知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的干燥根茎，具有滋阴降火、润燥滑肠等功效[1]，其主要成分有萨尔萨皂苷元、吗尔考皂苷元等，黄酮类有芒果苷、异芒果苷，多糖类有4种知母多糖(Anemarn A,B,C,D)，生物碱类有胆碱、尼克酰胺及有机酸等[2-3]。知母配方颗粒是以符合《中华人民共和国药典》2015年版规定的知母饮片为原料，水作为提取溶媒，经减压浓缩、喷雾干燥、制粒加工而成，具有服用方便、便于携带、疗效确切等优点。但知母饮片经加工制成配方颗粒后，失去了传统饮片的特征。为了全面客观地评价传统饮片、水煎剂与配方颗粒之间的关联性，采用HPLC 法分别建立了知母饮片、水煎剂和配方颗粒的指纹图谱，比较三者之间的差别，为配方颗粒临床应用提供数据支撑。

1 主要仪器与试剂

日本岛津LC-20A高效液相色谱仪，赛多利斯CP225D 型电子分析天平，山东济宁JCX-250超声提取器。

知母对照药材(批号为121070-201105)，芒果苷对照品(批号为111607-201503)，购自中国食品药品检定研究院；10批知母饮片来源见表1(编号为S1—S10)，经河北省食品药品检验所鉴定为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的干燥根茎；10批知母配方颗粒(编号为B1—B10)见表2，由神威药业集团有限公司提供；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。相似度计算软件采用2012 版中药色谱指纹图谱相似度评价系统。

(5)取少量的SOCl2加入足量NaOH溶液,振荡、静置得到无色溶液,检验溶液中存在Cl-的方法是____。

2 实验方法

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液的制备

[3] 赵子剑,胡晓娟,张恩户,等. 知母药理作用的文献再评价[J].中成药,2012,34(7):1350-1353.

色谱柱：Inertsil ODS-3 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：以乙腈为流动相A，1%醋酸为流动相B，梯度洗脱条件见表3，检测波长为265 nm，流速为1 mL/min，柱温为30 ℃。

2.1.2 饮片供试品溶液的制备

林泰安性子强，爱打抱不平，村里人打官司写状纸老找他。也真怪，别人写状纸，官司打输了，再请他重写状纸，官司一准能打赢。

取知母饮片粉末(过3号筛)1 g，精密称定，加入70 %(体积分数，下同)甲醇20 mL，称定质量，共计109.65 g，超声1 h，放冷，用70%甲醇补足减失的质量，然后以4 000 r/min的转速离心15 min。过滤，即得。

 

表1 10批知母饮片来源表Tab.1 Summary of 10 batchs of Anemarrhenae Rhizoma decoction pieces

  

编号产地基源S1山西运城AnemarrhenaasphodeloidesBungeS2内蒙古(野生)AnemarrhenaasphodeloidesBungeS3河北安国AnemarrhenaasphodeloidesBungeS4河北涞源AnemarrhenaasphodeloidesBungeS5河北涉县AnemarrhenaasphodeloidesBungeS6安徽亳州AnemarrhenaasphodeloidesBungeS7河北易县AnemarrhenaasphodeloidesBungeS8山西五台AnemarrhenaasphodeloidesBungeS9山西晋城AnemarrhenaasphodeloidesBungeS10河北蔚县AnemarrhenaasphodeloidesBunge

 

表2 10批知母配方颗粒汇总表Tab.2 Summary of 10 batchs of Anemarrhenae Rhizoma formula granules

  

编号批号B116031211B216040511B316050611B416061011B516071411B616082011B716090711B816100811B916101111B1016110611

2.3.1 系统适用性及专属性试验

取不同产地的合格知母饮片100 g，加9倍水浸泡30 min，然后加热煎煮30 min，药液用0.074 mm(200目)筛过滤。将药渣再加7倍水煎煮，药液用0.074 mm(200目)筛过滤。合并2次滤液，真空旋蒸，于75 ℃旋至半干，然后放入烘箱烘干。将所得膏粉称重，研细，用药匙精确称取0.5 g膏粉，加入70%的甲醇20 mL，称定质量，超声0.5 h，放冷，用70%甲醇补足减失的质量，即得。

2.1.4 配方颗粒供试品溶液的制备

将知母配方颗粒研细，取约0.1 g，加入70%甲醇20 mL，称定质量，超声0.5 h，放冷，用70%甲醇补足减失的质量，过滤，即得。

2.2 色谱条件[4-16]

取芒果苷对照品10.85 mg，精确称定，置于200 mL容量瓶中，加入稀乙醇(取乙醇529 mL，加水稀释至1 000 mL)溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

 

表3 梯度洗脱条件Tab.3 Elution conditions

  

时间/minφ(流动相A)/%φ(流动相B)/%001003010095953013874016845520806535658055451007520

2.3 方法学考察

2.1.3 水煎剂供试品溶液的制备

孩子发现了自己真正的兴趣，走出了一条自己的道路，作为母亲的我，只能欣慰于心，只有从旁协助鼓励，乐观其成。

取对照品溶液，饮片、水煎剂、配方颗粒供试品溶液和阴性样品溶液进行检测，考察实验方法的适用性及专属性，结果见图1。由图1可以看出，样品中各个峰分离较好，峰形对称，且阴性无干扰，表明方法的适用性及专属性良好。

  

图1 饮片、阴性样品、水煎剂、配方颗粒色谱图Fig.1 Characteristic of pieces-blank，water decoction and formula granules

2.3.2 精密度试验

[5] 梁雷,边宝林,王宏洁. 不同产地知母药材中芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2010，16(16):49-51.

2.3.3 稳定性试验

按照2.1 项方法制备知母配方颗粒的供试品溶液，分别于制备后的0，2，4，6，8，10 h 时检测。结果发现，各主要指纹峰相对保留时间及相对峰面积的RSD值为0.86%～1.05%，表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.3.4 重复性试验

按照2.1 项方法制备6 份知母配方颗粒的供试品溶液，依前述方法测定。结果发现，各主要指纹峰相对保留时间及相对峰面积的RSD值为0.72%～1.72%，表明方法的重复性良好。

2.4 样品测定

分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μL，按照拟订的色谱条件进行测定，记录100 min的色谱图。

3 结果与讨论

3.1 指放图谱的建立

参照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，分别进行知母饮片、知母水煎剂、知母配方颗粒HPLC 指纹图谱测定，色谱图见图2—图4。

  

图2 知母饮片指纹图谱Fig.2 Fingerprint of Anemarrhenae Rhizoma pieces

  

图3 知母水煎剂指纹图谱Fig.3 Fingerprint of Anemarrhenae Rhizoma water decoction

3.2 参照峰的选择与共有指纹峰的标定

幼儿急疹一般烧3天，热退疹出，疹子是玫瑰疹，隐在皮下，疹子2天退了就完全好了。因为幼儿急疹的特殊性，没有出疹之前并不能确诊，所以医生只要诊断是病毒感染、没有使用抗生素就不算误诊。

  

图4 知母配方颗粒指纹图谱Fig.4 Fingerprint of Anemarrhenae Rhizoma formula granules

 

表4 知母饮片、水煎剂和配方颗粒指纹图谱分析结果

 

Tab.4 Analysis results of fingerprint of Anemarrhenae Rhizoma pieces， waterdecoction and formula granules

  

峰号饮片平均相对保留时间饮片相对峰面积(均值±SD)煎剂平均相对保留时间煎剂相对峰面积(均值±SD)煎剂提取率(均值±SD)颗粒平均相对保留时间颗粒相对峰面积(均值±SD)颗粒提取率(均值±SD)10.4970.115±0.0520.5030.154±0.0620.624±0.0430.5060.274±0.0710.417±0.02520.8020.569±0.0970.8030.432±0.1130.412±0.0750.8000.386±0.0140.275±0.0913(S)1.0001.0001.0001.0000.490±0.0841.0001.0000.292±0.07341.0400.055±0.0121.0400.058±0.0070.522±0.1031.0420.177±0.0090.420±0.11551.3520.010±0.0011.3500.025±0.0041.076±0.2211.3510.048±0.0060.913±0.12461.3900.011±0.0011.3890.027±0.0061.075±0.1541.3910.096±0.0090.924±0.09871.8080.027±0.0031.8060.015±0.0020.282±0.1021.8110.022±0.0070.194±0.11382.1780.073±0.0092.1740.038±0.0090.250±0.1472.1790.178±0.0120.204±0.10892.4270.022±0.0052.4220.005±0.0010.118±0.1532.4180.020±0.0020.080±0.179

3.3 相似度分析

采用2012版指纹图谱相似度评价系统软件计算相似度。以10批知母饮片、水煎剂、配方颗粒指纹图谱生成共有模式为对照，计算饮片、水煎剂、配方颗粒的相似度，结果见表5，关联指纹图谱见图5。

 

表5 知母饮片、水煎剂及配方颗粒的相似度数据Tab.5 Results of similarities of Anemarrhenae Rhizoma pieces, water decoction and formula granules

  

批次饮片相似度水煎剂相似度配方颗粒相似度饮片-水煎剂相似度饮片-配方颗粒相似度水煎剂-配方颗粒相似度10.9780.9810.9810.9960.9740.98120.9930.9920.9990.9870.9820.99130.9790.9980.9850.9980.9590.97940.9860.9970.9820.9830.9630.97450.9680.9830.9910.9750.9580.97660.9980.9860.9950.9850.9600.99170.9770.9830.9840.9940.9570.97580.9980.9890.9970.9940.9740.98790.9730.9750.9890.9910.9780.984100.9750.9750.9840.9850.9720.989

  

图5 知母饮片、水煎剂、颗粒指纹图谱Fig.5 Fingerprint of Anemarrhenae Rhizoma pieces, water decoction and formula granules

3.4 方法选择

比较了甲醇-1%磷酸、乙腈-1%磷酸、乙腈-1%醋酸3种流动相梯度洗脱的效果。结果表明，以乙腈-1%醋酸为流动相梯度洗脱，峰形及分离度均较好。全波长扫描显示，在265 nm处有吸收峰，此检测波长色谱图的色谱峰数量较多，峰形和分离度较好。柱温分别选用25，30，35 ℃，进样分析结果显示，30 ℃的峰形及分离度较好。

设定积分参数如下: 积分起止时间为10～100 min，斜率灵敏度为5，峰宽为0.03，最小峰的峰面积占总峰面积的比例大于1%。通过比对知母饮片、水煎剂、配方颗粒的指纹图谱，选定三者均有的9个指纹峰作为共有峰。采用2012版指纹图谱相似度评价系统软件自动匹配知母配方颗粒HPLC 图谱的相关参数，共有指纹峰面积均大于色谱峰总面积的90%。通过与对照品色谱图比较可知，在指纹图谱的9个共有峰中，峰3为知母素。分析结果见表4。

3.5 特征峰鉴别

采用梯度洗脱，以便检测出不同极性成分。本方法共检出知母饮片、水煎剂、配方颗粒的9个主要特征峰，相似度均在0.97以上，说明知母饮片、水煎剂、配方颗粒较稳定。饮片-水煎剂、饮片-配方颗粒、水煎剂-配方颗粒间的相似度均在0.95以上，表明知母饮片与知母水煎剂、知母配方颗粒在化学成分上的一致性。采用对照品对照，鉴别峰3为芒果苷峰。

4 结 语

本研究所建立的指纹图谱分析方法重复性和稳定性好，可用于饮片、配方颗粒生产过程的质量控制。中药配方颗粒已失去饮片外观形态及显微特性，难以进行直观鉴别，且仅将某成分含量限度作为配方颗粒质量控制指标较难全面反映配方颗粒的整体面貌[17-20]。而中药指纹图谱能最大限度获取有用的化学信息，较全面地反映从饮片加工到配方颗粒整个生产过程中化学成分方面的细微差异，有效控制中药产品质量。

中药配方颗粒提取方式与传统汤剂的煎煮方法相同，符合中医药传统用药的方式，提取出的药效成分与传统汤剂的药效成分近似。但在传统汤剂合煎过程中，存在药效成分的相互作用，如增溶助溶、拮抗抑制等，而中药配方颗粒为单煎提取制粒，因此，对于配方颗粒与传统合煎汤剂的物质基础差异及其导致的药效区别均有待进行更为深入的研究。

参考文献/References:

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社,2015:212-213.

[2] 王颖异,郭宝林,张立军. 知母化学成分的药理研究进展[J].科技导报，2010,28(12):110-115.

WANG Yingyi, GUO Baolin, ZHANG Lijun.Pharmacological functions of chemicals in Rhizoma Anemarrhenae[J]. Science & Technology Review, 2010,28(12):110-115.

2.1.3 供试品溶液的制备 取姜黄药材0.2 g（60目），精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）45 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，取上清液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。

[4] 党小平,毛春芹,陆兔林,等. HPLC法测定生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元[J].中草药,2009,40(2):236-238.

2.2 患儿家属对哮喘的认知水平 通过每月的定期随访及复诊，观察对照组及实验组在哮喘知识认知方面的差别。1年后实验组患儿家属对哮喘的认知明显优于对照组，(P＜0.05或0.01)。见表1。

按照2.1项方法制备知母配方颗粒的供试品溶液，进样6 次。结果发现，各主要指纹峰相对保留时间及相对峰面积的RSD值为0.58%～1.62%，表明仪器的精密度良好。

LIANG Lei，BIAN Baolin，WANG Hongjie.Determination of mangiferin and timosaponin BⅡ in Anemarrhenae Rhizoma from different areas[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，2010，16(16):49-51.

[6] 容穗华,林海,高妮. 不同产地知母有效成分含量的HPLC法测定[J].现代医院，2011,11(6):7-9.

RONG Suihua，LIN Hai，GAO Ni. Determination of effective components in Anemarrhenae Rhizoma from different areas by HPLC[J]. Modern Hospital，2011,11(6):7-9.

在本次课题中，我们以河北地区多所高校为例，对在校大学生及毕业一年内的应届毕业生做了一个抽样调查。调查结果显示：在就业模式选择上，40%的大学生选择通过对口校招实现就业选择，继续求学深造的占总抽样人数的27%，主动去应聘有意愿的企业或参加公务员及事业单位考试的人数占18%，自主创业的大学生及应届毕业生仅有15%。在自主创业部分中，26.7%的大学生选择从事或打算从事与共享经济领域相关的创业项目，即共享经济领域创业大学生占总体抽样人数比例为4%，课题中调查整理得到大学生就业模式现状如图1所示。

[7] 沙东旭,刘兆妍,张满来,等. HPLC-ELSD 测定知母中知母皂苷BⅡ的含量[J].药物分析杂志,2009,29(12):2106-2109.

SHA Dongxu , LIU Zhaoyan, ZHANG Manlai , et al. HPLC-ELSD determination ftimosaponin BⅡ in Anemarrhena asphodeloides Bge[J].Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis,2009,29(12) :2106-2109.

国内学者刘杰等[3]研究发现，钢支撑+围护桩对基坑土体侧向变形有很好的限制作用，改变钢支撑的施作位置对限制基坑的侧向变形有重要作用.潘隆武等[4]就盾构井开挖进行研究，发现盾构井部分连续墙变化具有空间尺寸影响，长边连续墙变形比较均匀，而短边连续墙最大位移随着开挖深度一直下降，形成向四周发展的漏斗状分布.万志辉等[5]研究发现，围护结构的入土深度达到一定程度后，对变形影响不明显.而土体的弹性模量及内摩擦角增大，明显围护结构位移变小.

[8] 宋坤,陆兔林,季德.不同产地、不同炮制品知母中菝葜皂苷元含量的比较研究[J].中国药师,2009，12(10):1338-1340．

SONG Kun,LU Tulin,JI De.Comparative studies on contents of sarsasapogenin among radix Anemarrhenae from different sources and processings[J]. China Pharmacist, 2009，12(10):1338-1340．

[9] 钟可,王文全,靳凤云,等. HPLC-ELSD法同时测定河北产道地药材不同物候期知母中知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量[J].中华中医药杂志,2013,28(6):1710-1713.

ZHONG Ke, WANG Wenquan, JIN Fengyun, et al.Simultaneous determination of timosaponin AⅢ and timosaponin BⅡ in Rhizoma Anemarrhenae from Hebei in the different phenological periods by HPLC-ELSD[J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy,2013,28(6):1710-1713.

[10] 尹茶,吴婷婷,朱东亮,等. HPLC-ELSD 同时测定知母药材中4 种主要皂苷的含量[J].药学实践杂志,2012,30(6):433-436.

YIN Cha，WU Tingting，ZHU Dongliang, et al.Determination of four major steroid glycosides in Anemarrhena Asphodeloides by HPLC-ELSD[J]. Journal of Pharmaceutical Practice, 2012,30(6):433-436.

[11] 季德,苏晓楠,黄紫炎,等.HPLC-MS法测定知母盐炙前后8种成分量变化[J].中草药,2017,48(9):1784-1790.

JI De, SU Xiaonan, HUANG Ziyan, et al.Determination of eight constituents in Anemarrhenae Rhizoma before and after salt processing by HPLC-MS[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2017,48(9):1784-1790.

[12] KIM N,RYU S,LEE D,et al.A metabolomic approach to determine the geographical origins of Anemarrhena Asphodeloides by using UPLC-QTOF MS [J].J Pharm Biomed Anal, 2014,92:47-52.

[13] 邱昆成,孙振刚,何倩梅,等.LC-MS-MS 测定配伍黄柏对知母中4种有效成分含量的影响[J].中国实验方剂学杂志,2016,22(14):84-88.

QIU Kuncheng，SUN Zhengang，HE Qianmei,et al.Effects of phellodendri cortex on contents of four ingredients from Anemarrhenae Rhizoma determined by LC-MS-MS[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2016,22(14):84-88.

[14] 黄玉瑶,张洪坤,路丽,等.一测多评法评价不同主产区春知母饮片的质量[J].中药材,2017,40(2):387-391.

钢筋灌浆套筒连接是目前装配式混凝土结构中常见的竖向钢筋连接方法，其应用已有50余年的历史。从20世纪60年代后期Alfred A.Yee首次提出钢筋套筒灌浆连接技术后，该技术很快被应用到美国、日本等国家的工程项目中[1]。此后，专家学者展开了一系列的研究工作[2-5]，套筒灌浆连接逐渐在装配式混凝土框架结构和剪力墙结构中得到广泛应用。近年来，我国也引入了该项技术，并制定了相关的技术规范与标准[6-7]。工程技术人员开展了大量研究工作，并取得了一些创新成果。

[15] XIE Yuanyuan, WANG Xiuming, WANG Sihuan, et al. Metabolism and pharmacokinetics of major polyphenol components in rat plasma after oral administration of total flavonoid tablet from Anemarrhenae Rhizoma[J].J Chromatogr, 2016,1026:134-144.

三是社会化要靠产业化的途径来实现。服务对象和参与主体的多元化只是解决了资格的问题，而要使得养老服务体系真正实现“社会化”发展，必须通过“产业化”的途径。“产业化”本义是指以行业需求为导向，以实现效益为目标，依靠专业服务和质量管理，形成的系列化和品牌化的经营方式和组织形式。“产业化”强调产业本身的生产性、规模性、运营性、职业化。现在讲养老服务的产业化，其实质是指将养老服务业作为一个产业来看待，按照产业的组成要素和发展规律来培育和运营——包括培育多元产业主体，鼓励社会资金的投入，促进养老服务大规模发展，提升养老服务从业者的职业化，带动整个养老服务产业链的发展。

[16] NIAN S H, LI H J, LIU E H, et al. Comparison of α-glucosidase inhibitory effect and bioactive constituents of Anemarrhenae Rhizoma and fibrous roots[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis ,2017,145:195-202.

捏脊对老年性便秘、厌食也很有效。不过，老年人的脊背常伴有变形、驼背或者皮肤干燥，捏拿时要注意保护皮肤。

[17] 李松林，宋景政，徐宏喜.中药配方颗粒研究浅析[J].中草药，2009，40(sup)：1-7.

[18] 李军山,陈钟,彭新华,等.杜仲不同炮制品配方颗粒的红外快速鉴别[J].河北工业科技,2016,33(6):503-508.

LI Junshan,CHEN Zhong,PENG Xinhua,et al. Rapid identification of different processed products of Eucommia Ulmoides formula granules by FTIR[J]. Hebei Journal of Industrial Science and Technology,2016,33(6):503-508.

又由比尔-朗博定律可知，待测物质浓度C与吸光度A的关系如图2所示，从图中可以看出，当待测物质浓度超过一定范围时，浓度与吸光度将不再满足线性关系[6]，因此，在对待测气体进行定量分析时，要尽量选择待测物质浓度在其线性范围内。

[19] 周维，胡昌江，戴德荣，等.丹参饮片、标准水煎剂、配方颗粒HPLC特征图谱相关性研究[J].中国现代中药，2016，18(9)：1100-1102.

水工隧洞衬砌质量通过预防措施可减少混凝土质量通病，但对出现质量通病的部位及时通过科学、合理的方式处理后，可修复混凝土外观质量，这在一定程度上对保证混凝土的耐久性起到一定的积极作用。

ZHOU Wei，HU Changjiang ，DAI Derong, et al.Study on correlation of characteristic HPLC chromatogram of pieces，standard decoction and formula granule of Radix Salviae Miltiorrhizae[J]. Modern Chinese Medicine, 2016，18(9)：1100-1102.

[20] 贺爱玲.中药配方颗粒临床应用现状分析及展望[J].中国药事，2017，31(10)：1205-1209.

HE Ailing.On current status and future prospect of clinical application of TCM formula granules[J]. Chinese Pharmaceutical Affairs, 2017，31(10)：1205-1209.