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胃癌组织中EB病毒、ARID1A及PIK3CA的表达及意义

更新时间:2009-03-28

我国胃癌处于高发水平,无论男女,近年来有年轻化趋势。胃癌的发病和进展涉及多种因子的活动和演变[1],因此寻找与其相关的分子标志物成为医学家们研究的重点[2],可为提高胃癌的精准诊治水平提供依据。现已知多数胃癌与某些感染因素有关,其中包括幽门螺杆菌感染[3]和EB病毒(EBV)感染[4]。近来有研究发现胃腺癌中突变频率较高的基因包括AT丰富结合域1A基因(ARID1A)和磷脂酰肌醇3-激酶催化性亚基(PIK3CA)α[5],并且在EBV相关胃癌(EBV-associated gastric cancer,EBVaGC)中频率更高[6]。本研究运用原位杂交及免疫组化方法对所选的胃癌标本中的EBV、ARID1APIK3CA的表达情况进行检测,并探讨其临床意义,为进一步探寻它们的突变及相互关系提供线索。

1 材料与方法

1.1.般资料 选取中南大学湘雅医学院附属海口医院2016年1月至2017年11月间经手术切除的胃癌大体标本86例作为胃癌组,癌旁胃组织43例作为对照组,所有标本均经2名高年资病理医师复习,并按照《消化系统肿瘤WHO分类第四版》的组织病理学标准诊断。

国内大型的服装企业自行研发的PDM系统,虽然在单个企业的实施效果好,也只能称为成熟的、适应单一企业模式的PDM系统,还无法成为真正意义上的PDM产品。

称为X1支配X2,记为X1X2。当X在可行域中找不到其他支配它的变量时,将X称为Pareto最优解,即非劣解。

1.2 方法 所有病例组织均用10%中性福尔马林固定,经石蜡包埋,4~5 μm连续切片,运用EBER原位杂交法检测EBV,免疫组化SP法检测标本中ARID1APIK3CA,试剂分别购自美国Origene和英国Biorbyt。

2.1 EBV的表达 胃癌组中有10例EBV表达阳性,见图1,阳性率为11.63%,对照组中EBV表达均为阴性,两组胃组织中EBV表达差异具有统计学意义(P<0.05),见表1。组织学分型为管状腺癌的胃癌组织中EBV阳性率为16.36%,高于其他类型胃癌(3.23%),EBV在管状腺癌和其他类型胃癌中的表达差异具有统计学意义(P<0.05),而在其他临床分组之间的差异均无统计学意义(P>0.05),见表2。

1号交通洞进口土洞段的施工顺序为:施工准备直径42 mm小导管超前支护 全断面土洞开挖 钢支撑加系统锚喷支护 进行下一个循环。

2 结果

1.3 结果判定 EBV表达以细胞核呈棕褐色着色为阳性,否则为阴性。ARID1A及PIK3 CA染色阳性的判定标准为胞质中出现背景清晰的棕色或棕黄色颗粒,根据阳性染色强度及阳性细胞所占比例两个方面进行半定量结果判定:染色强度,不着色0分,浅黄色1分,棕黄色2分,深棕色3分;阳性细胞百分率,<10%记0分,10%~49%记1分,49%~75%记2分,>75%记3分。两者乘积即最后评分:0分为(-),1~3分为(+),4~6分为(++),7~9分为(+++),其中(++,+++)视为高表达。

 

表1 两组胃组织标本中EBV的表达比较(例)

  

胃癌组对照组8643764310011.6305.4200.02

  

图1 EBV阳性胃癌(×100)

 

表2 胃癌组中EBV的表达与临床病理特征的关系(例)

  

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2.3 PIK3CA的表达 在胃癌组中PIK3CA有67例表达明显增强,见图3,强阳性率为77.9%,与对照组(27.91%)相比较,二者的差异具有统计学意义(P<0.05),见表6。对临床病理学特征进行分析,发现PIK3CA的表达水平与胃癌的浸润深度有关(P<0.05),而与年龄、性别、组织学分型、分化程度及有无淋巴结转移无关,见表7。PIK3CA基因在EBVaGC中强阳性率为80.00%(8/10),EBVnGC中强阳性率为77.63%(59/76),见表5。

  

图2 ARID1A阴性胃癌(×100)

 

表3 两组胃组织标本中ARID1A的表达比较(例)

  

组别胃癌组对照组例数8643-80+4715++2925+++23阴性率(%)9.300.00 χ2值11.773 P值0.001

 

表4 胃癌组中ARID1A的表达与临床病理特征的关系(例)

  

年龄(岁)≤60>60性别3.7520.3243848252297.8910.42201111111120113.8060.148男女分型6224331420912.900.000.9570.735管状腺癌其他类型分化程度高-中分化低分化浸润深度黏膜层-肌层浆膜层及以外淋巴结转移无转移有转移5531311619107.2712.9039471.6010.5925.1312.772324131613.1810.00216708635804426082641210.0011.430.5890.543256113349208.009.84

2.2 ARID1A的表达 胃癌组中ARID1A表达阴性例数为8例(9.30%),见图2,ARID1A在胃癌组中表达水平明显下降(P<0.05),见表3,并且ARID1A的表达与肿瘤的浸润深度有关(P<0.05),而未发现ARID1A表达与年龄、性别、组织学分型、分化程度及有无淋巴结转移之间的关联性,见表4。在EBVaGC中ARID1A表达阴性率为20.00%(2/10),在EBVnGC中表达阴性率仅7.89%(6/76),见表5。

  

图3 PIK3CA强阳性胃癌(×100)

 

表5 EBVaGC和EBVnGC中ARID1A与PIK3CA的表达(例)

  

EBVaGC EBVnGC 1076265423260220.007.89000021785980.0077.63

 

表6 两组胃组织标本中PIK3CA的表达比较(例)

  

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表7 胃癌组中PIK3CA的表达与临床病理特征的关系(例)

  

0.5330.4717384812年龄(岁)≤60>60性别313681.5875.000.9680.3316224127男女分型501780.6570.831.3560.274553110452281.8270.970.0400.8433947991303776.9278.725.3570.045916705856.2582.862.0860.108管状腺癌其他类型分化程度高-中分化低分化浸润深度黏膜层-肌层浆膜层及以上淋巴结转移无转移有转移2561000000000000000000000000079316224588.0073.77

2.4 相关性分析 在EBVaGC组织中,ARID1APIK3CA的表达呈负相关(r=-0.629,P<0.05)。在EBVnGC组织中,ARID1APIK3CA的表达亦呈负相关(r=-0.419,P<0.05)。

3 讨论

EBVaGC中有多种肿瘤相关基因的启动子甲基化密度及频率增高,包括锌指蛋白4(CXXC4)和金属蛋白酶抑制剂2(TIMPr2)等[10],可使多种细胞因子表达失调,进而影响相关信号传导通路中某些蛋白的功能。此外,EBV核抗原EBNA1可以通过调节某些凋亡相关基因(包括癌基因和抑癌基因)促进细胞存活,并抑制DNA损伤修复和细胞凋亡,从而引发胃癌[11]。近来有研究指出,EBVaGC中还有包括ARID1APIK3CA等特定基因的改变[6]

1.4 统计学方法 应用SPSS23.0统计包进行数据统计分析,计数资料比较采用χ2检验,相关性分析采用Spearman相关分析,均以P<0.05为差异有统计学意义。

EBV是疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成员,基因组为双链DNA,可编码60种以上的病毒蛋白,能够感染人类及某些灵长类动物的B细胞,人是EBV的宿主之一。EBV属于一种致瘤病毒,Burke等[7]早在1990年就报道了EBV与胃癌发生的相关性,随后Tokunaga等[8]定义了EBV相关胃癌(Epstein Barr virus-associated gastric carcinoma,EBVaGC)。最近有学者通过对胃癌进行全基因组测序突变检测,提出了一种新的胃癌分子病理分型,其中就包括EBVaGC。本实验中EBVaGC占全部胃癌的11.63%,稍高于亚洲地区的平均阳性率[9],而在对照组中未发现有EBV阳性病例。这就印证了EBV感染与胃癌的相关关系。另一方面,在组织学分型为管状腺癌的组织中EBV的阳性率(16.36%)高于在其他类型胃癌中的阳性率(3.23%),提示EBV可能对癌细胞的生长分化有一定影响。

在拓展课的总结与展望部分,学生提出了如下问题:本实验中检测的微生物类型有限,不能说明铁皮石斛具有广谱的抗菌功能,被检微生物的类型有待增加;铁皮石斛中的抗菌的有效成分有待明确,有条件的情况下可以把多糖、生物碱和氨基酸类物质分离,分别进行抑菌实验。后续研究中,可以尝试将铁皮石斛匀浆液添加到相应免疫细胞的培养基中,观察其对免疫细胞数量及活性的影响。从本案例中,可发现,高中生已经具备质疑、查阅资料、设计实施实验、思考与总结的能力,教师应根据学生的发展特征与需求提供支持与条件,助力学生核心素养的发展。

ARID1A(AT-rich interactive domain containing protein1 A)定位于染色体1 p35.3,含有丰富的A-T序列,具有ATPase活性,其编码的BAF250 a(BRG1相关因子250 a)是SWI/SNF的一个重要的组成亚基[12,13]。SWI/SNF复合物是在研究酵母交换型转换(matingtype switching,SWI)和蔗糖不发酵(sucrose non-fermenting,SNF)时发现的[14],该复合物分为催化亚基和非催化亚基两大类。ARID1A属于非催化亚基,可与DNA或蛋白质结合,发挥ATPase的活性,并且调控复合物的靶向性。ARID1A在受到某些因素影响的条件下极易产生突变,是恶性肿瘤中突变频率最高的基因之一[15-16]ARID1A参与调控肿瘤坏死因子受体超家族成员FAS介导的细胞凋亡,其表达缺失可以导致细胞周期调控的异常[16],因此被认为是一个抑癌基因。本课题组研究发现,ARID1A在胃癌组中的表达水平较对照组中明显降低(P<0.05),并且与胃癌的浸润深度密切相关,提示ARID1A缺失可能导致胃癌的发生及侵袭恶化。ARID1A在EBVaGC中的表达缺失率为20.00%,要高于EBVnGC中的缺失率(7.89%),提示ARID1A的表达缺失可能与EBV感染相关。

PIK3CA(phosphatidylinositol3-kinase catalytic alpha)是Ⅰ类磷脂酰肌醇-3激酶(PI3 K)P110α催化亚单位的编码基因,位于第3号染色体,包含20个外显子,是一个致癌基因,其突变会引起编码蛋白的催化作用增强,导致PI3K-Akt信号通路高度活跃[17],使调控细胞周期的生长因子表达失调,对细胞凋亡的调控减弱,从而增加胃腺癌细胞的侵袭性和远处转移能力。有研究发现,PIK3CA蛋白表达与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤的组织学分级及分期预后等因素无关,而与淋巴结是否转移密切相关,有淋巴结转移者PIK3CA表达水平明显高于无淋巴结转移者[18]。本实验发现,胃癌组中PIK3CA表达水平明显增高(P<0.05),且与肿瘤浸润胃壁的深度密切相关,提示PIK3CA突变可能增强了肿瘤的侵袭能力。有文献提出EBVaGC中多有 PIK3CA突变[19-20],而本研究发现,在EBVaGC中PIK3CA强阳性率为80.00%,EBVnGC中为77.63%,两者差异性较小,这可能与本实验样本量较小有关,尚需要更进一步的实验加以验证。

本实验结果显示,在EBVaGC组织中ARID1APIK3CA呈负相关 (r=-0.629,P<0.05),提示EBV、ARID1APIK3CA三者在胃癌发生发展中的相互作用关系较密切。

综上所述,部分胃癌的发生与EBV感染、ARID1APIK3CA突变相关,且ARID1APIK3CA两者在胃癌组织中的表达呈负相关,这为进一步探寻精准防癌治癌的新思路和新方法提供一定的理论依据。

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李红,谈顺,邢璐,李乾,周欢
《海南医学》 2018年第10期
《海南医学》2018年第10期文献

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