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PTEN、PI3K、AKT蛋白在子宫内膜息肉中的表达及意义*

更新时间:2009-03-28

子宫内膜息肉(endometrial polyps,EP)是最为常见的妇科良性疾病之一,在育龄期主要表现为月经异常、不孕等,在围绝经期及绝经期易诱发癌变,且容易复发。临床上处理EP 的金标准是宫腔镜下摘除[1]。近几年研究发现,手术联合药物治疗可有效预防复发[2],而药物治疗需从发病机制入手,且至今对于EP的发生机制仍不清楚。近年来对信号传导通路与细胞增殖异常的发生发展研究已成为热点。羧基磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号传导通路参与细胞生长、增殖、分化调节。PTEN是一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在各种子宫内膜疾病中,被提高到子宫内膜“看家基因”的高度[3]。PTEN、PI3K、AKT 基因在细胞增殖、分化和抗凋亡过程中发挥重要作用。目前PTEN、PI3K、AKT蛋白是否参与EP的形成还未明确。本研究应用免疫组化方法检测PTEN、PI3K、AKT蛋白在EP中的表达,分析它们之间的关系,探讨其在EP发病机制中的意义。

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1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年10月至2017年3月在本院行宫腔镜EP摘除术,术后病理证实为EP患者30例(EP组),平均年龄(31.56±4.908)岁;同时,取息肉周围部位0.5~1.0 cm肉眼观无异常的子宫内膜组织,即息肉周围内膜组织25例(EP周围组),平均年龄(31.56±4.576)岁;对照组为不孕症患者行宫腹腔镜手术行子宫内膜微刺激术刮取内膜组织,病理证实为增殖期子宫内膜者25例,平均年龄(29.16±4.441)岁。本研究经患者及医院伦理委员会同意、批准,并签署知情同意书,年龄小于45周岁,除外妊娠及哺乳、内分泌疾病、生殖道肿瘤,近3个月未服用过激素类药物和进行宫腔操作。

1.2 主要试剂 PTEN兔抗人抗体、PI3K(p85α亚型)兔抗人抗体、AKT1兔抗人抗体、免疫组化SP试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司,DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 方法 免疫组化SP法检测PTEN、PI3K、AKT蛋白的表达:术中获取的组织标本放入10%多聚甲醛液中固定,制备石蜡包块,制成4 μm 切片,每份标本5张,其中3张分别进行3个指标的检测,一张做阴性对照,另外一张备用。行免疫组化检测时,每次染色均同步设阴性对照,用磷酸盐缓冲液(PBS) 代替一抗作为阴性对照。实验方法及结果判断:参照文献[4]阳性对照采用已知阳性片为标准,阴性对照采用PBS取代第一抗体。观察PTEN、PI3K、AKT蛋白的分布和阳性率。PTEN、PI3K(p85α)蛋白的阳性表达为细胞胞质呈现棕黄色,AKT蛋白的阳性表达为胞核呈现棕黄色或棕褐色。在此基础上,先按染色强度计分:0分为无色,1分为浅黄色,2分为棕黄色,3分为棕褐色;再在高倍镜下取4个不同视野,各计数200个细胞,按阳性细胞所占的百分比计分:0分为阴性,1分为阳性细胞≤10%,2分为11%~50%,3分为51%~75%,4分为>75%,染色强度与阳性细胞百分比的乘积≥2分为免疫反应阳性(+),否则计为免疫反应阴性(-)。

1.4 统计学方法 采用SPSS 17.0 统计软件,计量资料以表示,多组间比较采用单因素方差分析,计数资料采用2检验,相关性应用Spearman 等级相关分析,P<0.05时认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PTEN、PI3K和AKT蛋白在EP腺上皮细胞和间质细胞中的表达情况 PTEN、PI3K蛋白主要在EP中腺上皮细胞胞质深染,AKT蛋白在EP中腺上皮细胞胞核呈深染;阴性对照:EP中腺上皮细胞和间质细胞均呈蓝色。见图1。

  

A:PBS阴性对照;B:PTEN蛋白在EP中的表达;C:PI3K蛋白在EP中的表达;D:AKT蛋白在EP中的表达

 

1 PTEN、PI3KAKT蛋白在EP中的表达(SP,×400)

2.2 PTEN、PI3K和AKT蛋白在各组中的表达 EP组中PTEN蛋白阳性表达率显著低于EP周围组和对照组,EP组中AKT蛋白和PI3K蛋白阳性表达率显著高于EP周围组和对照组;EP周围组与对照组在PTEN、PI3K、AKT蛋白比较结果差异无统计学意义。见表1。

 

1 PTEN、PI3KAKT蛋白在各组织中的表达例(%)

  

项目例数PTENPI3KAKTEP组3010(33.3)20(67.7)25(83.0)EP周围组2517(68.0)6(24.0)6(24.0)对照组2518(72.0)9(36.0)9(36.0)2值26.78410.97526.553P值0.0000.0040.000

2.3 PTEN、PI3K和AKT蛋白在各组中评分情况 PTEN蛋白在EP组中评分低于EP周围组和对照组,PI3K、AKT蛋白在EP组中评分高于EP周围组和对照组,差异有统计学意义; PTEN、PI3K和AKT蛋白在EP周围组和对照组中差异无统计学意义。见表2。

2.4 EP组中PTEN、PI3K和AKT蛋白的关系 在EP组中AKT和PTEN蛋白的表达呈负相关(r=-0.457,P<0.05),PI3K和PTEN蛋白呈负相关(r=-0.533,P<0.05),PI3K和AKT蛋白呈正相关(r=0.405,P<0.05)。

 

2 PTEN、PI3KAKT蛋白在各组织中评分情况

  

项目例数PTENPI3KAKTEP组301.495±0.5571.965±0.4682.097±0.485EP周围组252.038±0.3931.458±0.4521.396±0.485对照组252.220±0.5081.548±0.5781.678±0.564F值16.1728.65114.164P值0.0000.0010.000

3 讨论

EP的发病机制至今仍不十分清楚,目前研究认为与遗传因素、甾体激素受体局部失衡、增殖与凋亡失调、慢性炎症刺激、某些药物影响、细胞因子等有关[5]。近几年关于EP存在细胞增殖与失衡的研究越来越受重视,PTEN/PI3K/AKT信号通路蛋白参与细胞增殖、分化、凋亡等多种功能。PTEN作为一种具有双重磷酸酶活性的蛋白, 去磷酸化阻断AKT 的作用,阻止细胞进行分裂,并导致细胞凋亡。PTEN 的突变或者缺失将使PI3K 增加,AKT 活性增强从而促进细胞生长、转化、迁移、代谢以及血管生成[6]。PI3K的作用是将生长因子等刺激性信号由细胞膜转导至胞浆。PI3K 具有调节细胞新陈代谢、增殖、凋亡的作用,是传递信号的重要信使,PI3K 参与AKT 依赖性信号通路的活化[7]。AKT是PI3K主要下游效应分子之一,活化的AKT能通过调节转录因子,从而减少细胞凋亡,提高蛋白质翻译过程,调控细胞周期。尤其是在异常增殖的恶性疾病,PTEN/PI3K/AKT信号通路活化可以抑制多种刺激诱发的细胞调亡,促进细胞周期进展,从而促进细胞的生存和增殖,同时参与血管形成,在异常增殖恶性疾病形成中扮演重要角色,而在EP中少有报道。

本研究发现,PTEN蛋白在EP组中表达显著低于对照组及EP周围组,PI3K、AKT蛋白在EP组中表达显著高于对照组及EP周围组,差异有统计学意义(P<0.05),推测在EP形成中存在PTEN蛋白低表达或缺失并伴随有PI3K、AKT蛋白过表达。本研究还显示: 在EP组中AKT蛋白和PTEN蛋白的表达呈负相关,PI3K蛋白和PTEN蛋白呈负相关,PI3K蛋白和AKT蛋白呈正相关,说明在EP发生发展过程中,PTEN蛋白表达的减少对细胞的凋亡抑制作用减弱,从而刺激PI3K、AKT蛋白高表达,使细胞增殖增加,进而导致子宫内膜局部细胞增殖过度,细胞凋亡减少,促进了子宫内膜的不断增殖,进而发展成EP。类似的郝国荣等[8]采用免疫组化SP法检测EP组织中PTEN 蛋白的表达,发现PTEN 基因在观察组中较对照组表达降低。同时有研究证实,将小鼠敲除PTEN 基因后,会发生子宫内膜复杂性增生、不典型增生甚至癌变[9];虽然EP被视为是子宫内膜局部良性增生性疾病,但也可能存在恶变风险。国外研究报道EP恶变率在0~12.9% [10]之间,国内也报道绝经后EP 恶变的概率为1.7%[11],且随着子宫内膜不典型增生程度的增加,PTEN蛋白的阳性表达率也随之减低[12]。说明PTEN蛋白表达缺失或下降,对细胞生长、增殖的负调控起推动作用,促进EP向恶性增殖的方向发生发展。

本研究说明了在EP形成过程中存在细胞增殖、凋亡失衡,故在药物治疗上,可适当使用具有促进子宫内膜凋亡、萎缩的药物,而目前较多学者认为在EP中孕激素受体低表达,因此可增加宫腔内孕激素含量,恢复局部内膜组织激素平衡状态,从而预防息肉的形成与复发。有研究表明,左炔诺孕酮宫内缓释系统(LNG-IUS)可通过抑制在位内膜的增殖促进其凋亡,诱导内膜形态萎缩的同时使内膜功能亦处于低落的状态,从而预防息肉复发。目前有研究发现通过宫腔镜息肉摘除联合LNG-IUS,可增加局部子宫内膜孕激素含量,从而治疗EP并减少术后息肉复发[2,13]

电子天平(感量0.01 g)引入的不确定度包括示值误差和重复性引入的不确定度。根据电子天平的检定证书,0~50 g量程时示值最大允许误差为±0.05 g,取均匀分布的标准不确定度为重复性最大允许误差为±0.15 g,取均匀分布的标准不确定度为

综上所述,在EP中PTEN蛋白表达缺失伴随PI3K、AKT蛋白过表达,说明在息肉的形成过程中可能是局部子宫内膜细胞过度增殖、凋亡减少所致。但由于标本例数不多,且缺乏体外机制的研究,故今后应加大研究的样本含量和扩大在体外细胞机制的研究,并将基础研究与临床结合,更好地探究EP的发病机制,为预防EP复发、治疗提供方向和理论依据。

参考文献

[1] American Association of Gynecologic Laparoscopists (AAGL): Advancing Minimally Invasive Gynecology Worldwide. AAGL practice report: practice guidelines for the diagnosis and management of submucous leiomyomas[J]. J Minim Invasive Gynecol, 2012, 19(1): 152-171.

[2] 艾冬梅. 子宫内膜息肉切除术后辅助应用左炔诺孕酮宫内缓释系统治疗后雌激素受体和孕激素受体的表达[J]. 中国妇幼保健, 2016, 31(7): 1496-1498.

[3] Tang JM, He QY, Guo RX, et al. Phosphorylated Akt overexpression and loss of PTEN expression in non-small cell lung cancer confers poor prognosis[J]. Lung Cancer, 2006, 51(2): 181-191.

[4] 程佳, 杨晓龙, 寻志杰, 等. 卵巢上皮性癌中p-AKT、PI3K和PTEN蛋白的表达及意义[J]. 河北医药, 2014, 36(4): 501-504.

[5] 黄丽华, 向梅. 子宫内膜息肉研究新进展[J]. 国际妇产科学杂志, 2014, 41(1): 43-46.

[6] Macfarlane LA, Murphy PR. MicroRNA: Biogenesis, Function and Role in Cancer[J]. Current Genomics, 2010, 11(7): 537-561.

[7] Karar J, Maity A. PI3K/AKT/mTOR Pathway in Angiogenesis[J]. Front Mol Neurosci, 2011, 4: 51.

[8] 郝国荣, 白凤楼. P63及 PTEN 在子宫内膜息肉中的表达及意义[J]. 河北医药, 2016, 38(3): 376-378.

[9] Chu EC, Tarnawski AS. PTEN regulatory functions in tumor suppression and cell biology[J]. Med Sci Monit, 2004, 10(10): RA235-RA241.

[10] Lieng M, Istre O, Qvigstad E. Treatment of endometrial polyps: a systematic review[J]. J Minima Invasive Gynecol, 2010, 89(8): 992-1002.

[11] 罗锦花, 周丽, 关铮, 等. 236例绝经后子宫内膜息肉的临床资料分析[J]. 中国妇产科临床杂志, 2017, 18(1): 20-22.

[12] 钟长晔, 蒋凤艳. PTEN蛋白在子宫内膜息肉中的表达研究[J]. 广西医科大学学报, 2015, 32(2): 254-256.

[13] 陈勇, 张少霞, 陈小燕. 左炔诺孕酮宫内缓释系统在预防宫腔镜术后息肉复发中的应用[J]. 广东医学, 2014, 35(14): 2213-2215.

 
覃丽渊,孙燕
《广东医学》 2018年第09期
《广东医学》2018年第09期文献

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