反刍动物瘤胃内存在大量的微生物，细菌、原虫和真菌是最重要的瘤胃微生物，在瘤胃内它们对饲料的降解发挥着重要作用[1-2].每毫升瘤胃内容物中瘤胃原虫约占105～106个[3].瘤胃原虫分为两个主要亚类，即纤毛虫纲和鞭毛虫纲，原虫数量虽然很少，但在瘤胃内是个体最大的微生物[4].鞭毛虫纲存在于幼龄反刍动物瘤胃内，纤毛虫是瘤胃原虫的主要种类，对反刍动物而言，它们维持瘤胃生态系统的平衡，促进反刍动物对纤维类物质的利用，对蛋白质分解(内毛属、均毛属、真双毛属、头毛属等)和降低硝酸盐和亚硝酸盐毒性起着重要作用[5].塔里木马鹿是新疆的特有亚种，也是唯一栖息在荒漠生境中的野生动物亚种，它主要采食芦苇、柽柳、骆驼刺和沙枣树的树枝等低质粗饲料[6-7].钱文熙等[8]研究了塔里木马鹿、卡拉尔羊及新疆褐牛对相同荒漠饲草的消化率，结果表明塔里木马鹿对低质粗饲料有较好的适应能力.为了解塔里木马鹿瘤胃生理特点和消化特性，本试验通过饲喂不同纤维水平的试验饲粮，从形态学观察塔里木马鹿瘤胃原虫种类、数量、

活力及种群结构等变化规律，以期为国内外对塔里木马鹿瘤胃原虫种群结构的研究提供参考，为塔里木马鹿对低质粗饲料的高效利用提供科学依据.

1 材料与方法

1.1 试验动物及饲养管理

选用健康体况良好、体质量相近和性别相同安装有人工瘤胃瘘管的3只雌性塔里木马鹿作为试验动物，代谢笼中单独饲养，在试验开始前驱虫，每日08∶00、19∶00各饲喂一次，自由饮水，非实验人员不要接近马鹿，以免引起马鹿应激.

在欧洲封建主义社会中，统治阶级（贵族、地主）与被统治阶级（农民）构成了当时社会对立的两大阵营，处于这两大对立阶级之间的人群（资产阶级、手工业者、自由职业者、市民等）构成了中间阶层，即国王、贵族、僧侣之外的“第四等级”，他们所举行的法国大革命推翻了贵族地主阶级统治的封建主义社会，促成了资本主义社会和制度的产生。在资本主义社会中，处于无产阶级和资产阶级两大对立阶级之间的农民、小业主、手工业者、知识分子等人群，组成了中间阶层。第二次世界大战之后，中间阶层在欧美发达资本主义社会中成为主导性的社会群体。

1.2 试验饲粮及营养水平

试验饲粮配制参照《中国养鹿学》[9]和《新疆马鹿饲养技术》[10]中建议马鹿营养需要进行配方设计，分高纤维饲粮组(CF为50%)和低纤维饲粮组(CF为30%)，饲粮变化前、后营养指标保持一致，干物质采食量为3.0 kg/d，具体饲粮组成与营养水平见表1.

表1 试验饲粮配方及营养水平

Table 1 Test diet formula and nutritional level

配方组成采食量/(kg·d-1)低纤维组(30%)高纤维组(50%)营养指标营养水平低纤维组(30%)高纤维组(50%)精饲料1.31.0干物质采食量DMI/(kg·d-1)3.03.0苜蓿0.50.5消化能DE/MJ34.4034.40棉籽壳 1.01.0粗蛋白质CP/%13.2014.20稻秆 0.20.4钙/%3.0～3.23.0～3.2苹果渣0.20.3磷/%32.1532.15合计3.23.2

(1)鹿用饲料缺失消化能数据，配方中参照了羊用饲料消化能；(2)高纤维组，为了保持营养水平一致，配方设计时精饲料中增加了豆粕用量.

1.3 试验设计

按照高、低纤维饲粮配对试验设计，每期试验分为预试期和正试期，预试期为21 d，让马鹿适应试验饲粮，正试期为3 d，正试期一连三日在马鹿饲喂后2 h采集瘤胃液样品，进行原虫活力、数量、种类及种群结构的测定和比较.

1.4 测定指标及方法

1.4.1 瘤胃液样品采集与制备 正试期把马鹿麻醉后通过瘤胃瘘管，用无菌瘤胃采样塑料管从瘤胃的前、中、后3个部位取瘤胃液，然后将瘤胃液用2层纱布过滤，尽快对原虫活性进行检测，其余瘤胃液用固定液固定后备用.

1.4.2 塔里木马鹿瘤胃原虫种类形态学鉴定

草害采取药剂化除与人工除草相结合的办法。一般在播后苗前，要趁雨后抢墒，亩用96%金都尔乳油60-70 mL兑水50 kg，均匀喷于土表；在苗期单子叶杂草5-6叶前，亩用25%盖草能乳油40-50 mL加水30 kg，喷于杂草茎叶上，有很好的防除效果。

1.4.2.1 材料 载玻片(1.5 mm×76 mm×26 mm，NO.7101，秦皇岛市秦宁玻璃有限公司)、盖玻片(20 mm×20mm，秦皇岛市秦宁玻璃有限公司)、高速冷冻离心机(H2050R，长沙湘仪离心机仪器有限公司)、电子显微镜(NIKON E200，上海千欣仪器有限公司).

1.4.4 瘤胃原虫计数 参照王梦芝等[14]，陈旭伟[15]、霍鲜鲜等[16]，高爱武等[17]原虫计数方法来进行计数原虫数量.用固定液5倍稀释经2层纱布过滤后的瘤胃液样品，通过血球计数板在显微镜下观测计数.

1.4.2.3 方法 取50 mL保存在39 ℃经固定液固定的瘤胃液于离心管中，150×g离心5 min，弃上清，向沉淀物中加入40 mL 30%蔗糖溶液，继续150×g离心3 min，弃上清，接着加40 mL 0.9% NaCl溶液冲洗沉淀液，混匀，150×g离心3 min，重复3次.按2∶1用M.F.S染色液与样品混匀，染色15～30 min，最后在显微镜下观察[11-12].

好歹他们勤劳的本色不变：杨秋香该忙家务活儿还忙家务活儿，有时她也到超市帮忙干点杂活儿。杨力生该接待往来客户，还是热心地接待往来客户，夫妻二人各尽其责，但就是谁也不肯先理睬谁。

参照《反刍动物营养学》[12]和《The Rumen Protozoa》[13]这两本书中提供的原虫图片结合形态学描述进行比对，从属水平上对塔里木马鹿瘤胃原虫进行鉴定.鉴定原虫时，观测虫体的形状和大小以及长宽比例、大小核的大小和位置、虫体是否覆盖纤毛，伸缩泡的位置和数量、是否具有骨片，骨片的大小、位置和数量，有没有尾刺等来鉴定原虫种类.通过显微镜观察鉴定瘤胃原虫种类，需要使用更高的放大倍数，即400倍进行观察.

2.1.3.5 双乳突内毛虫(Entodiniumbimastus) 虫体卵圆形，体形后部变细并以直肠至胞肛为中线分成左右两个宽长方形的尾叶，大核呈杆状且较长，其长度超过体长的3/4，具体形态如图3-E所示.

活动纤毛虫率

2.1.3.8 短小内毛虫(Entodiniumexiguum) 这种纤毛虫的虫体比较小，呈矩形，前端扁平，大核短杆状而粗，具体形态如图3-H所示.

1.4.2.2 试剂 30%蔗糖溶液、0.9%NaCl溶液、M.F.S染色液(35%福尔马林100 mL、甲基绿0.6 g、NaCl 8.0 g、蒸馏水900 mL)、固定液(1号：4%福尔马林40 mL、NaCl 9 g、蒸馏水960 mL；2号：0.3 mL冰醋酸、99.7 mL蒸馏水；按1∶2比例混合).

1.5 试验数据处理

采用SPSS 17.0统计软件进行T检验；试验表中数据表示为平均数±标准差

2 结果与分析

2.1 塔里木马鹿瘤胃原虫种类形态学鉴定

通过前文提出的鉴别方法在400倍的显微镜下观察虫体并参照《反刍动物营养学》[12]和《The Rumen Protozoa》[13]书中提供的部分原虫图片进行比对，并从属水平上对塔里木马鹿瘤胃原虫进行鉴定，具体结果如下.

2.1.1 等毛属(Isotrichicha)

2.1.1.1 原口等毛虫(Isotrichichaprostoma) 虫体近似扁长椭圆形，体表被有等长的纤毛，口部位于端顶，大核呈杆状而稍微弯曲，有2～4个伸缩泡，虫体较大，具体形态如图1-A所示.

2.1.3.10 长核内毛虫(Entodiniumlonginucleatum) 体形呈卵圆形，它最明显的特征是大核很长，位于虫体右面正中线体表下面的外质内，其长度从体前端一直延伸到后端，具体形态如图3-J所示.

A：原口等毛虫；B：肠等毛虫(B-1.虫体上面观，B-2.虫体底面观). 图1 等毛属原虫 Figure 1 Isotrichicha

2.1.2 厚毛属(Dasytricha) 反刍厚毛虫(Dasytricharuminantium) 虫体呈略扁椭圆形，体表有非常稠密的等长纤毛，口部位于虫体的顶端，大核呈椭圆形，在体内没有固定的位置，有几个伸缩泡，虫体较小，具体形态如图2所示.

2.1.3 内毛属(Entodinium) 内毛属原虫是瘤胃内数量和种类最多的原虫，本试验共鉴定出了27个种，下图中仅列出了频率相对较高的12种内毛虫.

图2 反刍厚毛虫 Figure 2 Dasytricharuminantium

2.1.3.1 皮刺内毛虫(Entodiniumaculeatum) 体形似椭圆形，在体后端有由表膜向体外延伸的3根尾刺.其中位于右面的一根尾刺看起来比较短，其他两根尾刺位于左面的上下两侧，这两根尾刺比另一个尾刺更大和更重.大核长而弯曲，具体形态如图3-A所示.

2.1.3.2 Entodiniumacutonucleatum 体形似卵圆形，但右面明显地呈凸面，左面稍微呈凸面.体后端有2根弯曲的尾刺，其中一根位于右面，一根位于左面.大核杆状很长，其长度与长核内毛虫的大核很相似，具体形态如图3-B所示.

2.1.3.3 Entodiniumanttenuatum 体形呈细长形，大核呈曲杆且很长，具体形态如图3-C所示.

2.1.3.4 Entodiniumbengalensis 虫体的体形呈椭球形，具有三根弯曲的尾刺及长而弯曲的大核.这种瘤胃纤毛虫与Entodiniumacutonucleatum相同，具体形态如图3-D所示.

2.4 不同程度吸烟组及与非吸烟组间椎体骨折阳性率比较 结果表明：轻、中、重度吸烟组椎体骨折阳性率分别为19.2%(20/104)、27.7%(36/130)、23.2%(440/1 895)，不同程度吸烟组间差异有统计学意义(P<0.05)；经两两比较，发现中、重度吸烟组与非吸烟组间差异均有统计学意义(P<0.001)。

1.4.3 原虫活力的观察 将采集的瘤胃液用2层纱布过滤，将过滤的瘤胃液保存在39 ℃条件下，5 min内进行活力检测.具体做法是：用吸管吸取原液样品1～3滴于载玻片上，用显微镜进行检测.如果显微镜下虫体密度过密，可用蒸馏水稀释.镜检取四角或五区法，在各自区内检测总纤毛虫数以及呈直线及波浪式运动纤毛虫的数目，计算活动纤毛虫百分率(%)其公式如下：

2.1.3.6 钩状内毛虫(Entodiniumrostratum) 体形左右两面不对称，右面成凸面，左面略呈凹面，而体前端扁平，体后端的左面有一个较粗的钩状尾刺，大核杆状，伸缩泡位于大核的前端，具体形态如图3-F所示.

在对水利枢纽工程安全监测系统进行开发的过程中，本研究采用的是基于互联网的分级分布式结构。在本研究中，系统的总体结构主要有数据采集、存储、Web服务以及监测分析4个层次。其中，数据采集主要是由分布在水利枢纽工程现场的多个采集箱组成的。数据采集箱与各种传感器连接，如压力剂、沉降仪等，以实现监测参数的就地采集。数据存储以及服务层是由Web服务器、移动通信模块等构成。Web服务器是以一定的采集策略为依据，收集现场数据采集箱中监测数据，并将其存入数据库。监测分析水利枢纽是系统的界面层，可以与电脑、手机等移动设备相连，通过互联网、移动互联网与Web服务器连接，以实现数据的监测和分析。

A：皮刺内毛虫；B：Entodiniumacutonucleatum；C：Entodiniumanttenuatum；D：Entodiniumbengalensis；E：双乳突内毛虫；F：钩状内毛虫；G：牛内毛虫；H：短小内毛虫；I：菱形内毛虫；J：长核内毛虫；K：尾刺内毛虫(1,2为叶状内毛虫形态型;3，4为尾刺内毛虫形态型)；L：小内毛虫. 图3 内毛属原虫 Figure 3 Entodinium

2.1.3.7 牛内毛虫(Entodiniumbovis) 体形呈球形，大核似棒状形，其长度近体长的3/4，有一个伸缩泡并位于大核前端，具体形态如图3-G所示.

按下列标准分五级表示其活力：一级虫体活力在80%以上，二级虫体活力在60%～80%以上，三级虫体活力在40%～60%以上，四级虫体活力在40%以下，五级虫体全部没有活力.

60例甲状腺肿瘤患者中男24例,女36例,患者年龄21~80岁,其中30岁以下的患者有7例,31~40岁患者有17例,41~50岁患者有25例,51~60岁患者为6例,61~80岁的患者有5例。

2.1.3.9 菱形内毛虫(Entodiniumrhoboideum) 体形略似菱形或斜方形，在体后端中线的左面有一圆滑的左叶突起，大核呈杆状，但它的前端较粗，后端逐渐变细，紧贴体右面前部表膜的下面，其长度近体长的2/3，具体形态如图3-I所示.

对于活检标本，可使用改良的Calcofluor荧光染色法在光镜和荧光显微镜下进行观察：光镜下见固有形态，荧光显微镜下真菌则呈亮蓝色[11]。组织病理学虽为诊断金标准，但临床上怀疑IPA的患者常因病情较重而无法行肺活检，且组织病理学检测存在约20%的假阴性结果[8]，因此限制了其应用价值。除痰液及活检标本外，支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)、气管内吸引物、胸腔积液也为常用标本。

2.1.1.2 肠等毛虫(Isotrichichaintestinalis) 与上述原口等毛虫相似，虫体似椭圆形，但口部不在顶端，而位于距顶端1/3处，大核略似三角形，具体形态如图B-1，B-2所示.

2.1.3.11 尾刺内毛虫(Entodiniumcaudatum) 虫体的体形似椭球形，在体后端有尾刺，尾刺的数量和形状在个体之间存在着变异.大核呈杆状，但前端较粗，后端较细.这种尾刺内毛虫分为尾刺内毛虫形态型和叶状尾刺内毛虫形态型两个形态型，尾刺内毛虫形态型虫体的后端有3根尾刺，一根尾刺似三角形.叶状内毛虫形态型虫体的后端有2根尾刺和一根尾刺似叶状形，还有一根末端尖锐的尾刺，具体形态如图3-K所示.

2.1.3.12 小内毛虫(Entodiniumparvum) 虫体近似长椭圆形，体形几乎是左右对称.大核很长，紧靠右面的体表下，其长度超过体长的2/3，具体形态如图3-L所示.

2.1.4 双毛属(Diplodinium) 具齿双毛虫(Diplodiniumdentatum)体形似方形，但左面呈凸面，右面的中部呈凹面，围绕在体后端有6根似齿状的尾刺，大核的前部较粗，并向右弯曲，后部较细，具有2个伸缩泡，分别位于大核的左面的前、后部，无骨板，具体形态如图4所示.

2.1.5 原始纤毛属(Eodinium) 单叶原始虫(Eodiniummonolosum)体形近似卵形，在体后端的右面有一个明显而肥厚的单叶突起，大核呈曲杆，有2个伸缩泡，位于大核前和后部，具体形态如图5所示.

2.1.6 单甲属(Eremoplastron) 喙状单甲虫(Eremoplastronrostratum)体形近似椭圆形，在体后端的右面有一个似喙钩状的尾刺，大核杆状而短，有2个伸缩泡，分别位于左面的前、后部，具体形态如图6所示.

天然植物性食物中的营养素不会因烹调遇热而分解破坏。据相关实验表明，煮菜过程中会损失50%～70%维生素C和90%左右的叶酸，油炸过程会损失约50%维生素E。

图4 具齿双毛虫 Figure 4 Diplodiniumdentatum

图5 单叶原始虫 Figure 5 Eodiniummonolosum

图6 喙状单甲虫 Figure 6 Eremoplastronrostratum

2.1.7 真双毛属(Eudiplodinium) Eudiplodiniummagii虫体近似卵圆形，大核形状比较特殊，像一个“T”字形，这是真双毛属的主要特征，小核位于大核“T”字形的弯曲内，此外只有一块狭长的骨板和2个伸缩泡，虫体很大，具体形态如图7所示.

2.1.8 鞘甲属(Elytroplastron) 水牛鞘甲属(Elytroplastronbubali)体形似椭圆形，大核似杆状，位于虫体的左面，具有4块骨板，这是鞘甲属的特征之一，其中2块较大的骨板位于虫体的上面体表下，另外2块位于底面的体表下面.在这2块当中有一块较长的位于底面的左侧，另一块很小的位于底面的右侧前端.具有4个伸缩泡，排列在大核的左面，具体形态如图8所示.

图7 Eudiplodiniummagii Figure 7 Eudiplodiniummagii

A：虫体上面观；B：虫体底面观. 图8 水牛鞘甲属 Figure 8 Elytroplastronbubali

2.1.9 后毛属(Metadinium)

2.1.9.1 中间后毛虫(Metadiniummedium)体形似卵圆形，大核位于虫体的左面，从底面观察，类似“E”字形，具有较大的2块骨板，并与大核相互平行，有2个伸缩泡，位于“E”字形大核的两个凹陷处，具体形态如图9-A所示.

2.1.9.2 r型后毛虫(Metadiniumypsilon)虫体体形似卵圆形，大核的形状和两个伸缩泡的位置与中间后毛虫很相似，但位于体上面相互平行的两块骨板，从它们的中间部开始至后端相互融合在一起，像一个希腊字母r，具体形态如图9-B所示.

社会的呼吁：习近平指出，“广大青年要把正确的道德认知、自觉的道德养成、积极的道德实践紧密结合起来，自觉树立和践行社会主义核心价值观，带头倡导良好社会风气”。大学生是建设社会主义国家的后备力量，自觉培养自己的社会道德意识和社会责任意识是每个大学生参与建设社会主义社会第一步也是最重要的一步。经常参加志愿服务活动，有利于大学生社会道德意识和社会责任意识的培养。

2.1.10 硬甲属(Ostracodinium) Ostracodini-ummonolobum虫体体形似椭圆形，大核杆状，较长，在它前部的左侧有一个小的浅沟，小核即位于沟内.具有5个伸缩泡排列在大核的左面，具体形态如图10所示.

HIV阳性的男方未达到病毒抑制而试图自然受孕时，HIV阴性的女方应在排卵期无套性交前、后各服用TDF/FTC（或者TDF+3TC）一个月进行暴露前和暴露后预防。

A：中间后毛虫；B：r型后毛虫. 图9 后毛属原虫 Figure 9 Metadinium

图10 Ostracodiniummonolobum Figure 10 Ostracodiniummonolobum

2.1.11 多甲属(Polyplastron) 多泡多甲虫(Polyplastronmultivesiculatum)这种纤毛虫的虫体体形似卵圆形，大核杆状，具有5块骨板，还有4～9个伸缩泡，具体形态如图11所示.

图11 多泡多甲虫 Figure 11 Polyplastronmultivesiculatum

2.1.12 前毛属(Epidinium)

2.1.12.1 有尾前毛虫(Epidinium.ecand.formacaudatum)虫体较长，体形呈锥形，在虫体的左面呈凸面，右面略呈凹面，大核杆状，小核位于它左面的浅沟内，有2个伸缩泡，虫体后端的右面有一很明显，面向左弯曲的呈钩状的尾刺，具体形态如图12-A所示.

2.1.12.2 Epidinium.ecaud.formacaffanei虫体的体形呈锥形，虫体的后端有5根向下伸长的尾刺，这些尾刺都向内弯曲，具有3块骨板，两块位于上面，一块位于右面，具体形态如图12-B所示.

2.1.13 其他形态原虫 在试验中我们还发现体形特异的原虫，具有胞口，大核的长度不一样，但都从凹陷处向虫体的前部与后部呈对称，且凹陷，有的还有骨板，最后确认为原虫的无性生殖过程.无性生殖以二分裂为最常见的增殖方式，分裂时胞核先分裂，随后纵向或横向分裂为二个子体，所分裂出的虫体和原先虫体相同，具体形态如图13所示.

丹七软胶囊脂溶性成分的GC-MS指纹图谱研究…………………………………………………… 庞 颖等（6）：766

综上所述，通过对塔里木马鹿瘤胃原虫的镜下观察，共观测到内毛目和毛口目2个目，内毛亚科、头毛亚科、双毛亚科和等毛科4个亚科，12个属41个种的原虫.12个属具体是：等毛虫属(原口等毛虫、肠等毛虫)、厚毛虫属(反刍厚毛虫)、内毛属(包括短小内毛虫、小内毛虫、皮刺内毛虫、双乳突内毛 虫、长核内毛虫等27个种)、双毛属(具齿双毛虫)、原始纤毛属(单叶原始虫)、单甲属(喙状单甲虫)、真双毛属(Eudiplodiniummagii)、鞘甲属(水牛鞘甲虫)、多甲属(多泡多甲虫)、后毛属(中间后毛虫、r型后毛虫)、硬甲属(Ostracodiniummonolosum)、前毛属(有尾前毛型前毛虫、Epidinium.ecaud .forma caffanei).结果表明内毛属出现的频率最高，占到总数的80%以上，观测其中皮刺内毛虫、Entodiniumacutonucleatum、Entodiniumanttenuatum、Entodiniumbengalensis、双乳突内毛虫、钩状内毛虫、牛内毛虫、尾刺内毛虫、短小内毛虫、菱形内毛虫、长核内毛虫、小内毛虫占绝大部分.另外，最后一组显微镜下发现的原虫无性繁殖相关形态学图片，此前未有相关图片的报导.

A：有尾前毛虫；B：Epidinium.ecaud.formacaffanei 图12 前毛属 Figure 12 Epidinium

图13 无性生殖形态的原虫 Figure 13 Asexual protozoa

2.2 纤维水平对塔里木马鹿瘤胃原虫活力、总数及种群结构的影响

2.2.1 纤维水平对瘤胃原虫活力的影响 瘤胃原虫活性是根据显微镜下活动的纤毛虫与总纤毛虫数的比值来表示，本试验研究了高、低粗纤维饲料对塔里木马鹿瘤胃原虫活力的影响，具体结果见表2.

由于数据缺乏一致性和延伸性，对数据统计带来严重影响，使各级单位汇总数据出现较大问题。因此，要对数据统计管理模式进行不断完善，制定管理制度，要求各部门在对部分数据进行修改后，要及时通知相关业务部门，避免数据统计、汇总出现较大出入。对于同一个统计指标，要建立统一的口径，而针对不同时期统计数据，应对其大小关系进行明确，使当期数据与上季度及年度相对应数据相符，减少统计问题。此外，还要对各部门行政职责、权限进行明确，使其能够完成基本工作内容。对测绘地理信息管理各级部门所处地位进行明确，为开展年度预算、执行、评估提供方便。

由表2可知，饲喂不同纤维水平的两种饲粮，马鹿瘤胃液内呈波浪或者直线运动的原虫数活力均在80%以上，都达到了一级水平，活性极高.高、低粗纤维饲粮组原虫活力分别为80.35%，83.54%，随着饲粮纤维水平增加，原虫的活力上升了3.19%，差异显著(P<0.05).王宏勇等[18]研究了吐温对绵羊原虫活力和数量的影响，研究结果和本试验有相同的变化趋势.饲喂高、低纤维饲料后，瘤胃原虫活性变化如图14所示.

一杭站在旁边，手捏成铁拳，又松开来，又握成拳。他听到自己的心在狂跳。红头发把喷着酒气的嘴朝雪萤脸上啄了一下，雪萤喉咙里发出“呜呜呜”的声音，躲着红头发的脸。红头发对光头说：“来，把她弄走。”两人来扯雪萤，把她往路边那片林子里拉，另一个瘦个子则跟在后面，留意着一杭的动静。

表2 不同比例粗饲料日粮塔里木马鹿瘤胃 原虫活力比较

Table 2 Different proportion roughage ration Tarim Wapiti rumen protozoon dynamic comparison %

低粗纤维高粗纤维显著性原虫活力80.35±0.6483.54±0.58*

*表示差异显著(P<0.05).

2.2.2 纤维水平对瘤胃原虫总数的影响 反刍动物瘤胃原虫数量不仅受到动物种类、不同的生理时期、个体差异、饲粮类型等因素的影响，同时还受外源物质抗菌素、维生素和矿物质等添加剂的影响[19].在塔里木马鹿饲粮中添加不同比例的粗纤维饲料，瘤胃原虫总数的变化如表3所示.

对反刍动物而言，原虫可以维持瘤胃生态系统的平衡，促进反刍动物对纤维类物质的利用.由表3可知，塔里木马鹿由低粗纤维饲料转化为高粗纤维 饲料时，瘤胃原虫数量由4.98×105个/mL增加为5.45×105个/mL，增加了0.47×105个/mL，但经统计差异不显著(P>0.05).

A：低粗纤维饲料(×100)；B：高粗纤维饲料(×100). 图14 高、低粗饲料的添加对塔里木马鹿瘤胃原虫 活性的变化的影响 Figure 14 The effects of idfferent fiber levels on vitality of the Tarim Wapiti rumen protozoa

2.2.3 添加高、低纤维饲粮对瘤胃原虫种群结构的影响 孙云章等[20]的研究表明饲粮的组成、精粗比例会影响瘤胃微生物群落结构与数量.本试验通过计数及分类鉴定，饲喂高、低纤维饲料后对12个属原虫频数的影响，结果如表4所示.

表3 添加不同比例粗纤维饲料原虫总数变化

Table 3 Change of roughageprotozoa totalon on adding different proportions ×105个/mL

低粗纤维高粗纤维显著性原虫总数4.98±0.555.45±0.75NS

“NS”表示差异不显著(P>0.05).

表4 添加不同比例粗纤维饲料对瘤胃原虫频数的变化 Table 4 Changes in the frequency of ruminal protozoa on different proportions of roughage %

原虫种类低粗纤维高粗纤维显著性内毛属Entodinium80.57±0.2182.76±0.17*双毛属Diplodinium3.74±0.411.35±0.11*单甲属Eremoplastron0.46±0.110.19±0.08NS鞘甲属Elytroplastron0.32±0.140.38±0.09NS硬甲属Ostracodinium0.58±0.070.48±0.05NS后毛属Metadinium2.62±0.783.37±0.31NS真双毛属Eudiplodinium0.68±0.210.29±0.19NS前毛属Epidinium7.87±0.877.43±0.42NS厚毛属Dasytricha2.57±0.212.25±0.14NS等毛属Isotrichicha0.58±0.091.49±0.11*原始纤毛属Eodinium0.01±0.000.01±0.00NS

*表示差异显著(P<0.05)；NS表示差异不显著(P>0.05).

由表4可知，内毛属、双毛属、后毛属、前毛属、后毛属和等毛属是塔里木马鹿瘤胃纤毛虫的优势种群，无论饲粮纤维水平高低，其含量都在95%左右，尤其是内毛属原虫，达到了80%以上.添加不同比例粗纤维饲料后各属原虫的频率都有所变化，除内毛属、双毛属和等毛属外，其他各属均差异不显著(P>0.05).内毛属、双毛属和等毛属随着饲粮纤维水平变化，原虫频率分别变化了2.19%，2.39%和0.91%，组间差异显著(P<0.05)，其中，双毛属原虫频数随饲粮纤维水平的增加而降低，而内毛属和等毛属原虫频数随饲粮纤维水平的增加而增加.

3 讨论

3.1 塔里木马鹿瘤胃原虫种类形态学鉴定

由于受原虫密度、原虫自溶性等因素的影响，本次试验对比相关清晰图片主要观测到了内毛属、双毛属、单甲属、鞘甲属等共12个属中的41种原虫，其中内毛属的瘤胃原虫数量最多，其中皮刺内毛虫、Entodiniumacutonucleatum、Entodiniumanttenuatum、Entodiniumbengalensis、双乳突内毛虫、钩状内毛虫、牛内毛虫、尾刺内毛虫、短小内毛虫、菱形内毛虫、长核内毛虫、小内毛虫出现的频率达到了80%以上.王梦芝等[21]从徐淮白山羊瘤胃内发现的原虫有双毛属、内毛属、前毛属、等毛属和头毛属，其中内毛属所占比例最高，与其研究结果相比本次试验未发现头毛属，其他属类都有发现，这可能与饲料配方有关，但具体原因仍需进一步研究.方翟等[22]研究鉴定出了马鹿的内毛属、双毛属、头毛属、等毛属、前毛属等原虫[22]，本试验都有发现.因此，根据显微镜下形态学观察提供的图片来看，本次试验检测到的原虫图片是目前文献中最为全面的.

3.2 纤维水平对塔里木马鹿瘤胃原虫活力的影响

本试验中通过对新鲜瘤胃液在显微镜下的观察并计算活力，结果表明随粗纤维饲料比例的上升，瘤胃原虫活力也有所提高，这种变化可能因为精饲料用量减少，增加了稻秆这类高粗纤维饲料有关，粗纤维在瘤胃微生物作用下降解产生的VFA和ATP，是宿主和微生物的重要能量来源，粗纤维的增加使得VFA和ATP增加，提高原虫合成所需要的能量供给，可刺激原虫的生长，同时提高了原虫活力.方翟等[22]研究发现添加青绿饲料前后，马鹿瘤胃内原虫活力差异不显著(P>0.05)，与本试验结果有出入，但具体原因还需要再深入研究.

3.3 纤维水平对塔里木马鹿瘤胃原虫总数的影响

方翟等[22]研究添加青绿饲料对马鹿瘤胃原虫总数的影响，研究结果和本试验有相同的变化趋势.Sylvester等[23]研究发现奶牛饲喂低粗饲料NDF饲粮导致原虫数量减少.张俊[19]研究发现不同纤维和蛋白质来源饲粮对瘤胃原虫数量影响差异不显著，与本试验结果一致.Martínez等[24]研究发现使用牧草干草替代苜蓿干草后瘤胃内的等毛属、内毛属原虫数量和总数都会降低.敖力格日玛等[25]研究发现随着亚麻籽饲喂量的增加，肉羊瘤胃纤毛虫的数量减少.因此，对于瘤胃内原虫总数的影响具体原因在于饲粮纤维水平还是饲粮种类仍需做进一步研究.

3.4 纤维水平对塔里木马鹿瘤胃原虫种群结构的影响

饲粮精粗比例是影响原虫数量及种群结构的重要因素，饲喂方式也影响原虫的组成，尤其是对内毛属数量有较大的影响.刘翔[26]分别对山羊瘤胃内内毛属、双毛属、等毛属和头毛属进行了分类计数，研究发现内毛属和等毛属的数量随精料比例的增加而增加，内毛属是瘤胃内原虫的主要种属，虽然在各组间的比例有显著差异，但头毛属和双毛属有随着精料比例的增加而减少的趋势，这和本试验取得了相同的研究结论.随着粗纤维比例的上升，内毛属、等毛属和双毛属频率的差异显著(P<0.05)，其他各属均差异不显著(P>0.05).内毛虫数量上升与精饲料水平等密切相关.原虫一方面是有对植物组织的物理性裂解作用，从而能促进植物细胞间的分离，使富含纤维素的细胞壁破裂成碎片，而后被其直接吞噬消化；另一方面瘤胃原虫能够生成分解纤维素、半纤维素和果胶的酶类，分解纤维素提高饲料的利用效率.Coleman(1998)报道，大部分瘤胃纤维的降解可能是由于纤毛虫死亡所释放出来的酶在起作用，瘤胃去纤毛虫可使绵羊瘤胃纤维素降解率下降50%.内毛目纤毛虫中的头毛属、前毛属和双毛属都能不同程度地降解纤维物质，提高纤维素的消化率[22].马鹿高的消化率是否与瘤胃原虫组成差异有关，还需要再后续进一步对其他结果研究并深入分析.王丹丹等[27]研究表明粗饲料类型和粘附程度会影响奶牛瘤胃内细菌多样性，与本试验的结果相似.而粗纤维比例上升，导致原虫比例发生变化的内在原因，还需要通过对原虫纯培养和其酶活性的测定来进一步研究.

4 结论

1) 试验共发现12个属41种原虫，即内毛属、双毛属、单甲属、多甲属、鞘甲属、硬甲属、等毛属、前毛属、后毛属、原始纤毛属、厚毛属、真双毛属.其中等毛科的等毛属有2种，厚毛属有1种，内毛亚科的内毛属有27种，双毛亚科有8个属9个种，头毛亚科中的前毛属有2种.

2) 试验研究证明高粗纤维饲粮可显著提高塔里木马鹿瘤胃原虫的活力，但对原虫总数影响不显著.

3) 试验研究表明饲粮纤维水平对种群数量较多的内毛属、双毛属和等毛属频数影响显著(P<0.05)，而对鞘甲属、单甲属等8个属的原虫频数影响不显著(P>0.05).

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