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α胰蛋白酶H4重链在病毒性肝炎相关性原发性肝细胞癌早期预警中的价值

更新时间:2016-07-05

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是原发性肝癌中最常见的类型,占原发性肝癌的70%~90%,在恶性肿瘤中病死率居于第3位,仅次于胃癌和食道癌。90%以上的HCC病例是由慢性肝病发展而来,而其中最主要的是肝炎肝硬化,约占80%以上[1]。美国肝病研究协会推荐采用血清学标志物AFP和超声检查对肝硬化人群进行普查,以提高早期肝癌的检出率,但AFP对HCC的诊断灵敏度只有39%~65%,仅通过AFP进行普查可能会导致漏检[2]。另外,在许多慢性非恶性肿瘤患者血清中AFP浓度也有升高,采用AFP进行HCC筛查也可能导致5%假阳性。早期筛查方法灵敏度不足导致60%以上的HCC患者在晚期才被确诊,错过了治疗的最佳时期,这些被晚期确诊的HCC患者5年生存率<16%,早期接受治疗的患者5年生存率可达到75%以上[3]。如果能及时发现甚至在尚未发生HCC时对肝硬化患者进行预警,进行合适的干预,可以显著降低HCC的病死率。目前,AFP和其他HCC血清标志物在早期预警方面的价值尚不明确。

α胰蛋白酶H4重链(inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain 4, ITIH4)是分子量为120 kDa的血清糖蛋白,由肝脏分泌至血循液环中,属于急性时相反应蛋白。ITIH4在功能上主要参与细胞外基质(extracellular matrix, ECM)成分的分泌和形成调节。目前文献报道,ITIH4可能通过下调IL-6表达从而参与HCC的发生和发展。IL-6通过与其受体结合,继而活化胞内一系列信号蛋白分子,最终实现IL-6反应基因的表达。目前认为IL-6及其受体介导的信号通路与肿瘤的发生、发展、侵袭及转移密切相关[4-5]。在本研究中,通过对病毒性肝炎导致的肝硬化患者进行随访,验证ITIH4作为HCC早期预警和诊断标志物的应用价值。

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1 对象与方法

1.1 对象 109例患者均为解放军第三〇二医院门诊和住院患者,开始研究时间为2013年1月,经过2年随访,研究结束时间为2015年12月。患者纳入标准:①具有5年以上HBV或HCV感染史;②年龄>35岁;③临床明确诊断为肝硬化且排除恶性肿瘤的患者。排除标准:①患者伴随严重的并发症和其他系统性疾病;②接受过与肝病相关的侵入性治疗方案;患者最终诊断通过MRI检查确认,所有患者均签署知情同意书,由医院伦理委员会批准实施。患者经过2年的随访,观察患者是否进展为HCC,诊断结果以MRI检测结果作为金标准,进展为HCC的患者为HCC组,未进展为HCC的患者为非HCC组。

第二,实践部分。组织开展职业规划大赛、职场模拟比赛、简历制作比赛和演讲比赛等,举办求职礼仪讲座、创业俱乐部、杰出校友报告会和企业招聘人员讲座,丰富就业指导实践课的内容。

2.1 随访结果 2组患者入组时基本情况见表1。109例患者随访2年后,共有29例发展为HCC(腹部MRI增强确诊),发病率为26.6%。患者年龄(53.9±9.7)岁,男66例(60.6%),女43例(39.4%)。103例为HBV感染导致肝硬化(94.5%),见表1。

从ROC曲线获得ITIH4预警HCC的诊断界值为12.27 ng/ml,其灵敏度为40.0%,特异度为93.1%;AFP预警HCC的诊断界值为4.76 ng/ml,其灵敏度为86.2%,特异度为41.3%。

1.4 实验操作 ITIH4酶联免疫吸附试剂购自武汉伊艾博科技有限公司,按试剂使用说明书操作,将试剂平衡至室温,加样孔加入样本100 μl,并设置标准孔、空白孔,混匀后,37 ℃孵育120 min,弃去液体,加溶液A100 μl,37 ℃孵育60 min,弃去液体,洗板3次,每孔加溶液B100 μl,37 ℃孵育60 min,洗板5次,加入底物液90 μl,37 ℃避光显色15 min,加终止液50 μl,用酶联仪在450 nm波长检测各孔OD值,并根据标准曲线计算ITIH4浓度。

300余名汽车后市场专家人士出席了本次活动,中国汽车维修行业协会常务副秘书长王逢铃、广东省道路运输协会机动车检测分会会长罗少泽、迪威欧亚董事长刘晓冰分别为会议致辞。会上众多行业领军人物针对维修连锁、汽车配件供应链等话题发表演讲。放心联合认证中心董事长底彦彬发表以中国汽车维修连锁产业发展分析为主题演讲;北京新汽联科技有限公司CEO张科发表了以中国汽车配件产业供应链发展机遇为主题的演讲随后,驷惠科技董事长项展洲介绍了CAASA软件联盟。进入圆桌论坛环节,CAASA成员单位代表围绕“汽车技术企业发展趋势及行业责任”展开深入探讨。汽车照明协会会长秦立庆以维修与供应链场景下的科技创新为题发表演讲。

2 结 果

1.2 随访方案 患者在首次纳入本研究后即进行血清样本采集,随后进行随访,每隔半年进行1次MRI检查,如确诊已进展为HCC,则随访结束,并于确诊时间点再次采集血清样本,如2年内未进展为HCC,则随访研究结束。

表1 HCC组与非HCC组基本情况 Table 1 Basic data of group HCC and non-HCC group

指标 HCC组(n=29)非HCC组(n=80) t/Z值 P值年龄 (岁 ) 57.3±10.3 52.6±9.3 2.265 0.026性别(男/女) 21/8 45/35 2.328 0.127 ALT(U/L) 52.0(20, 253) 35.5(9, 416) -2.847 0.004 ALB(g/L) 31.7±6.5 30.9±6.4 0.598 0.553

2.3 17 例患者发生HCC前后ITIH4和AFP水平变化 将17例发展为HCC的患者入组时首次检测血清和确诊为HCC时的血清ITIH4和AFP水平进行比较,发现患者ITIH4水平在发展为HCC后有所下降(P<0.05),而AFP变化差异无统计学意义。见表3。

1.3 样本采集 清晨空腹禁水状态下抽取肘静脉血约3~5 ml于带分离胶的真空采血干燥管, 离心后分离血清备用。

2.2 ROC曲线分析 HCC组ITIH4水平低于非HCC组(P=0.000),ROC曲线显示其预测HCC的AUC为0.726(P=0.000)。HCC组AFP水平高于非HCC组(P=0.021)。AFP预测HCC的AUC为0.657(P=0.013),小于ITIH4的AUC(P=0.000),见表2和图1。

3 讨 论

鉴于AFP的灵敏度(39%~65%)难以满足临床需求,而影像学和病理学检查价格昂贵,患者依从性差,所以近年来对HCC新的诊断标志物研究成为肿瘤诊断领域的热点。

1.5 统计学处理 用SPSS 17.0软件进行统计分析。定量资料呈正态分布者用±s表示,非正态分布者用中位数(最小值,最大值)表示,2组比较用成组t检验或Wilcoxon秩和检验,发生HCC前后比较用自身配对t检验。用ROC曲线分析ITIH4和AFP对HCC的预测价值。P<0.05表示差异有统计学意义。

在本文的研究中,我们通过2年的随访和样本采集检测工作,积累了HCC患者完整的序列样本,对随访患者血清进行ITIH4浓度检测,发现ITIH4在发展为HCC和未发展为HCC的肝硬化患者血清中存在显著差异,提示ITIH4具有潜在的HCC预警价值。我们同时将ITIH4与临床常用的AFP进行比较,发现ITIH4预警AUC大于AFP,但AFP灵敏度高于ITIH4,而ITIH4的特异度要高于AFP。

1.1.1 纳入文献标准 ①随机或非随机病例对照研究;②研究主题为比较SuperPATH入路THA与传统入路THA的临床疗效优劣;③均有明确的疾病诊断标准;④研究设计合理,统计方法正确;⑤直接报告了手术出血量、手术时间和术后功能评分,或可以通过文中提供的数据进行计算;⑥研究人群年龄为18周岁以上,国籍、种族和病程不限。

ITIH4属于急性时相反应蛋白,是胰蛋白酶抑制物(inter-alpha-trypsin inhibitor, ITI)的一条重链。ITI的重链包括ITIH1~ITIH5,其中ITIH4基因定位于3号染色体短臂,目前被发现与多种实体肿瘤的发生、发展及侵袭以及转移密切相关。ITIH4主要参与ECM的分泌和形成调节。我们在肝硬化患者血清中发现了该蛋白的高表达,可能与该蛋白参与ECM形成有关。ITIH4可能通过下调IL-6表达从而参与HCC的发生和发展,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族成员,通过与透明质酸结合参与ECM稳定形成的过程,该蛋白由肝脏分泌至血液循环中,通过免疫学方法可以测量其在血清中的浓度。很多报道证实ITIH4在各种实体肿瘤中的表达具有差异,有研究发现,通过蛋白质组学定量技术观察大肠腺癌鼠模型血清中的差异蛋白质,发现血清ITIH4浓度在肿瘤发生过程中有显著改变,证实该蛋白具有早期诊断价值[6]。Subbannayya等[7]通过iTRAQ技术发现在胃腺癌的患者中,血清ITIH4水平显著升高。Yang等[8]则通过蛋白质谱技术发现ITIH4是乳腺癌的潜在诊断标志物。Gangadharan等[9]采用2D电泳技术对肝纤维患者和正常对照患者血清蛋白质成分进行研究,也发现了在肝纤维化患者血清中ITIH4浓度也显著升高。Noh等[10]发现ITIH4水平与HCC患者预后显著相关,其数据显示ITIH4浓度在正常对照、肝硬化和HCC患者血清中浓度存在显著差异,肝硬化和HCC患者血清浓度高于正常对照,但HCC患者血清浓度也低于肝硬化患者,说明在HCC发生后,ITIH4表达可能下调,但该报道采用的是横断面研究,其结果缺乏说服力。

表2 HCC组和非HCC组血清AFP及ITIH4水平[中位数(最小值,最大值), ng/ml] Table 2 Serum AFP and ITIH4 levels in group HCC and non-HCC group [M(min, max), ng/ml]

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图1 ITIH4和AFP预测HCC的ROC曲线 Figure 1 ROC curve of ITIH4 and AFP for predicting HCC

A. ITIH4;B. AFP

表3 17例患者进展为HCC前后体内ITIH4和AFP水平[中位数(最小值,最大值),ng/ml] Table 3 Serum ITIH4 and AFP levels before and after the progression of HCC in 17 patients [M(min, max), ng/ml]

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本文采用前瞻性的随访研究,观察了患者在动态发展过程中ITIH4血清浓度的变化,进一步证实了该蛋白水平在发展为HCC后会显著降低,同时对不同结局的样本检测表明,HCC高风险的患者中也存在ITIH4低表达的情况。因此,该蛋白可以作为预警标志物,定期监测可以实现HCC的早发现,对肝硬化患者的预后也可以起到一定的指导意义。但本研究受样本量的影响,其结果存在一定的偏倚,后续研究须进一步扩大样本量,进行大样本、多中心和长期的随访研究,进一步明确ITIH4在HCC早期诊断和预警中的价值。

【参考文献】

[1]Zhang Z, Zhang Y, Wang Y, et al. Alpha-fetoprotein-L3 and Golgi protein 73 may serve as candidate biomarkers for diagnosing alpha-fetoprotein-negative hepatocellular carcinoma[J]. Onco Targets Ther, 2015, 9:123-129.

[2]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会. 原发性肝癌诊疗规范(2017 年版). 传染病信息,2017,30(3): I-XVII.

[3]Hernandez-Gea V, Turon F, Berzigotti A, et al. Management of small hepatocellular carcinoma in cirrhosis:focus on portal hypertension[J]. World J Gastroenterol, 2013, 19(8):1193-1199.

[4]Tang Y, Kitisin K, Jogunoori W, et al.Progenitor/stem cells give rise to liver cancer due to aberrant TGF-beta and IL-6 signaling[J].Proc Natl Acad Sci USA, 2008, 105(7):2445-2450.

[5]Bhanumathy CD, Tang Y, Monga SP, et al.Itih-4, a serine protease inhibitor regulated in interleukin-6-dependent liver formation: role in liver development and regeneration[J]. Dev Dyn, 2002, 223(1):59-69.

[6]Ivancic MM, Irving AA, Jonakin KG, et al.The concentrations of EGFR, LRG1, ITIH4, and F5 in serum correlate with the number of colonic adenomas in ApcPirc/+ rats[J]. Cancer Prev Res (Phila),2014, 7(11):1160-1169.

[7]Subbannayya Y, Mir SA, Renuse S, et al. Identification of differentially expressed serum proteins in gastric adenocarcinoma[J]. J Proteomics, 2015, 127(Pt A):80-88.

[8]Yang J, Xiong X, Liu S, et al. Identification of novel serum peptides biomarkers for female breast cancer patients in Western China[J].Proteomics, 2016 , 16(6):925-934.

[9]Gangadharan B, Antrobus R, Dwek RA, et al. Novel serum biomarker candidates for liver fibrosis in hepatitis C patients[J].Clin Chem, 2007, 53(10):1792-1799.

[10]Noh CK, Kim SS, Kim DK, et al.Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4 as a diagnostic and prognostic indicator in patients with hepatitis B virus-associated hepatocellular carcinoma[J].Clin Biochem, 2014, 47(13-14):1257-1261.

胡高娃,李波,徐飞
《传染病信息》 2018年第1期
《传染病信息》2018年第1期文献

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