。KD组与对照组对象年龄、性别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。

样架分为△型、∏型两种,△型样架为锚桩固定在水平地面或永久马道上的样架,∏型样架为在施工马道上钻孔作业时固定在开挖坡面上的样架。样架统一采用5mm壁厚Φ48mm钢管搭设,以保证样架的刚度。根据技术人员的样架设计,测量放出两排样架固定桩位,使用Φ50mm钻头手风钻造锚桩孔80cm深,插入1.0m长钢管形成锚桩。

1.2 检测指标 KD患儿静脉血均于入院第2天晨起采集。检测方法:用流式细胞术检测中性粒细胞CD64(以%表示),流式细胞仪及配套试剂购自美国Beckman Coulter公司(型号:FC 5000),标准配套试剂为CD64- FITC;红细胞裂解液购自北京Solarbio公司(货号:R1010);磷酸盐缓冲液购自美国Hyclone公司(货号:SH30256.01)。①取1支流式管,加入CD64-FITC试剂10 μL及100 μL抗凝全血,混匀后避光保存20 min,加入2 mL红细胞裂解液,混匀避光10 min,1 500 r/min离心5 min后弃上清,加入2 mL磷酸盐缓冲液混匀,1 500 r/min离心5 min后弃上清,加入500 μL 磷酸盐缓冲液置于流式细胞仪上检测。②取4.0 mL血促凝,免疫比浊法检测CRP、PCT水平。③留取血标本检测所有研究对象血常规。所有检测项目均按仪器和试剂的说明书进行,且室内质控在控。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0软件进行统计分析,符合正态分布的计量资料以x±s表示,均数比较采用两独立样本t检验,多组间均数比较采用单因素方差分析;非正态分布的计量资料用M(P25P75)表示,比较采用秩和检验。计数资料比较采用χ2检验。相关性分析采用Pearson分析。以P<0.05为差异有统计学意义。同时,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),确定CD64的截断值,计算CD64辅助判断KD患儿合并细菌感染的敏感性和特异性,并对CD64与WBC、Neu%、CRP、PCT行相关分析。

2 结果

2.4 CD64水平对细菌感染预测的敏感度和特异度 以ROC曲线计算得出曲线下面积为0.936,根据约登指数最大时确定CD64判断KD合并细菌感染的截断值为37.5%,敏感度为86.0%,特异度为100%。

表1 治疗前KD组与健康对照组对象WBCNeu%、CRPPCTCD64水平比较

组别例数WBC(×109/L)Neu%CRP(mg/L)PCT(μg/L)CD64(%)KD组6313.77±4.8464.51±14.6056.97±40.770.300(0.104,0.560)73.04±28.02对照组157.38±2.6645.39±10.290.84±1.120.057(0.050,0.059)16.38±10.35t/Z值6.9644.7845.304-4.9017.534P值<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

注:KD为川崎病,WBC为白细胞计数,Neu%为中性粒细胞百分比,CRP 为C反应蛋白,PCT为降钙素原

其二,当地政府有关部门在实施农业生态环境保护的过程中,不仅要注重教育引导,还要制定出农业发展规划,将国家的农业优惠政策落实到位。通过宣传教育,加强农业生态环境保护意识,让农民积极主动地参与到农业环境保护中来。对表现良好的农民,给予必要的奖励。只有提高农民的绿色环保意识,农业才能可持续的健康发展。

表2 典型KD组与不典型KD组对象治疗前WBCNeu%、CRPPCTCD64水平比较

组别例数WBC(×109/L)Neu%CRP(mg/L)PCT(μg/L)CD64(%)典型KD组3812.72±4.7166.36±16.0854.99±46.550.331(0.091,0.552)75.11±24.95不典型KD组2515.59±4.6261.30±11.2060.41±28.710.257(0.133,0.623)67.60±36.26t/Z值-1.8331.333-0.505-0.1360.639P值0.0720.1870.6150.8920.528

注:KD为川崎病,WBC为白细胞计数,Neu%为中性粒细胞百分比,CRP 为C反应蛋白,PCT为降钙素原

KD自1967年在日本首次被报道以来,有超过60多个国家及地区报道了该病的发生,已成为儿童后天性心脏病的最常见原因[8]。由于病因未明,KD的诊断主要依据临床症状,但其症状和许多感染症状相似,因此,在发病初期需鉴别是否合并细菌感染。临床常用的炎症相关指标如WBC、Neu%、CRP等缺乏特异性,在应激、创伤及免疫性疾病中均可有不同程度的升高。PCT是诊断细菌感染的敏感指标,但敏感性有一定限制。许多研究[9-12]表明,在全身炎症反应综合征、脓毒血症等重症全身性感染时,PCT明显升高,但在局部细菌感染时,关于其表达水平变化的研究较少,临床上关于PCT轻度升高无明显指导意义。CD64是能识别免疫球蛋白、介导体液免疫和细胞免疫的IgG Fc段受体I(FcγRI)。正常情况下,CD64主要分布于抗原提呈细胞表面,在中性粒细胞表面几乎不表达;当机体受到细菌感染时,在γ干扰素和中性粒细胞集落刺激因子的刺激下大量表达,4~6 h内水平即可升高[13-14]。有学者[4]通过meta分析发现,中性粒细胞CD64可作为早期细菌感染的指标。Matsui等[15]发现,CD64还具有不受皮质激素、生物制剂影响的优点。

2.2 典型KD组和不典型KD组治疗前相关指标比较 治疗前,典型KD组与不典型KD组WBC、Neu%、CRP、PCT、CD64水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表2。

2.1 KD组治疗前与对照组相关指标比较 KD组WBC、Neu%、CRP、PCT、CD64水平与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

In order to evaluate the performance of the proposed photodetectors, we calculate the absorption coefficient α, a key parameter for determining the detection spectrum of the detector, by equation (1) 34:

3 讨论

2.3 WBC、Neu%、CRP、PCT水平与CD64的相关性分析 CD64与WBC、Neu%、CRP均无相关性(r=0.108,P=0.401;r=0.159,P=0.214;r=0.067,P=0.604),与PCT呈正相关(r=0.445,P<0.001)。

晋东南旱地春玉米土壤封闭除草剂减量施用效果………………………… 常海霞,杜艳伟,牛 卓,宋艳芳,李娇娇,王建梅(90)

本研究结果显示,KD组中性粒细胞CD64的表达水平高于对照组,考虑患儿可能合并细菌感染,但典型KD组与不典型KD组中性粒细胞CD64表达水平无明显差异。典型KD与不典型KD的发病机制相同,均为免疫性血管炎,所以KD组内中性粒细胞CD64表达水平无明显差异。中性粒细胞CD64水平与炎症指标WBC、Neu%、CRP无相关性,分析原因可能是WBC、Neu%、CRP为非特异性指标,在细菌感染及自身免疫性疾病如幼年特发性关节炎、系统性红斑狼疮中均可明显升高,故在免疫性疾病中无法作为判断合并细菌感染的指标,也不能直观反映细菌感染的严重程度。Allen等[16]通过对比自身免疫性疾病患者活动期、非活动期、细菌感染组及非炎症性疾病对照组中性粒细胞CD64表达水平发现,细菌感染组CD64水平较其他几组明显升高,自身免疫性疾病患者活动期、非活动期及对照组的CD64水平基本无表达。由此可见,CD64在免疫性疾病中升高不明显,所以与WBC、Neu%、CRP这些非特异性指标无相关性。其次,KD患儿的PCT与CD64有相关性。中性粒细胞CD64在细菌感染的早期,表达水平明显升高[13-14],可在KD的初期用于判断有无合并细菌感染。同时,本研究由于样本量较少,并发冠脉损害的病例较少,未行相关分析,有待在今后的工作中扩大样本量进行更深层次的研究。

中性粒细胞CD64现已作为公认的细菌感染的敏感指标,在自身免疫性疾病中判断细菌感染的敏感性明显高于WBC、Neu%、CRP等非特异性指标。通过检测KD患儿早期体内中性粒细胞CD64表达水平,可辅助诊断是否合并细菌感染,进而指导临床合理使用抗菌药物。

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高文珺,范晓晨
《安徽医学》 2018年第4期
《安徽医学》2018年第4期文献

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