脑出血是一种常见且严重的脑血管疾病，是导致死亡的主要原因之一。研究表明，脑出血后红细胞裂解、凝血酶释放及氧化应激等引起的炎症反应是导致脑出血后脑水肿的主要原因[1-3]。脑水肿的产生和发展是导致脑出血病情恶化或死亡，影响患者预后及康复的关键因素。因此，国内外大量学者积极研究寻找能有效阻止脑水肿的方法，从而更大程度地提高脑出血患者的存活率，改善预后。中医药对脑出血后脑水肿具有良好的防治作用。本课题组临床应用星蒌承气汤加味治疗急性脑出血，在抑制脑水肿方面取得了很好的疗效，但其作用机制尚不明确。为进一步明确其作用机制，本研究采用基底节注入自体动脉血的方法制备脑出血大鼠模型，通过检测大鼠脑组织含水量及血清基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及水通道蛋白-4(AQP-4)的表达情况，从动物实验方面探讨星蒌承气汤加味抗脑水肿的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级成年雄性SD大鼠70只，3～4月龄，体质量300～360 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可证号：SCXK(京)2014-0004。于22～26 ℃室温环境下饲养，自由进水进食，12 h昼夜交替。

我自己曾经就是一个很情绪化的妈妈，刚有女儿的时候，除了幸福感，剩下的就是郁闷：这么小的一个小东西，我不敢抱、不敢碰，更别提给她洗澡了。要是没有母亲帮忙，我估计只能陪着她发呆。那时，患得患失的心情很严重，情绪也就跌宕起伏得厉害。

1.1.2 主要药物及试剂 星蒌承气汤加味，药物组成：胆南星10 g，瓜蒌10 g，大黄5 g，芒硝5 g，水蛭3 g，花蕊石20 g，三七粉4 g，郁金10 g，桃仁10 g，川牛膝15 g，泽泻15 g，生白术15 g，车前子10 g，茯苓10 g，益母草15 g，甘草6 g。以上药物加水煎煮并浓缩至含生药量为2 g/mL(承德市中医院制剂室制备,批号17030112)的药液，4 ℃保存备用。大鼠TIMP-3、MMP-9及AQP-4酶联免疫吸附检测(ELISA)试剂盒(上海联硕生物科技有限公司)。

1.1.3 主要仪器 680型全自动酶标仪,美国BIO-RAD(伯乐)；电子天平， YP2002型，上海越平科学仪器有限公司；大小鼠双臂数显脑立体定位仪，D02587-003型，深圳市瑞沃德生命科技有限公司。

经济发展方式，是实现经济发展的方法、手段和模式。转变经济发展方式，不仅要突出经济领域中“数量”的变化，更重要的是强调和追求经济运行中“质量”的提升和“结构”的优化。当前，转变经济发展方式是经济发展的紧迫任务，它直接关系到未来我国国民经济与社会能否持续健康发展，直接关系到我国国民经济的整体素质，也直接关系到我国的国际竞争力和抗风险能力。作为黄蓝两大国家战略重叠融合的唯一城市——东营市，是建设黄河三角洲高效生态经济区的中心城市和开发建设主战场，是建设山东半岛蓝色经济区的重要前沿城市，加快经济发展方式转变，对于推进黄蓝国家战略的实施，实现“两个率先”意义突显。

1.2.1 模型制备 随机选取雄性SD大鼠54只作为造模动物，均采用基底节注入自体动脉血的方法制备脑出血动物模型[4]。方法：54只大鼠以10%水合氯醛400 mg/kg腹腔注射麻醉，固定于脑立体定位仪上，颅顶中线切口，剥离骨膜，暴露前卤，在前卤前0.2 mm、中线右侧3.5 mm处钻一直径约1.0 mm的小孔，自体尾动脉抽取适量血，在钻孔处用微量进样器垂直进针6 mm(此处为脑右侧基底节区)，缓慢注入80 μL动脉血，注射完毕后留针10 min，防止血液外溢。骨蜡止血，消毒，缝合皮肤。另外16只大鼠颅顶中线切口，右侧基底节区钻孔，但不注血，作为假手术组。

1.2.2 分组及给药方法 54只造模大鼠在自然苏醒后参照Longa 5级4分法[5]进行神经功能评分，取评分为1～3分的大鼠入组实验，共纳入48只，随机分为3组，即模型组、星蒌承气汤加味高剂量组及星蒌承气汤加味低剂量组，每组各16只。星蒌承气汤加味高剂量组及星蒌承气汤加味低剂量组大鼠分别予星蒌承气汤加味药液50、25 g/(kg·d)灌胃，假手术组及模型组予0.9%氯化钠注射液3.5 mL/d灌胃，均早、晚各1次，连续15 d。

由表2可见，与假手术组相比，模型组大鼠血清TIMP-3、MMP-9及AQP-4水平均明显升高(P<0.05)。与模型组相比，星蒌承气汤加味低剂量组及高剂量组大鼠血清TIMP-3、MMP-9及AQP-4水平均明显降低(P<0.05)，且星蒌承气汤加味低剂量组与高剂量组组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

对于弱信号检测系统，若各单元模块电位不统一，将会引起互相干扰，严重影响信号的检测精度。通过接地，可将各单元的电位统一，从而消除相互干扰。此外，接地同时也可消除进线干扰。正确的接地可以克服干扰对检测系统精度的影响，而不恰当的接地，非但无法达到目的，反而可能会加大干扰的影响。常见的接地方法有：单点串联接地，单点并联接地、多点接地等[9]。

1.2.3.1 脑组织含水量 采用干湿质量法测定大鼠脑组织含水量[6]。方法：最后1次灌胃后，4组均随机抽取6只大鼠断头处死，取右侧脑组织，于电子天平(精确度0.1 mg)测得湿质量，然后置于100 ℃烤箱内烘干24 h，恢复室温(22～26 ℃)后，测得干质量。脑组织含水量=(湿质量-干质量)/湿质量×100%。

1.2.3.2 血清TIMP-3、MMP-9及AQP-4 4组大鼠均断头处死，腹主动脉取血，严格按照ELISA试剂盒操作步骤，在LIR系统和酶标仪中将相应的参数设置好，对标准品倍比稀释，选择相应的板条，空白对照孔不加样，标准品孔加标准品50 μL、过氧化物酶(HRP)标记链霉亲和素50 μL，待测样品孔加入标本40 μL、相应抗体10 μL、HRP标记链霉亲和素50 μL。盖上封板膜，轻轻震荡均匀，37 ℃温育60 min，将30倍浓缩液用蒸馏水30倍稀释备用，揭掉封板膜，弃去液体、甩干，加洗涤液，静置30 s弃去，重复5次,每孔加显色剂A、B各50 μL，混匀，37 ℃避光显色15 min,每孔加终止液50 μL，在加入终止液10 min内，以空白孔调零。450 nm波长处测量各孔吸光度值，根据标准品浓度及各孔光密度(OD)值计算标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值分别计算血清中TIMP-3、MMP-9及AQP-4相应浓度。

与假手术组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05

1.2 实验方法

2.1 4组大鼠一般情况 实验过程中4组共64只大鼠均无脱失，全部进入结果分析。实验过程中大鼠一般状态及精神良好，无脱毛、虚弱、体质量减轻等情况。假手术组大鼠活动最为旺盛，星蒌承气汤加味高剂量组及低剂量组大鼠活动力稍优于模型组。整体而言，星蒌承气汤加味高剂量组及低剂量组大鼠粪便量是模型组的2倍，大便较模型组颜色稍浅且柔软，星蒌承气汤加味高剂量组大便稍多于低剂量组。

罗瑞不耐烦地说：“行了行了，别啰嗦了，姐，你是知识分子，比我们水平高，快分析分析，咱们怎么对付这个外号叫老福的警察。”

2 结 果

采用方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2.2 4组大鼠脑组织含水量比较 见表1。

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 表1 4组大鼠脑组织含水量比较  

  

组 别n脑组织含水量P值t值假手术组662.50±2.34--模型组674.17±1.47*0.00010.31星蒌承气汤加味低剂量组671.83±1.94△0.0415.84星蒌承气汤加味高剂量组669.33±2.16△0.0019.89

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差表示，

由表1可见，与假手术组相比，模型组大鼠脑组织含水量显著增加(P<0.05)。与模型组相比，星蒌承气汤加味低剂量组及高剂量组大鼠脑组织含水量明显降低(P<0.05)。星蒌承气汤加味低剂量组与高剂量组脑组织含水量比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 4组大鼠血清TIMP-3、MMP-9及AQP-4水平比较 见表2。

 表2 4组大鼠血清TIMP-3、MMP-9及AQP-4水平比较  

  

组 别nTIMP-3(ng/L)MMP-9(μg/L)AQP-4(μg/L)假手术组1610.44±0.9910.99±1.7311.38±1.15模型组1614.46±1.60*31.30±1.03*24.42±1.28*星蒌承气汤加味低剂量组1611.27±0.87△30.21±1.51△23.46±0.95△星蒌承气汤加味高剂量组1611.04±0.99△29.90±2.25△20.61±1.38△

与假手术组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05

1.2.3 检测指标及方法

3 讨 论

脑出血发生后，以脑水肿为特征的继发性脑损害是影响脑出血患者康复的重要因素[6]。大量临床研究表明，在西医综合治疗的基础上配合活血化瘀、化痰开窍、通腑泄热的中药治疗脑出血，能提高临床疗效，减轻脑水肿及神经功能缺损，提高日常生活能力，效果优于单纯的西医综合治疗[7-9]。中医学认为，脑出血急性期以痰热互结为主要病机，用化痰通腑的中药取“急则治其标，损其偏盛”之义，具有恢复气机、通痹达络、引火下行、急下存阴，以防发生劫阴内陷等变证的作用。同时，传统的中医理论认为“离经之血便是瘀血”。清代医家唐容川在《血证论》中明确指出“血初离经，清血也，鲜血也,然既是离经之血，虽清血鲜血，亦是瘀血”，在治疗上提出“瘀血不去，则出血不止，新血不生……故凡血证总以去瘀为要”，故活血化瘀亦是脑出血的治疗大法之一。而脑水肿的病机为“瘀”和“水”，故在治疗上应配伍活血化瘀、行气利水之药。本研究星蒌承气汤加味方中大黄配伍芒硝为君药，泻下攻积，清热消肿，使“水”由大便而出。胆南星、瓜蒌化痰开窍，清火醒神；泽泻清热利湿；三七、桃仁、川牛膝、益母草、花蕊石活血止血，化瘀通络；郁金行气解郁，凉血破瘀，共为臣药。佐以生白术、车前子、茯苓行气利水。甘草调和诸药，为使药。诸药合用，共奏开窍醒神、活血化瘀、通腑泄热、行气利水之效。临床报道显示，星蒌承气汤可以降低颅内压，增加有效循环灌注,改善脑缺血区的微循环[7]。现代药理研究表明，郁金提取物姜黄素具有抗氧化及减轻炎症的作用，可通过抑制脑出血后的核转录因子κB(NF-κB)通路，减少部分炎症因子的表达和T淋巴细胞渗入大脑，从而有效地减轻脑出血后脑水肿的发生[10-11]；水蛭提取物水蛭素有抗凝血酶活性、抗血栓形成、改善血脑屏障(BBB)通透性、减轻脑水肿及促进神经元功能恢复等作用[12]；三七总皂苷能抑制过氧化物的生成，促进脑出血后的血肿吸收，减轻炎症反应及脑水肿，改善冠脉微循环[13]。

存放库底架以工字钢立柱支撑，左右立柱顶端各安装一个轨道梁。考虑到强度和稳定性，轨道梁采用工字钢结构，并沿纵向布置多个筋板，增强了承重能力。轨道梁上部导轨面整体加工成型，便于活动小车滚轮在上面进行直线运动。

李白、鲍照都创作了为封建女性的悲剧命运代言的诗歌，如《白头吟》和《王昭君》。鲍照借女子失宠写正直之士不容于世，如《选诗补注》所说“此殆明远为人所间，见弃于君，故借是题以喻所怀。”失宠女子的命运中依稀有作者自己的身影，表面上是代言，实为自己抒愤。

脑出血发生后，小胶质细胞激活并释放大量的细胞因子和趋化因子来破坏BBB，导致外围炎症细胞、巨噬细胞和淋巴细胞等通过受损的BBB进入血肿周围脑组织，从而加重脑出血后脑水肿及神经功能损伤[14-15]。近年来研究发现，在脑出血急性期，血液中基质金属蛋白酶(MMPs)、AQP-4等炎症相关因子含量明显升高，同时也存在如TIMP-3在内的抗炎因子[16-17]。正常情况下，MMPs及其组织抑制剂以酶原-抑制剂复合物的形式存在，对血管重构、神经炎症及调节细胞环境具有重要意义[18-20]。其中MMPs家族中的MMP-9与脑组织损伤关系最为密切。脑出血发生后，在巨噬细胞、星形胶质细胞及噬中性粒细胞中的酶原-抑制剂复合物自动解离，导致血液中MMP-9的含量升高，其通过降解神经血管基质的作用加重BBB损伤而加重出血[18-20]，同时TIMP-3等因子含量随之升高。TIMP-3已被证明具有抗炎作用[21]，但TIMP-3发挥作用亦需与MMPs结合，其在缺血状态下明显增多且在体外可以促进神经细胞的凋亡。但Grossetete M等[19]并未证实TIMP-3在体内可导致脑出血大鼠神经细胞的凋亡。AQP-4主要分布在血管周围的星形胶质细胞和中枢神经系统的胶质界膜，其通过影响水和电解质平衡加重脑出血后脑水肿的发生，进而影响神经系统。Fang J等[22]实验研究表明，抑制AQP-4的含量可保护神经功能，抑制脑出血后的炎症因子的激活及炎症反应的发生，有效减少脑水肿的发生。

本研究对脑出血模型大鼠以活血利水通腑之星蒌承气汤加味进行干预。结果显示，星蒌承气汤加味低剂量组及高剂量组大鼠较模型组大鼠大便量明显增加且稍软，提示星蒌承气汤加味有通腑之效，以实现“水”由大便出的目的。星蒌承气汤加味低剂量组及高剂量组大鼠脑组织含水量低于模型组(P<0.05)，提示星蒌承气汤加味可有效减轻脑出血大鼠脑组织水肿。星蒌承气汤加味低剂量组及高剂量组大鼠血清TIMP-3、MMP-9及AQP-4含量均较模型组下降(P<0.05)，表明星蒌承气汤加味可降低TIMP-3、MMP-9及AQP-4的表达，抑制脑出血诱发的炎症反应，进而减轻脑组织水肿及出血灶周围脑组织神经元的损害，保护脑神经功能。

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