肝癌是临床上常见的消化道恶性肿瘤之一，中国肝癌的发病率和病死率均居世界前列[1]。该病好发于40岁以上男性，进展缓慢，患者早期易忽视，其典型症状为肝区增大胀痛、消瘦，后续易引发电解质紊乱、重要器官转移以及恶病质衰竭状态等，重者可危及生命[2-3]。microRNA是一种非参与编码的小RNA，可调控机体细胞的分化以及增殖，故其水平与肿瘤的发生及发展密切相关[4-5]。microRNA-200a作为microRNA家族的重要成员之一，可调控肿瘤细胞的基因转录后翻译过程[6]。既往研究显示，其在多种肿瘤细胞中的表达呈下调状态[7-8]；同样，有文献显示，其在多种恶性肿瘤患者血液中的表达亦呈下调状态[9]。而目前对血液和肿瘤组织中microRNA-200a表达与恶性肝脏肿瘤患者预后关系方面的深入研究较少，其在预测恶性肝脏肿瘤患者预后方面的价值尚未得到充分认证。因此，本研究旨在观察microRNA-200a在恶性肝脏肿瘤患者肿瘤组织和血液中的表达，探讨其在预测恶性肝脏肿瘤方面的临床意义，为microRNA-200a广泛应用于恶性肝脏肿瘤患者筛查提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2009年1月至2011年1月就诊于自贡市第三人民医院肝胆外科并行肝癌完整切除术的恶性肝脏肿瘤患者的病历资料。纳入标准：①患者肝脏肿瘤为原发性且无转移；②术前患者肝功能Child-Pugh分级为A～B级，保肝治疗评为A级后接受手术；③经影像学诊断肿瘤无远处转移；④患者接受肝癌根治术，肝脏切除量均在70%内，术后标本均被确诊为肝细胞癌。排除标准：①术后合并重度感染；②合并急性心衰、心源性休克及其他重要脏器疾病。共纳入79例患者作为肝癌组，其中男58例，女21例；年龄41～70岁，平均年龄（55.14±8.68）岁，收集其肝癌组织、癌旁组织、正常肝脏组织及血液样本。癌旁组织取自距离肝癌组织2 cm组织，正常肝脏组织取自距离肝癌组织3～5 cm组织。另外，选择无肝胆原发疾病或影响肝功能的其他疾病且无肿瘤的83例患者为对照组，其中男性49例，女性34例；年龄39～73岁，平均（52.74±10.62）岁。两组患者年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 试剂与方法

1.2.1 试剂RNA提取试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司，反转录试剂盒购自保龄宝生物股份有限公司，实时PCR试剂盒购自上海捷瑞生物工程有限公司。

1.2.2 肝脏肿瘤患者血样采集及组织microRNA提取 所有患者入院后晨起空腹抽取静脉血8 ml，于4℃5000×g条件下离心15 min，-100℃条件下保存血清。利用试剂盒提取总microRNA，并保存于-100℃条件下待检。分别收集肝癌组织、癌旁组织及正常肝脏组织总体microRNA，并将A260/A280比值控制在1.8～2.1。

1.2.3 microRNA反转录 取反转录体系20 μl，并于37℃条件下反应1 h，95℃条件下反应5 min，而后将体系于-20℃条件下保存。

1.2.4 PCR扩增与定量 取扩增体系25 μl，于95℃预变性15 min后，94℃、15 s，55℃、30 s，70℃、30 s条件下扩增40个循环。所有待检测样本均设3个复孔，利用公式△△Ct=试验组（Ct样本-Ct对照）-对照组（Ct样本-Ct对照），得出microRNA-200a在肝癌细胞及肝癌组织和癌旁组织中的表达量，而后对恶性肝脏肿瘤患者血清、肿瘤组织及癌旁组织中的microRNA-200a相对表达量进行分析。

恶性肝脏肿瘤患者肝癌组织、癌旁组织及正常肝脏组织的microRNA-200a相对表达量分别为（0.67±0.18）、（1.68±0.27）、（2.88±0.36），组间比较，差异有统计学意义（F=17.242，P=0.000）。

对79例肝癌患者进行随访，共失访5例，死亡31例，死亡率为41.9%。根据患者结局情况分为死亡组和生存组。死亡组患者肝癌组织microRNA-200a相对表达量为（0.58±0.17），明显低于生存组的（0.72±0.14），差异有统计学意义（t=3.878，P=0.000）。根据两组患者肝癌组织microRNA-200a相对表达量构建预测患者结局的ROC曲线，得到AUC=0.824，最佳诊断切点为0.625，此时敏感度为0.791，特异度为0.645（图1）。根据约登指数确定的切点0.625，将肝癌患者分为高表达组和低表达组。其中，高表达组48例，失访3例，死亡11例；低表达组31例，失访2例，死亡20例。经Log-rank检验，高表达组患者生存情况明显优于低表达组，差异有统计学意义（χ2=15.090，P=0.000）（图 2）。

1.3 评价标准

比较恶性肝脏肿瘤患者与对照组血液标本中microRNA-200a相对表达量；同时分析肝癌患者体内肝癌组织和癌旁组织中microRNA-200a相对表达量。

1.4 肿瘤患者术后处理及随访

采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组比较采用两独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析；计数资料以例数表示，两组比较采用χ2检验；绘制ROC曲线，通过约登指数确定诊断切点；采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，组间比较采用Log-rank检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

肝癌组患者血清microRNA-200a相对表达量为（4.61±1.28），明显低于对照组的（6.20±0.78），差异有统计学意义（t=9.599，P=0.000）。

1.5 统计学分析

肝脏肿瘤患者术后均给予胃肠减压、腹腔引流。术后给予静脉滴注白蛋白20 g，3～5天。密切监测患者血常规、肝肾功能等情况。术后5天根据B超情况拔除腹腔引流管，其他均对症处理。

胃溃疡属于临床多见病，2型糖尿病一旦合并胃溃疡，若治疗不及时，易导致血糖过高所致葡萄糖毒性，损害人体神经系统，进而产生一系列严重后果，比如上消化道出血、溃疡穿孔和幽门梗阻等，严重影响患者生活质量以及身心健康[3]。对于糖尿病患者来说，其尚无根治方法，需终身服药治疗，而长时间服用降糖药物，易导致人体胃酸大量分泌，而大量分泌胃酸易损害人体胃粘膜，继而形成胃溃疡，因此，对于2型糖尿病合并胃溃疡的治疗，应以降糖治疗和抑制胃酸分泌为基础。

2 结果

2.1 血清microRNA-200 a相对表达量的比较

对参与研究的79例肿瘤患者进行为期5年的随访，首次随访时间为治疗结束3个月后，之后每隔3个月门诊复查或电话随访一次。终点事件：患者自入选时间起于随访期间因恶性肝脏肿瘤及并发症导致死亡。原始资料参照患者入院记录，并将末次随访记录作为随访结果，记录患者发病年龄、性别、肝炎及肝硬化病史、甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）水平、肿瘤大小、分化程度、是否转移及TNM分期等。删失定义为患者失访、拒绝访问、中途退出、死于其他与研究无关的原因。

2.2 肝癌组织、癌旁组织及正常肝脏组织microR-NA-200 a相对表达量的比较

会计信息化将企业的生产活动信息流、资金流和物流有效统一，依靠网络软件储存、计算、运用数据，实现了企业内部业务信息与软件管理的有效融合，有利于企业及时获取和整理子公司的财物信息，最终实现财务数据共享。企业会计信息化的实现也能够打破时空界限，满足随时随地查询数据的要求，依靠网络传递的真实性和可靠性，以最快的速度和最少的人力得到想要的数据，这是传统企业会计无法做到的。

在分析了日本增加值出口的地区分布与行业来源之后，我们需要进一步使用SDA方法对其增加值出口变化进行结构分解，这样可以更好地分析其增加值出口变化背后的驱动因素都有哪些。本文选取2003～2005年、2005～2007年、2007～2009年三个时间段进行阶段性分析，具体分解结果如表4所示。

2.3 不同临床特征肝癌患者肿瘤组织及血清中microRNA-200 a相对表达量的比较

肝癌作为常见的消化系统恶性肿瘤，好发于中年男性，发病后除肝区增大胀痛、消瘦等临床经典表现外[10]，亦可引发恶病质衰竭状态等[11]，甚至威胁患者的生命[12]。有文献表示，microRNA在调控机体细胞的分化、增殖方面作用明显，故其水平与肿瘤的发生发展密切相关[13-14]。microRNA-200a作为microRNA家族的重要成员之一，既往文献提示，其在多种恶性肿瘤患者组织及血清中的表达均呈下调状态，而目前对血清和肿瘤组织中microRNA-200a表达与恶性肝脏肿瘤患者预后方面的深入研究较少，为提高恶性肝脏肿瘤切除率，降低其风险，延长患者预期寿命并提高生存质量，对于microRNA-200a在恶性肝脏肿瘤患者肿瘤组织和血液中表达的研究已然成为现阶段临床工作的重点和热点之一[15]。本研究回顾性分析了79例行肝脏肿瘤切除术患者的病历资料，并分别收集其肝癌组织、癌旁组织、正常肝脏组织及血液样本，并选取另外排除肝胆疾病的83例患者作为对照组，比较两组患者血清microRNA-200a相对表达量，结果显示，恶性肝脏肿瘤患者microRNA-200a相对表达量明显低于对照组，这一结果提示microRNA-200a可能具有抑制肿瘤生长的作用，但仍需进一步研究。

2.4 microRNA-200 a相对表达量与患者预后的关系

对湖北省地理国情普查数据进行了地图编制研究，制定了缩编工艺流程，为湖北省103个县市区地理国情普查挂图生产提供技术路线及思路，其成果也为湖北省县市区地理国情普查图数据编辑提供了基础数据和技术支持。

表1 不同临床特征肝癌患者肿瘤组织及血清中microRNA-200 a的相对表达量（ n=79）

血清例数microRNA-200a的相对表达量（±s）肝癌组织临床特征性别男女58 21 0.69±0.11 0.64±0.09 4.66±1.28 4.59±1.33年龄（岁）＞50≤50肝炎或肝硬化病史44 35 0.65±0.09 0.69±0.12 4.58±1.32 4.63±1.38有无48 31 0.71±0.15 0.63±0.18 4.66±1.44 4.60±1.39肿瘤直径（cm）＞5≤5 AFP（ng/L）＞8.1≤8.1是否转移52 27 0.68±0.12 0.64±0.15 4.57±1.53 4.71±1.48 54 25 0.68±0.14 0.67±0.15 3.53±2.04 6.89±1.76是否49 30 0.57±0.15 0.83±0.22 3.61±2.16 6.22±2.51分化程度高中分化低分化TNM分期Ⅰ～ⅡⅢ～Ⅳ31 48 0.81±0.23 0.59±0.17 6.77±2.87 3.29±2.68 54 25 0.66±0.18 0.69±0.17 5.27±2.66 3.21±2.35

图1 肝癌组织microRNA-200 a相对表达量预测肝癌患者（ n=79）结局的ROC曲线

图2 microRNA-200 a高表达（ n=48）与低表达（ n=31）肝癌患者的生存曲线

3 讨论

高中分化及未发生转移的恶性肝脏肿瘤患者肝癌组织中microRNA-200a相对表达量均明显高于低分化及发生转移的患者，差异均有统计学意义（t=4.882、6.245，P＜0.01）；不同性别、年龄、肝炎或肝硬化病史、AFP水平、肿瘤直径及TNM分期患者肝癌组织中microRNA-200a相对表达量比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。AFP水平≤8.1 ng/L、高中分化、未发生转移及TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期的恶性肝脏肿瘤患者血清中microRNA-200a相对表达量均明显高于AFP水平＞8.1 ng/L、低分化、发生转移及TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期的患者，差异均有统计学意义（t=7.097、5.481、4.899、3.317，P＜0.01）；不同年龄、性别、肝炎或肝硬化病史、肿瘤直径患者血清中microRNA-200a相对表达量比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

进一步比较恶性肝脏肿瘤患者肝癌组织、癌旁组织及正常肝脏组织microRNA-200a相对表达量发现，正常肝脏组织microRNA-200a相对表达量高于癌旁组织，而癌旁组织microRNA-200a相对表达量高于肝癌组织。也有研究分析microRNA-200a下调在肝癌组织中较正常组织明显[16]，本研究与报道结果基本一致。

进一步比较患者临床特征与肝癌组织及血清中microRNA-200a相对表达量关系结果提示：高中分化及未发生转移的恶性肝脏肿瘤患者肝癌组织中microRNA-200a相对表达量均明显高于低分化及发生转移的患者，AFP水平≤8.1 ng/L、高中分化、未发生转移及TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期的恶性肝脏肿瘤患者血清中microRNA-200a相对表达量均明显高于AFP水平＞8.1 ng/L、低分化、发生转移及TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期的患者。这一结果进一步提示了microRNA-200a可能具有抑制肝脏恶性肿瘤生长的作用。不同TNM分期及AFP水平的患者microRNA-200a相对表达量在血清中存在差异，而在肿瘤组织中差异不显著，这可能与microRNA-200a不仅在肿瘤中表达有关[17]。

比较肝癌死亡组与生存组的microRNA-200a相对表达量，可见生存组的相对表达量明显高于死亡组，根据ROC曲线确定的诊断切点将患者分为microRNA-200a高表达组和低表达组，经Log-rank检验发现，microRNA-200a高表达组生存情况明显优于microRNA-200a低表达组，更加证明了microRNA-200a表达与肝癌患者预后的关系，但对于microRNA-200a与患者预后相关性的作用机制目前仍未确定。

同时，本研究尚存在不足，研究对象较少，纳入临床特征种类较少。本研究仅能证明microRNA-200a与肝癌患者预后存在一定的关系，但对于两者因果关系的判断还需要进一步证明。

②补偿政策和项目缺乏长效性。国家对汉江中下游的补偿政策大多以规划、项目和工程的方式组织实施，主要补偿建设资金，有明确的时限，因此，补偿缺乏长效性。在由湖北省社会科学院、湖北省环境科学院和武汉理工大学等单位开展的《南水北调中线工程对汉江中下游生态环境影响及生态补偿研究》中估算生态环境和经济社会发展的总损失，一次性损失197.73亿元，年度性的损失达到65.35亿元，发展权限损失(2020年值)156.50亿元。这些损失反映出两个问题：第一，目前所实施的生态补偿政策与地方生态环境建设的需求之间还存在一定的差距和矛盾；第二，汉江中下游的生态补偿政策必须用动态的眼光和思维来加以考虑。

通过本研究证明，恶性肝脏肿瘤患者血清中microRNA-200a相对表达量明显低于对照组正常患者；microRNA-200a在恶性肝脏肿瘤组织相对表达量较癌旁组织、正常肝脏组织明显减低；microRNA-200a表达与肝癌患者预后有关，并且microRNA-200a表达水平越高，患者预后越好。

T检验结果表明，学生除词汇（P=0.194>0.05）和写作规范(P=0.347>0.05)这两项的前后测结果没有显著差异外，其他各项，包括总分都存在显著差易（P值均小于0.05），这表明学生的英语写作能力在多方面得到有效提高，三稿式写作教学模式可有效提高大班教学环境下写作课堂的教学质量。

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