芦荟是一种古老而传统的常用中药，从传统医学到现代医学，对芦荟的药用价值都给予了肯定[1]。现代药理学研究发现，芦荟多糖具有抗肿瘤、免疫调节、抗突变、抗辐射、抗衰老、抗溃疡、保护脑神经等多种药理作用[2]。本实验着重研究芦荟多糖增强免疫功能作用，并对其机理进行进一步的探讨。

1 资料和方法

1.1 一般资料：芦荟多糖：自制。取库拉索芦荟，原料清洗→去皮称重→打浆→按比例加水→加热浸提（超声波处理30 min）→抽滤→清液保留，残渣再提取，合并提取液→浓缩→除蛋白→加95%乙醇沉淀→复溶后再加95%乙醇沉淀，反复3次→无水乙醇洗涤沉淀多糖→低温真空干燥→芦荟粗多糖[3]。

1.2 实验动物：80只清洁级、雄性、体重18～22 g的KM小鼠，哈尔滨医科大学试验动物学部提供，许可证号：SCXK（黑）2013-001；饲料由哈尔滨医科大学试验动物学部提供，许可证号：SCXK（黑）2013-001；饲养环境为清洁级环境，温度（23±2）℃，湿度（55±10）%。

1.3 剂量选择与受试物给予方法：将80只小鼠分为2个免疫实验组，每个免疫实验组设三个剂量组：260 mg/kg·BW（高剂量组，相当于成人推荐剂量的20倍）、195 mg/kg·BW（中剂量组，相当于成人推荐剂量的15倍）、130 mg/kg·BW（低剂量组，相当于成人推荐剂量的10倍）和一个阴性对照组。免疫一组即细胞免疫实验组，进行脏器/体重比值测定及ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验；免疫二组即体液免疫实验组进行血清溶血素的测定。各剂量组配制方法如下：高剂量组取样品2 g加蒸馏水研磨至154 mL，中剂量组取样品1.6 g加蒸馏水研磨至164 mL，低剂量组取样品1 g加蒸馏水研磨至154 mL。三个剂量组动物分别给予不同浓度受试物，阴性对照组给予相应体积蒸馏水。各组动物均采用经口灌胃方法，按20 mL/kg·BW体积连续灌胃30 d后，进行免疫学实验。

身为全国医生的头号人物，院使也才一个月六百元！这么低的工资，如何生存？当然，从大环境来说，古代的官员俸禄一直是偏低的。文武百官，正式的俸禄几乎可以忽略不计，主要收入还是靠陋规和灰色收入。身为御医，自然也不例外。区区二三两的银子，有和没有，其实对御医来说，并无差别。多数御医的收入，还是来自于王公贵族们的馈赠。

1.4 主要仪器与试剂：动物天平（德国sartorius，BSA2201型）、紫外可见分光光度计（北京普析公司，TU-1901型）、二氧化碳培养箱（美国Thermo Fisher，3111型）、酶标仪（瑞士 Tecan公司，Sunrise型）、电子天平（瑞士METTLER公司，AL204型）、离心机（德国SIGMA公司，6-16K型）、显微镜（日本OLYMPUS公司，BX53型）、智能循环水浴（德国IKA公司，IC control pro 20 c型）。

1.5.3 血清溶血素的测定（半数溶血值法）：末次给药后，每只动物腹腔注射0.2 mL 2%的SRBC，4 d后，摘除眼球取血并分离血清。取血清50μL加SA缓冲液9.95 mL，即稀释200倍。取稀释后血清1 mL置试管内，依次加入10%SRBC 0.5 mL，补体1 mL。另设不加血清的对照管，置37℃恒温水浴中保温30 min，反应毕，将管移入冰浴中终止反应。2000 r/min离心10 min，取上清液1 mL，加都氏试剂3 mL于试管内。同时取10%（v/v）SRBC 0.25 mL加都氏试剂至4 mL，于另一试管内充分混匀。放置10 min后，用紫外可见分光光度计于540 nm波长处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。

1.5 试验方法[4]

2.1 芦荟多糖对小鼠体重的影响：经口给予小鼠不同剂量的芦荟多糖30 d后，各剂量组小鼠体重与阴性对照组比较，均无显著差异（P＞0.05），说明芦荟多糖对小鼠体重无影响，详见表1、2。

看到卢一平语噎,郝桂芹转身走了。走几步,回头又说。你再想想,将来你儿子去城市买房,开发商用杂志和你结算吗？

图1显示，人民币汇率预期的一个单位标准差的正向冲击在第1期时对货物贸易跨境资金流出基本不具有影响，第2期开始对货物贸易跨境资金流出产生负面冲击，并在第4期达到最大值，随后对其跨境资金流出的负面冲击在一定区间内波动，并基本维持在负面冲击，直到第8期以后才出现正向影响，随后保持较长时间的正向冲击，第16期后转为负面影响，随后负面影响逐渐增大。由此可见，人民币汇率预期变化对货物贸易项下跨境资金流出的影响具有滞后性，在第二个季度后才开始出现负面冲击，并在滞后4个季度达到最大，在4个季度以后影响开始减弱，直到8个季度以后汇率预期的负面影响才会消失并转为正向影响，在较长时间后又转为负面冲击。

2.2 芦荟多糖对小鼠脏器/体重比值的影响：经口给予小鼠不同剂量芦荟多糖30 d后，其脾脏/体重比值各剂量组与阴性对照组比较，均无显著差异（P＞0.05）；胸腺/体重比值各剂量组与阴性对照组比较，均无显著差异（P＞0.05）。说明芦荟多糖对小鼠脏器/体重比值无影响，详见表3。

1.5.2 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验（MTT法）：将受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank's液的小平皿中用镊子轻轻将脾撕碎，用4层纱布将脾磨碎，制成单细胞悬液。Hank′s液洗 3 次，每次离心 10 min（1000r/min）。然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中，用酚兰染色计数活细胞数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为3×106个/mL。将每份脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1 mL，一孔加75μL ConA液（相当于7.5μg/mL），另一孔作为对照。置5%CO2培养箱中培养68 h。每孔轻轻吸去上清液0.7 mL，加入0.7 mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入 MTT（5 mg/mL）50 μL/孔，继续培养4 h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混均，使紫色结晶完全溶解。移入96孔培养板，每孔分成3孔，用酶标仪于波长570 nm处测定OD值。用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞增殖能力，分别比较各组与空白对照组的光密度差值的差异情况。

2 结果

1.5.1 脏器/体重比值测定：取脾脏、胸腺，用滤纸拭净血污，应用分析天平进行称重后计算脏器/体重比值。

 

表1 芦荟多糖对细胞免疫实验小鼠免疫前后的体重影响 （±s）

  

注：与阴性对照组比较，均无显著性差异P＞0.05

 

组别（mg/kg·BW）增长值（g）260 10 20.10±0.84 28.01±1.38 7.91±0.95 195 10 20.04±0.77 27.97±1.04 7.93±0.88 130 10 20.15±0.80 28.13±1.47 7.88±0.90阴性对照组 10 20.02±0.87 28.62±0.81 8.60±0.62动物数（只）实验前体重（g）实验后体重（g）

 

表2 芦荟多糖对体液免疫实验组小鼠免疫前后的体重影响 （±s）

  

注：与阴性对照组比较，均无显著性差异P＞0.05

 

组别（mg/kg·BW）增长值（g）260 10 19.96±0.98 28.03±0.76 8.07±0.61 195 10 19.93±0.98 28.04±0.66 8.11±0.55 130 10 19.98±0.95 27.77±0.64 7.79±0.52阴性对照组 10 19.90±1.05 28.06±0.76 8.16±0.84动物数（只）实验前体重（g）实验后体重（g）

1.6 数据统计及结果判定：按卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）规定，对各试验数据结果进行统计分析。在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能。

 

表3 芦荟多糖对细胞免疫实验组小鼠脏器/体重比值的影响 （±s）

  

注：与阴性对照组比较，均无显著性差异

 

组别（mg/kg·BW）胸腺/体重比值（mg/g）260 10 4.58±0.20 2.55±0.14 195 10 4.42±0.20 2.52±0.20 130 10 4.54±0.28 2.61±0.18阴性对照组 10 4.50±0.23 2.60±0.16动物数（只）脾脏/体重比值（mg/g）

2.3 芦荟多糖ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验：经口给予小鼠不同剂量芦荟多糖30 d后，ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验，各剂量组与阴性对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。说明芦荟多糖能够增强淋巴细胞的增殖能力，详见表4。

5） 用户热水系统：本系统是将20℃的水由供水增压泵引出，输入到板式换热器B与经板式换热器A换出96℃的热水换热后，产生的热水进入热水储罐，作为用户热水。当水温低于设计值90℃时，由回水泵将热水从热水储罐中输送回板式换热器B继续吸热，直到水温达到设计值90℃时停止。

2.4 芦荟多糖对小鼠血清溶血素的影响：经口给予小鼠不同剂量芦荟多糖30 d后，半数溶血值高、中剂量组与阴性对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。即芦荟多糖能增强小鼠半数溶血值（HC50），详见表 5。

  

注：**与阴性对照组比较，P＜0.01，*与阴性对照组比较，P＜0.05

 

组别（mg/kg·BW） 动物数（只） 光密度差值经对数转换260 10 -1.734±0.413**195 10 -1.870±0.457**130 10 -2.064±0.289**阴性对照组 10 -2.885±0.361

 

表5 芦荟多糖对小鼠半数溶血值（HC50）的影响 （±s）

  

注：**与阴性对照组比较，P＜0.01，*与阴性对照组比较，P＜0.05

 

组别（mg/kg·BW） 动物数（只） HC50 260 10 130.12±28.2**195 10 123.62±36.4*130 10 73.23±37.9阴性对照组 10 63.48±34.2

3 讨论

经口给予小鼠不同剂量芦荟多糖30 d后，实验前后体重变化、脾脏/体重、胸腺/体重比值各剂量组与阴性对照组比较，差异均无统计学意义。小鼠淋巴细胞转化实验各剂量组与阴性对照组比较，差异均有统计学意义；血清溶血素实验高、中剂量组与阴性对照组比较，差异有统计学意义。依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版），芦荟多糖在细胞免疫、体液免疫两个方面检测结果为阳性，故在本实验条件下，可判断芦荟多糖具有增强免疫功能。

参考文献

［1］ 朱鸿哲，肖佳音，巨雷．芦荟多糖对实验动物抗寒作用的实验研究［J］．中医药信息，2014，31（3）：18-19．

［2］ 白云，章艳，刘萍，等.芦荟多糖对脑缺血模型大鼠脑组织超微病理学形态变化的影响［J］.中医药信息，2010，1（2）：26-28.

［3］ 钟正贤，周桂芬．芦荟多糖对实验性胃溃疡作用的初步观察［J］．中草药，1995，26（2）：83-84．

［4］ 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范［Z］.2003.