0引言

年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)是与年龄相关的慢性进展性致盲眼病，是引起老年人群中心视力损害的主要原因，随着我国人口老龄化日趋加重，AMD患病率逐年上升[1]。临床上将AMD分为干性和湿性两种类型，其中湿性AMD是指多种因素诱导黄斑部视网膜下脉络膜新生血管生成，继而引起出血、渗出等病理改变，湿性AMD病程较长，且尚无较好的根治方法，严重影响患者的日常生活质量[2]。高温必需因子A-1(high temperature factor A-1，HTRA1)属于热休克丝氨酸蛋白酶家族，在人类基因组中高度保守，其编码的蛋白质广泛表达于视网膜上，参与细胞外基质蛋白多糖降解和抑制转化生长因子β分泌，且参与炎性反应与血管生成[3]。近年来，随着人类基因组测序的完善以及单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)单体型图谱的构建，SNPs已广泛应用到患病风险的关联分析中[4]。有研究表明，HTRA1基因的rs11200638、rs2248799多态性与湿性AMD发病有显著关系[5-6]。本研究以汉族人群湿性AMD患者和正常健康者为受试对象，分别将其设为病例组与健康组，选择HTRA1基因多态性位点，采用Sequenom质谱分析平台分析HTRA1多态性与汉族人群湿性AMD遗传易感性的关系，现报告如下。

2000多年后的今天，在这片具有改革基因的土地上，又一位成功的改革家脱颖而出。邯郸市中心医院院长张学强以壮士断腕的勇气，打破了思维固化的藩篱，仅用三年时间，新上系统10多个，系统改造100多项，业务流程再造20多个，分批实现了行政办公无纸化、门诊业务无纸化、住院业务无纸化，全部实现无纸化医院目标，成为河北省首家全面开展“无纸化”的医院，其信息化综合能力在国内处于一流行列。

1对象和方法

1.1对象 选取本院2014-05/2017-01收治的汉族湿性AMD患者201例作为病例组，其中男105例，女96例；年龄60～83(平均70.38±5.89)岁。选取汉族正常健康者201例作为健康组，其中男105例，女96例；年龄60～83(平均70.38±5.89)岁。纳入标准：(1)病例组患者符合湿性AMD诊断标准[7]，且经眼科详细检查(光学相干断层扫描、荧光素视网膜血管造影等)确诊；(2)健康组受试者经检查眼底正常，无AMD家族史，无血液疾病、肾功能不全、良恶性肿瘤，无青光眼、白内障、视网膜血管阻塞、高度近视、视神经病变、视网膜脉络疾病、视网膜脱离及其它眼部疾患。排除标准：干性AMD、卵黄样黄斑变性晚期、高度近视性脉络膜新生血管(CNV)、视网膜血管阻塞、青光眼、脉络膜视网膜炎、白内障、Stargardt病、糖尿病视网膜病变等其它眼疾。两组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究取得医院伦理委员会批准，受试者均知情同意并签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1实验材料 (1)实验试剂：QIAamp DNA Blood Mini Kit(德国Qiagen公司)、琼脂糖(杭州琼盛有限公司)、50×TAE(碧云天有限生物科技公司)、DNA Marker(天根生化科技有限公司)、iPLEX Pro Reagent Kit(美国Sequenom公司)；(2)实验仪器与设备：MVS-T涡旋振荡器(北京北德科学器材有限公司)、水平琼脂糖电泳槽与稳压电泳仪(北京六一仪器厂)、多用凝胶成像分析系统(美国BIO-RAD公司)、MassARRAY与MassARRAY Nanodispenser RS1000芯片点样仪(美国Sequenom公司)、NanoDrop2000c紫外分光光度计(美国Thermo公司)。

面对新时期的民间美术艺术传承需要，高校与社会须建立更为密切的合作，实现文化资源向文化资产的有效转化，为民间美术提供更好的成长、生存空间。民间美术的传承需要把握与平衡地域文化、高校科研能力、社会资源之间的关系，用灵活的产学研模式，实现文化、科技的创新融合，将文化转化为经济，满足现代社会对文化资源的需求。

湿性AMD是与年龄相关的、多基因的眼部疾病，有高度遗传特性，可导致中心视力进行性损害，居于老年人群致盲性眼病首位[8]。湿性AMD的发生与环境因素及遗传因素有关，且遗传因素是个体发病的基础。目前，关于湿性AMD的发病机制尚未有明确结论，其临床治疗多以消除和抑制新生血管生成为主，但治疗效果并不理想，严重威胁患者的社会生活，给家庭和社会带来沉重的负担[9]。HTRA1是染色体10q26上的基因，其过度表达能够破坏Bruch膜的完整性，促使毛细血管侵入视网膜，出现与湿性AMD相类似的临床改变[10]。有研究表明，HTRA1基因rs11200638、rs2248799与AMD显著相关，可增加湿性AMD患病的风险，且HTRA1多态性强，是高危遗传易感位点[11]。SNP是遗传标记，其具有易于分型、遗传稳定、分布广、数量大、高通量检出等特点，通过对候选基因SNPs的对比，对某个群体中特定基因的基因频率、特定位点上的基因型及表型差异进行分析，可能提示湿性AMD的发病机制，有利于指导湿性AMD的治疗及预防[12]。

1.2.2采集血样和提取基因组DNA 采集研究对象静脉血4mL并给予抗凝处理，置于-80℃冰冻保存备用。提取DNA前，将血标本置于室温解冻，并分装于1.5mL的EP管中，根据QIAamp DNA Blood Mini Kit试剂盒操作步骤提取DNA。

2.2两组研究对象等位基因分布比较 病例组rs11200638位点危险性等位基因A的频率(69.7%)明显高于健康组(45.8%)，差异有统计学意义(P<0.01)；病例组rs2248799位点危险性等位基因T的频率(73.6%)明显高于健康组(52.5%)，差异有统计学意义(P<0.01)，见表2。

2.3rs11200638和rs2248799的基因型与湿性AMD患病风险关系比较 分别对rs11200638位点AA、AG和GG基因型赋值为1、2、0，对rs2248799位点TT、TC和CC赋值为1、2、0，代入Logistic多元回归分析模型，可得rs11200638基因型AA、AG的OR值分别为5.36、3.45，二者均是AMD发病的危险因素(P<0.01)；rs2248799基因型TT、TC的OR值分别为2.36、1.98，二者均是AMD发病的危险因素(P<0.01)，见表3。

1.2.5观察指标 检测两组研究对象HTRA1基因rs11200638、rs2248799的等位基因分布及基因型分布，并观察分析其等位基因及基因型分布与湿性AMD患病风险的关系。

统计学分析：采用SPSS19.0统计学软件分析相关检测结果。两样本等级资料的比较采用秩和检验，两样本基因型频率的比较采用χ2检验；并采用Logistic逐步回归模型对SNPs位点与湿性AMD的关联性进行统计学分析，计算两组效应比值比(OR)及其95%置信区间(95%CI)，分析各位点之间的交互作用。P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

1.2.4选择SNPs与检测所选SNPs位点分型 依据相关基因数据库及文献资料[4-6]选择与湿性AMD显著相关的HTRA1基因2个SNPs位点，即rs11200638、rs2248799，由北京基因组研究所的MassARRAY 分子量阵列技术平台利用MALDI-TOF软件对所选SNPs位点的分型进行检测，获得分型结果，并进行病例组和健康组的对照分析。

最后，还需要建立跨境基础设施债券市场、跨境基础设施交易平台及其他跨境基础设施投融资平台，这样才能充分发挥和放大亚投行对“一带一路”倡议的支撑作用。总之，亚投行的发展建设不能局限于一点或一隅，而是一项系统性的工程设计。

表1 两组研究对象基因型分布对比 例(%)

注：病例组：湿性AMD患者；健康组：正常健康者。

表2 两组研究对象等位基因分布对比 频次(%)

注：病例组：湿性AMD患者；健康组：正常健康者。

表3 rs11200638和rs2248799的基因型与湿性AMD患病风险关系对比

  

SNPsβSEWaldχ2POR(95%CI)rs11200638 AA0641132528396<001536(267～1064) AG0971032423278<001345(201～587) GG0ars2248799 TT0823027621967<001236(157～324) TC0706023416458<001198(128～296) CC0a

注：a表示预测变量(常量)，在此模型的回归分析中无变化。

2.1两组研究对象基因型分布比较 两组研究对象rs11200638、rs2248799位点的基因型比较，差异均有统计学意义(P<0.01)，且病例组AA、TT均明显高于健康组，差异均有统计学意义(χ2=40.141、35.322，P<0.01)，见表1。

3讨论

1.2.3测定DNA样本含量 使用1%琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA样本浓度进行初步判断，且用NanoDrop2000c紫外分光光度计进行进一步测定，检测A260/A280值以及DNA样本的浓度和纯度。

“主动性”反映的是人投入的力度，历史经验证明：越主动的学生对学习的关注与投入程度越大。主动学习有别于被动接受最大的不同是不惧怕困难（甚至将战胜困难当作乐趣），愿意接受挑战，能花更多的时间和精力去接受、认知未知事物和知识。因此，主动学习就像性能良好的“发动机”，带来的是持续不断的学习动力，这也是所有教学的最大成果。因此，想提高教学质量、形成有效教学，提高“主动性”是关键。

本研究结果发现，病例组rs11200638位点基因型AA所占比率为51.2%，健康组所占比率为20.9%，病例组明显高于健康组(P<0.01)，且病例组rs11200638位点危险性等位基因A的频率为69.7%，明显高于健康组的45.8%(P<0.01)，rs11200638基因型AA、AG的OR值分别为5.36与3.45，是湿性AMD发病的危险因素(P<0.01)，提示HTRA1基因rs11200638与湿性AMD发病有显著关系，基因型AA频率增高均可增加湿性AMD患病风险。Askari等[13]研究显示，rs11200638的等位基因和基因型分布与AMD显著相关，在此位点上携带AA基因型的人AMD患病风险明显增加。另有研究发现，HTRA1基因rs11200638与湿性AMD有显著关联，该位点上的等位基因A可增加湿性AMD的遗传易感性，危险度高出正常人10倍[14]，这与本研究结果相符，分析当SNP rs11200638出现等位基因A及基因型AA时，HTRA1启动子内的相关因子的亲和力发生改变，HTRA1基因转录增强，HTRA1高表达能够破坏Bruch膜结构，脉络膜毛细血管突破Bruch膜进入视网膜，导致类似湿性AMD临床表现的发生。因此，HTRA1基因rs11200638等位基因A及基因型AA可增加湿性AMD患病风险。

目前，没有研究调查过病耻感在帕金森病患者整体健康中所起的作用，但有研究表明病耻感可以预测患者生活质量变化[28]。且研究发现帕金森病患者的病耻感是决定患者健康相关生活质量的关键因素，有较高病耻感的患者常伴有更严重的疾病程度、更多的运动困难以及生活质量问题[4]。全面评估帕金森病患者的病耻感，可能有助于帕金森病患者的生活质量研究和社会心理学干预研究。

此外，本研究发现病例组rs2248799位点的基因型TT所占比例为57.7%，健康组所占比例为28.4%，病例组明显高于健康组(P<0.01)，病例组rs2248799位点危险性等位基因T的频率为73.6%，明显高于健康组的52.5%(P<0.01)，rs2248799 基因型TT、TC的OR值分别为2.36与1.98，是湿性AMD发病的危险因素(P<0.01)，提示HTRA1基因rs2248799与湿性AMD发病有显著关系，基因型TT频率增高可增加湿性AMD的患病风险。Karkhane等[15]研究表明，rs2248799的等位基因和基因型分布同AMD有极大的关联性，在此位点上携带TT基因型的人可增加AMD的患病风险与易感性。另有研究结果显示，HTRA1基因rs2248799同湿性AMD遗传易感性关联效应较强，该位点上的等位基因T可增加湿性AMD的遗传易感性[16]，这与本研究结果相符，分析SNP rs2248799与HTRA1 mRNA及蛋白的过表达有关，当等位基因T及基因型TT出现时，HTRA1 mRNA转录激活，促进HTRA1蛋白表达，随着HTRA1过表达，其在Bruch膜结构重构、视网膜色素上皮细胞萎缩及脉络膜新生血管形成中发挥重要作用，与湿性AMD的发生显著相关。因此，HTRA1基因rs2248799等位基因T及基因型TT可使湿性AMD患病风险增加。

综上，HTRA1基因rs11200638和rs2248799多态性在湿性AMD发病中发挥关键作用，基因型AA、TT是湿性AMD发病的危险因素，其频率增高可增加湿性AMD患病风险。

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