猪O型口蹄疫是严重危害我国养猪业健康发展的疫病,是世界动物卫生组织(OIE)规定必须报告的传染病之一，我国规定为一类动物疫病[1-2]。目前，国内外预防和控制该病的主要措施是给易感动物接种疫苗，在我国属于强制免疫病种[3-4]。由于O型口蹄疫流行毒株在不断的变化中，从2010年开始，O型口蹄疫的流行以O/MYA98/BY/2010毒株为主，在韩国、越南、日本等地先后报道出现过疫情[5-6]。目前我国猪口蹄疫的强制免疫选用的疫苗毒株以猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)为主，但在生产实践中由于受多种因素的影响，一些接种过疫苗的易感动物不能达到预期的免疫效果，免疫失败也时有发生，甚至可能发生疫情[7-9]。因此，通过对免疫后的猪进行抗体水平检测，分析评估免疫效果，切实掌握本地生猪O型口蹄疫免疫情况，为更好制定合理的免疫程序提供科学依据，确保不发生区域性猪O型口蹄疫疫情有重要意义。

Finite Element Simulation for Ship Collision Accident Investigation

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗与试验用猪 猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)，中农威特生物科技股份有限公司生产，政府采购苗，批号为H160307J，由贺州市动物疫病预防控制中心供应。选择品种一致，在35日龄～38日龄、体重相近，临床观察1周后确认健康，经检测O型口蹄疫母源抗体在5log2以下(表1)，未经免疫口蹄疫O型灭活疫苗的健康仔猪150头。

1.1.2 免疫剂量与诊断液 按照说明书要求每头每次肌肉注射2 mL。本次试验务必要求操作规范，无失误。操作时由助手保定猪，然后注射者抓住猪耳，根据猪的大小在猪耳根后2 cm～5 cm处垂直入针注射。口蹄疫O型液相阻断ELISA试剂盒，中国农业科学院兰州兽医研究所生产，批号 20160830101-8。

1.1.3 主要仪器 酶标仪由帝肯上海贸易有限公司生产；单道移液器、多道移液器均由德国Tranferspette公司生产。

1.2 方法

比表面积-孔径分析仪，美国Quantachrome Instruments公司，Nova 2000型。

1.2.1 免疫分组和方法 在某一规模猪场(存栏母猪在100头以上)选择90头35日龄～38日龄的试验猪随机分成A、D、G 3组，每组30头；另一规模猪场(存栏母猪50头)选择30头35日龄～38日龄的试验猪随机分成B、E、H 3组，每组10头；某村选择5户散养户，选择35日龄～38日龄的猪各6头，共30头试验猪分成C、F、I 3组(3组中每户2头)，每组10头。标记饲养。

1.2.2 采血日龄 A、B、C 3组分别于第1次免疫后的28、56、84 d前腔静脉采血，收集血清，存于-20℃备检。D、E、H 3组在第1次免疫后28 d前腔静脉采血采血，收集血清，存于-20℃备检。当天进行第2次免疫,在距第1次免疫后的56 d、84 d分别前腔静脉采血，收集血清，存于-20℃备检。C、F、I 3组在第1次免疫后28 d前腔静脉采血，收集血清，存于-20℃备检；当天进行第2次免疫，距第1次免疫后56 d前腔静脉采血，当天进行第3次免疫，距第1次免疫后84 d前腔静脉采血。收集血清，存于-20℃备检。

A、B、C 3组为1次免疫组，即在35日龄～38日龄注射2 mL猪口蹄疫O型灭活疫苗进行第1次免疫接种。D、E、H 3组为2次免疫组，即在第1次免疫后间隔28 d，进行2次免疫，免疫剂量和方法同第1次免疫。C、F、I 3组为3次免疫组，即在第2次免疫后间隔28 d，进行第3次免疫，免疫剂量和方法同第1次免疫。

1.2.3 检测方法与结果判定 采用液相阻断ELISA方法检测，每块板检测按10头份设计，具体操作参照试剂盒说明书。判定标准为：当抗体效价≥6log2，被检血清的免疫抗体为合格；抗体效价<6log2，被检血清的免疫抗体为不合格。

在概念教学中，当遇到学生难以理解的特殊情况的时候，教师就可以以合情推理的形式帮助学生理清概念之间的逻辑顺序关系，从而帮助学生建立长方形与平行四边形概念之间的联系与区别，深化了概念的本质属性，起到了显著的教学效果。在数学教材中，像这样的特殊情况还有许多，教师就可以根据具体学习内容的需要，利用合情推理来帮助学生解决数学问题。

2 结果

第2次免疫后免疫抗体产生情况(表4)和不同免疫次数仔猪产生的口蹄疫抗体效价及合格率(表3)表明，经过第2次免疫接种猪口蹄疫O型灭活疫苗后，距离第1次免疫后56 d检测，免疫抗体总合格率达45%，规模养猪场为47.5%，略高于农村散养户的35%；距离第1次免疫后84 d检测，免疫抗体总合格率达56%，规模养猪场为57.5%，略高于农村散养户的50%。

表1 免疫前试验仔猪母源抗体检测情况

Table 1 Detection of maternal antibody in piglets before immunization

养殖场Farm检测份数Detected number免疫抗体滴度(log2) Immune antibody titer≤3456A规模猪场 Scale pig farm A90622260B规模猪场 Scale pig farm B3023520散养户 Scattered households3025410

表2 1次免疫免疫抗体检测情况

Table 2 Detection of immune antibody after first immunization

组别Groups采血时间/d Blood collection time数量Number抗体合格数Antibody qualified №抗体合格率/% Antibody qualified rateA2830413.356309308430930B281022056103308410330C281011056101108410110D2830413.3E2810110F2810110G2830413.3H2810110I2810110

试验猪均未观察到有食欲减退、跛行等不良反应。第1次免疫后免疫抗体产生情况(表2)和不同免疫次数仔猪产生的口蹄疫抗体效价及合格率(表3)表明，第1次免疫后28 d检测，免疫抗体效价较低，免疫抗体总合格率仅为12.7%，规模养猪场为13.3%，略高于农村散养户的10%；距离第1次免疫后56 d和84 d检测，免疫抗体效价较低，免疫抗体总合格率为26%，规模养猪场为30%，略高于农村散养户的10%。

第3次免疫后免疫抗体产生情况(表5)和不同免疫次数仔猪产生的口蹄疫抗体效价及合格率(表3)表明，经过3次免疫接种猪口蹄疫O型灭活疫苗后，距离第1次免疫后84 d检测，免疫抗体合格率达98%，规模场和散养户免疫抗体总合格率都达90%以上。

3 讨论

3.1 母源抗体效价的高低对仔猪免疫后免疫抗体的产生有影响

按薛新梅等[12]报道的口蹄疫母源抗体对仔猪疫苗免疫的影响看：二次免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株)后一个月，检测到的免疫抗体合格率达85%，平均抗体效价在7.65log2，与我们在2010年至2011年上半年期间(使用OZK / 93 株)的灭活疫苗)检测到的免疫抗体合格率84.17%基本相合；2011年下半年开始使用猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)后，在2011年下半年至2012年日常监测到的二次免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)的断奶仔猪免疫抗体合格率43.67%，抗体滴度不高，离散度较大。本次试验在2次免疫后28 d时，检测结果显示免疫抗体合格率在45%，2次免疫后56 d时，检测结果显示免疫抗体合格率达56%，仍达不到农业部要求的免疫抗体合格率达70%以上的要求。说明猪口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)毒株比以前口蹄疫O型毒株(如OZK/93株)更能降低猪对这种毒株的应答能力，对猪的危害性就更大。

表3 不同免疫次数仔猪的口蹄疫抗体水平及合格率

Table 3 Antibody levels and qualified rates of foot-and-mouth disease in piglets with different immune times

免疫数Immune times检测数Detection №采血时间/dBlood collection time免疫抗体滴度(log2)Immune antibody titer≤345678≥9合计 Total合格数Qualified number合格率/%Qualified rate平均滴度(log2)Averagetiter标准差(log2)SD变异系数/%CV1次免疫First immunization15028624722127001912.73.571.69647.515056161110751013264.221.86644.225084161011832013264.291.88243.872次免疫Second immunization10056122023151713045455.281.88635.72508419128992285661.56526.083次免疫Third immunization5084001491620499881.05013.125

表4 2次免疫免疫抗体检测情况

Table 4 Detection of immune antibody after second immunization

组别Group采血时间/d Blood collection time数量Number 抗体合格数Antibody qualified №抗体合格率/% Antibody qualified rateD5630155084301860E56104408410550F56104408410550G56301550H5610440I5610330

表5 3次免疫免疫抗体检测情况

Table 5 Detection of immune antibody after third immunization

组别Group采血时间/d Blood collection time数量Number抗体合格数Antibody qualified №抗体合格率/% Antibodyqualified rateG843030100H841010100I8410990

3.2 同样的免疫程序，猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)与猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株)不同

未免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗的断奶仔猪体内O型口蹄疫抗体效价与母猪的免疫情况有关，在母猪配种前，加强免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗的断奶仔猪免疫抗体合格率高、持速时间长，到49日龄时，免疫抗体合格率依然可达80%[10-11]。因此，本试验通过母源抗体效价检测，选用母源抗体效价都在5log2以下的试验仔猪。根据当地实际情况，母猪的免疫一般都是间隔4个多月补针，多数未在母猪怀孕前加强免疫。因此，本试验结果在指导生产实践中更具有指导作用，更接近当地的实际情况。

例如，在学习传染病及与免疫的相关知识时，教师可以通过动画的方式为学生展示传染病。比如，流行性感冒是如何在我们的学习生活中进行传播的，同时向学生讲解讲卫生与否对于预防传染病的重要性，而且向学生讲解个人身体素质对于疾病防范的重要性。这不但可以激发学生的学习兴趣，对于学生针对传染病的防范意识以及卫生状况的改善都有着极大的帮助。

（1）增值税的计算和抵扣问题。上文已经提及三种不同的PPP项目付费方式，根据付费方式的不同，增值税的计算方法也不同。譬如，在营改增后，PPP项目增值税计算依旧处于探索实践中，在建设投资问题上的操作方法不同，是否含税的问题对于融资成本影响巨大。智慧城市建设的PPP项目大都集中在轨道交通领域，投资金额巨大，而营改增后建筑业税率上升到10%。所以，怎样取得可抵扣增值税进项税成为项目公司的难题。一旦在建设期内缴纳过高的增值税销项税，会直接降低后期项目建设的资金运用率。而对于某些增值税免征的PPP项目，会出现项目期间增值税无法完全抵扣的问题。

3.3 3次免疫后免疫抗体合格率较高

3次免疫后28 d时，检测结果显示免疫抗体合格率达98%，且免疫抗体滴度保持较高状态，抗体效价达到9 log2，超过农业部要求的免疫抗体合格率达70%以上的要求。且3次免疫后抗体滴度标准差为1.05 log2，变异系数为13.125%，表明群体抗体均衡度高、离散度低，则疫苗的免疫效果就好。

本次试验包括大型养猪场、中小养殖场和散养户，试验结果表明，大型养猪场由于科学养殖水平高，比中小养猪场的免疫情况要好，但差距不是非常明显，农村散养户的免疫抗体合格率与大型养猪场和中小养猪场的100%免疫抗体合格率相比差距较小，3次免疫后免疫抗体合格率达90%，说明3次免疫后，规范操作，不论是大型养猪场、中小养殖场还是散养户，猪口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)灭活苗的免疫抗体合格率都能达到农业部要求的70%以上。

猪口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)毒株毒力强，1次、2次免疫后，猪产生的免疫抗体滴度不高、免疫抗体合格率未能达到农业部要求的70%以上，3次免疫后，免疫抗体合格率可达到80%以上，免疫抗体滴度整齐、离散度低，达到国家要求，若能进行3次免疫，免疫效果将更好，在规模养殖场应大力提倡。由于当前养猪业，要免疫猪瘟、高致病性猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪圆环病毒等疫苗，本试验是在不影响其他病种免疫的情况下进行。因此，对猪口蹄疫O型(O/MYA98/BY/2010株)灭活苗的免疫效果或有影响，但更接近生猪生产的实际情况，对一些不具备检测口蹄疫O型免疫抗体的养殖户制定猪O型口蹄疫(O/MYA98/BY/2010株)的免疫程序具有重要的指导作用。

参考文献：

[1] 罗 燕.用酶联免疫吸附法对猪O型口蹄疫免疫抗体检测及分析[J].四川农业科技,2016(11):49-51.

[2] Fernandez-Sainz I,Medina GN,Ramirez-Medina E,et al.Adenovirus-vectored foot-and-mouth disease vaccine confers early and full protection against FMDV O1 Manisa in swine [J].Virology,2017(502):123-132.

[3] 陈方志,邱伯根,刘道新,等.猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测[J].动物医学进展,2009(8):116-118.

[4] 赵 力,张智鹏,韦选民,等.两种O型口蹄疫灭活疫苗免疫猪抗体消长规律比较[J].中国猪业,2016(9):72-74.

[5] 江 东,周 兵,许志成,等猪口蹄疫O型疫苗免疫效果监测分析[J].中国兽医杂志,2011,47(8):38-40.

[6] 李焕斌,熊爱辉.猪口蹄疫O型灭活疫苗制苗毒株的筛选[J].中国畜禽种业,2016(8):132-134.

[7] Sharma G K,Mahajan S,Matura R,et al.Quantitative single dilution liquid phase blocking ELISA for sero-monitoring of foot-and-mouth disease in India [J].Biologicals,2015,(3):158-164.

[8] 姚怀兵,赵 毅,刘梦丽,等.口蹄疫病毒3C蛋白酶结构与功能及应用研究进展[J].动物医学进展,2017(3):102-106.

[9] 徐正军,程 雷,徐小艳,等.江苏省部分种猪场O型口蹄疫免疫效果监测[J].中国动物检疫,2008(7):40-41.

[10] Sharma G K,Mahajan S,Matura R,et al.Herd immunity against foot-and-mouth disease under different vaccination practices in india [J].Transb Emerg Dis,2016,(26):10-11.

[11] 胡 杰,张步娴,屈素洁,等.不同免疫方式对仔猪高致病性猪繁殖与呼吸综合症、猪瘟、猪口蹄疫三种抗体水平的影响[J].中国动物传染病学报,2014,22(5):61-67.

[12] 薛新梅,鲁梦婷,薛 琴.口蹄疫母源抗体对仔猪疫苗免疫的影响[J].中国兽医杂志,2014,50(8):56-58.