金纳米簇(AuNCs)由于尺寸小、生物相溶性好、光学稳定性好、无毒等优点而得到广泛应用。而AuNCs作为荧光探针展现出的独特光学特性，使其在生物检测和医学诊断中表现出了很好的前景[1]。

小檗碱是黄连、黄柏等中药中含量最多的生物碱。研究表明其具有局部麻醉、抗心律失常、治疗原发性高血压，对痢疾杆菌、链球菌等有较强的抑制作用，并有增强白血球吞噬作用，临床主要用于肠道感染，有较强的体内外抗肿瘤活性[2]。而盐酸小檗碱含量测定是衡量黄连质量的重要指标，其测定方法主要有高效液相色谱法[3 - 5]、薄层色谱法[6 - 7]、双波长扫描法[8]、SDS法[9]、毛细管区带电泳[10]等。本实验经吐温20增敏的金纳米簇(AuNCs)具有很高的稳定性和优良的光学性能，盐酸小檗碱与AuNCs作用使AuNCs团聚，荧光强度降低，据此，建立了AuNCs荧光探针测定盐酸小檗碱的新方法。方法简便、准确、快速，重复性好。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

F-4600荧光光度计(日本，日立公司)；Tecnai G2 F205-TWIN透射电子显微镜(美国，FEI公司)；FTIR8400傅立叶变换-红外光谱仪(日本，岛津公司)。

HAuCl4·4H2O (国药集团化学试剂有限公司)；2-巯基苯并噻唑(天津市光复精细化工研究所) ；盐酸小檗碱(Be -H，国药集团化学试剂有限公司)。实验用水为二次蒸馏水。

盐酸小檗碱片(东北制药集团沈阳第一制药有限公司)；黄连、黄柏均购自于山西省忻州市五台山大药房。

1.2 实验方法

1.2.1 AuNCs的合成 分别准确吸取15 mL 0.4 g·L-1的HAuCl4溶液，20 mL 1.0×10-3 mol·L-1的D -甘露糖溶液，10 mL 1.0×10-2 mol·L-1的2-巯基苯并噻唑溶液，置于100 mL的锥形瓶中，摇匀。将锥形瓶放入数控超声波清洗器中，设置温度为40 ℃、水位高为80 cm、功率为8 0Hz、超声50 min，即制得AuNCs。

大学校园文化是一个国家和民族先进文化的重要组成部分，是广大师生员工共同的生活家园和精神家园，承载着重要的育人使命。先进校园文化是引领时代精神特质、彰显大学特色的文化，具体表现为思想深刻、精神激励、制度先进、环境高雅、师生行为文明[9]。培养当代大学生的社会责任感，必须坚持以大学校园为主阵地，着力营造以责任感为表征的校园文化，把责任感教育纳入每个教师的教育教学中，纳入日常的实践活动中，不断建立健全学生责任感教育的长效机制和社会大环境。要以成人成才奉献为思想脉络，努力体现时代性、层次性、针对性和实效性，构建更为开放、灵活、实效的责任教育体系，帮助学生提高对责任的理想自觉[10]。

1.2.2 盐酸小檗碱(Be-H)的测定 精确吸取0.5 mL AuNCs溶液，1 mL吐温20溶液，2 mL pH=7的乙酸缓冲溶液，加入不同浓度的Be-H溶液于10 mL的比色管中，用二次蒸馏水定容，在激发波长和发射波长为346/532 nm处测定荧光强度F。计算:ΔF=F0-F,其中F0为未加Be-H时体系的荧光强度。

(4)实施任务计划：创业团队制定好任务计划后，开始实施计划方案，根据计划流程分步骤实施任务，其主要内容为：制作消费者需求调查表，实施线上线下市场调研，撰写调研报告等。教师首先要了解学生的任务计划，指导学生执行，鼓励学生去尝试，观察学生实施过程等，尽量多的和学生进行交流沟通，引导学生有效实施任务计划。

2 结果与讨论

2.1 AuNCs的透射电镜和红外光谱表征

他一边跟人说着话，一边一本本地摸着，当摸到第三本时，一下子停住了手，心跳急速加快了。这本档案是市卫生防疫站的改革方案，总共6页，有两页像是让他眼睛发亮的纸。他当即打了借条，把那本档案借了回去。

一字不少地抄袭是极罕见的，现在主要的抄袭行为是段抄和句抄。段抄，是将一篇文章中一整段文字照搬过来。由于互联网发达，信息资源丰富，不少作者写文章东复制一段，西复制一段，就构成了一篇论文。句抄与段抄本质上是一样，不过作者为了避免被人发现，在每段中间添加了一些自己的文字。

由图1透射电镜(TEM)图可以看出，制备的AuNCs为比较规则的球形，直径为1.7～1.9 nm。由图2红外(IR)光谱图可知：D -甘露糖在2 950 cm-1的O-H 伸缩振动吸收峰向高波数方向移动；1 760 cm-1为C=O的伸缩振动吸收峰，690 cm-1为C-H的峰，D -甘露糖分子和AuNCs均含有两种类型的羧基，但AuNCs均减弱。

图1 AuNCs的透射电镜(TEM)图 Fig.1 TEM image of AuNCs

图2 AuNCs和原料的红外(IR)光谱图 Fig.2 IR spectra of AuNCs and ram material

2.2 AuNCs和实验体系的荧光光谱

分别配制1.0×10-3 mol·L-1 2-巯基苯并噻唑溶液，1.0×10-4 mol·L-1D -甘露糖溶液，一定浓度AuNCs溶液，1.0×10-5 mol·L-1的Be-H溶液，在室温下放置20 min后，在激发波长为346 nm，发射波长为532 nm下测量各自的荧光强度。从图3曲线1可知，2-巯基苯并噻唑发射波长441 nm，曲线2说明D -甘露糖没有荧光，由曲线3可知AuNCs发射波长为532 nm，说明原料对AuNCs的荧光没有影响。图4曲线1为AuNCs，曲线2为AuNCs-Be -H的体系，说明Be -H可使AuNCs荧光猝灭，曲线3说明Be -H在532 nm处没有荧光。

对新任教师来说，如何将专业知识转化为教学知识并进行有效教学是迫切需要解决的问题。基于工作绩效改进的课程设计以教学设计与实施为主线，以学科核心教学内容为载体，围绕如何优化一节课展开备课、设计、听评课等活动。学员通过设计课例、实施课例、讨论反思课例、修改课例的行动研究方式，随着课程的进展，最终形成一个完整的教学设计方案。培训课程的整体设计分为三个层次和五个阶段，即教学设计、教学实施、教学反思三个层次，集中理论学习、分组实践指导、观摩展示交流、学习效果测评、梳理总结反思五个阶段。

图3 AuNCs体系的荧光光谱图 Fig.3 The fluorescence spectra of AuNCs system

图4 测定体系的荧光光谱 Fig.4 The fluorescence spectra of measurement system

2.3 反应机理

根据实验方法，分别试验了表面活性剂CTMAB、OP乳化剂、吐温80、吐温60、吐温20、SDS表面活性剂对AuNCs荧光强度的影响。结果表明吐温20的增敏效果最好,所以本实验选定吐温20为增敏剂。同时准确吸取不同浓度的1∶5 000(V/V)的吐温20溶液进行实验，结果表明吐温20用量为1 mL时ΔF最大，所以本实验选用体积比为1∶5 000的吐温20溶液1 mL。

图5 AuNCs和盐酸小檗碱的作用机理 Fig.5 The mechanism of interaction between AuNCs and the berberine hydrochloride

2.4 AuNCs对Be -H的选择性

[5] LIU C J.Chinese Traditional Patent Medicine(刘存军.中成药),2007,29(12):1864.

2.5 表面活性剂的种类及用量的选择

图6 AuNCs对不同物质的响应 Fig.6 Response of AuNCs to different compounds

通过D -甘露糖还原法制备的AuNCs其溶液在532 nm波长处有荧光，粒子外层被过量的D -甘露糖所包围而显一定负电性，稳定剂2-巯基苯并噻唑通过Au-S键而使粒子也带上负电，它容易和正电荷物质发生静电作用，使AuNCs粒径变大，随着粒径的增大，AuNCs荧光强度也随之降低。由于电性关系，Be -H与AuNCs作用，导致AuNCs荧光强度降低。据此，可以实现对Be -H的测定。

2.6 pH对体系的影响

以乙酸缓冲溶液为介质，调节测定体系的pH，研究pH对体系的影响。ΔF随pH的升高先增大后减小，当pH=7时，ΔF最大，故选择pH=7的乙酸缓冲体系为反应介质。

抓住机遇，深入研究国际文化传播和运行特点，挖掘提炼适合国际传播的亳文化，重点扶持富含亳文化的文化产品和服务，扶持历史悠久、特色鲜明的中医药、休闲养生、药膳美食等企业国外经营发展，鼓励有条件的亳文化企业开展跨国经营，努力在满足消费中使国外受众认同和喜爱亳文化。同时，重视文化产品的创作，研发具有亳州地域特色的优秀文化产品，建立文化产业聚集区，提高文化产业的规模化、专业化水平和整体实力，不断增强亳州文化产业的国际竞争力。

2.7 反应时间和温度对体系的影响

体系在5 min后反应完全，并且在30 min内ΔF基本不变，为方便测定故实验选择在10 min后测定。设定不同的温度：20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃，进行反应7 min，用流水冷却3 min。结果表明：不同温度条件下ΔF保持相对稳定,故实验选择在室温下进行。

2.8 标准曲线与检出限

按实验方法配制0、0.05、0.06、0.08、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0 μmol·L-1Be -H溶液，以未加Be -H溶液的空白溶液作参比，于激发波长346 nm处测定荧光强度。实验结果表明，Be -H的浓度在5.0×10-8～4.0×10-6 mol·L-1范围内的线性回归方程为：ΔF=332.1c+99.7(c:μmol·L-1)，相关系数r2=0.9935。求得其标准偏差(S)为0.854，利用3S/K公式求得检出限为7.7×10-9 mol·L-1。

2.9 样品的测定

参考文献：

表1 样品测定结果和回收率

Table 1 Determination results of sample and recoveries

SampleContent(μmol·L-1)Added(μmol·L-1)Found(μmol·L-1)Recovery(%)Berberinehydrochloride0.790.401.191000.801.5797.51.602.3799Rhizomacoptidis0.540.250.791000.501.051021.000.64100Cortexphellodendri0.380.200.591050.400.77980.801.19101

3 结论

本实验在水溶液中以2-巯基苯并噻唑为稳定剂，D -甘露糖为还原剂，HAuCl4为原料，在80 Hz的超声波下制备AuNCs，用荧光光谱研究了经吐温20增敏的AuNCs作为荧光探针对中药盐酸小檗碱的检测。结果表明在中性环境中，室温下反应10 min后，体系荧光强度下降，且荧光强度在一定范围内与盐酸小檗碱的浓度成正比，线性范围为5.0×10-8～4.0×10-6mol·L-1，检出限为7.7×10-9 mol·L-1，回收率为97.5%～105%。

[3] XIA Q,LI C M.Chinese Traditional Patent Medicine(夏荃,李灿明.中成药),2008,30(7):1018.

取盐酸小檗碱片10粒,研细,称取40 mg细粉至烧杯中，加沸水适量使其溶解，冷却至室温，过滤后，移取滤液1 mL定容到100 mL容量瓶中。中药的处理：称取过筛的中药细粉2 g，加入40 mL无水乙醇和20 mL二次蒸馏水，在70 Hz功率下，超声提取数次，过滤，滤液定容到100 mL容量瓶中[11]。按实验方法测定，结果如表1。

[1] Liu D B，Chen W W，Wei J H.Analytical Chemistry，2012，84：4185.

[2] Zheng J，Zhou C，Yu M X.The Royal Society of Chemistry，2012，4：4073.

[11]Nation,P.(2001a).Learning vocabulary in another language．Cambridge：Cambridge University Press.

[4] XU Y,ZHOU S W,TANG J L,et al.Journal of Third Military Medical University(徐颖,周世文,汤建林,等.第三军医大学学报),2007,29(2):179.

为了确认AuNCs对Be -H的选择性，对Be -H及其它一系列有机物及中药中常见物质的干扰进行测定。由图6可知，在1.0 ×10-6 mol·L-1相同浓度下，Be -H可以跟AuNDs作用，使其荧光猝灭。F/F0值的巨大差异表明了AuNCs对Be -H的良好选择性。

给更多的人创造机会，让员工在相对公平的环境中竞争角逐，竞争是生存的法则，只有竞争才能出优秀的成果，才能发现人才，才能让基层工作者感觉到自身的价值以及享受自己的成就。

[6] YU H Y,TANG Y J,WANG W B,et al.China Journal of Chinese Materia Medica(虞和永,汤永玖,王文博,等.中国中药杂志),2004,29(9)：

[7] Liu J M，Chen J T，Xiu P Y.Analytical Chemistry,2013,85:3238.

[8] WU C I,WU W X.Acta Chinese Medicine of He Nan(吴成立,吴卫新.河南中医药学刊),2000,15(5):43.

[9] XU Y Y,MAO S Z.Chinese Journal of Hospital Pharmacy(徐英瑜,毛书征.中国医院药学杂志),2001,21(12):27.

[10] Li S R.Chemical Physics Letters,2013,76:561.

[11] Wu X，He X X.The Royal Society of Chemistry,2010,2:2244.