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流式细胞术在非霍奇金淋巴瘤诊断中应用

更新时间:2009-03-28

非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkinlymphoma,NHL)是一种较为常见的血液系统恶性肿瘤,近年来其发病率逐渐增高,严重影响患者生活质量[1]。以往肿瘤分类常按形态学及临床特征进行,其免疫表型未能得到反映。本文旨在探讨应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测免疫表型,并分析DNA倍体对于诊断NHL的临床意义,报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010年4月—2016年4月在平舆县人民医院诊治的60例NHL患者为观察组,男44例,女16例;年龄20~78(53.54±6.84)岁;病理类型:B细胞性淋巴瘤42例,T细胞性淋巴瘤18例。选取同期20例反应性淋巴结增生患者为对照组,男10例,女10例;年龄20~73(50.41±7.33)岁。纳入标准与排除标准[2]:①均经病理学诊断确诊NHL。②均未合并其他严重疾病。③愿意配合研究。④排除未行病理学检查确诊。⑤排除预计生存期<3个月。两组在性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

参考答案: (1) 减少偶然性,使结果更加准确、可靠(2) 对照(或排除生理盐水对小鼠的影响) (3) 血糖葡萄糖溶液 (4) 胰岛 糖尿。

1.2 方法

1.2.1 试剂及仪器 流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司)、氩离子激光器(德国Sacher Lasertechnik公司)、荧光标记单克隆抗体(普健生物科技有限公司)、倍体分析试剂(美国Sigma公司)。

1.2.2 检测方法 采集淋巴结组织(细胞保持完整性),加适量质量分数0.9%氯化钠溶液,研磨组织块至匀浆状,加质量分数0.9%氯化钠溶液10 ml,吸取组织匀浆,经多次过滤、离心,得单细胞悬液。①检测免疫表型:将单细胞悬液细胞数调整为10×109 /L,将所需表面抗体10 μl置入试管中,后分别加入单细胞悬液100 μl,室温下,置于暗处,避光时间约为20 min,Q-prep破红,采用磷酸缓冲液(PBS)洗涤,335.4×g离心5 min,去掉上清液,后加入破膜剂100 ml,轻摇至均匀,置于室温5 min,置入所需胞内抗体10 μl,避光15 min,后加入4 ml PBS,335.4×g离心5 min,去除上清液,另加入500 ml PBS,再采用FCM检测。检测前采用标准荧光微球进行仪器校正,以CD 10对CD 19行克隆性分析。采用Elite 4.5软件分析数据。②分析DNA倍体:体细胞正常者是二倍体,若呈现异倍体则提示可能为恶性肿瘤。选取NHL组织少许正常淋巴细胞作为正常二倍体细胞,其直方图表现为DNA含量,求算DNA指数(DI),DI为含2个以上G0/G1峰的DI。DI=所取肿瘤组织肿瘤细胞G0/G1峰值与所取肿瘤组织中正常淋巴细胞G0/G1峰值之商。③S期细胞比率(SPF)。该参数是指DNA合成期细胞所占全部细胞比例,可作为细胞增殖程度反映指标。

2.2 观察组不同临床分期NHL淋巴细胞与对照组DI、SPF比较 NHL-Ⅰ期和NHL-Ⅱ期DI、SPF与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。而NHL-Ⅲ期和NHL-Ⅳ期的DI、SPF均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

1.3 统计学处理 应用SPSS 19.0统计软件分析数据,计量资料以均数±标准差表示,组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2.1 两组淋巴细胞DNA异倍体检出率、DI值、SPF比较 观察组较对照组DNA异倍体检出率、DI值、SPF均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2 结果

招聘需求人数规模度指标用来表征岗位的人数需求紧缺度,即岗位在同行业中的人数需求紧缺情况。计算方法是先对招聘需求实际人数进行修正,修正值为招聘需求人数和发布频率的比值。招聘需求人数规模度指标为岗位招聘需求人数修正值和岗位所在细分领域内招聘需求人数修正值总和的比值。发布频率指标用于表征岗位招聘需求在时间上的紧缺程度,意思是平均每家公司每天发布的岗位需求情况,计算方法是招聘发布公司数量和发布天数的乘积比招聘发布条数。

2.3 观察组不同病理分型NHL淋巴细胞与对照组DI、SPF比较 两种病理分型组DI、SPF均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中高恶性组DI、SPF较高于低度恶性组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

1.2.3 结果判定 DI=(1.00±0.05)代表二倍体肿瘤细胞,DI=(1.00±0.15)代表近二倍体肿瘤细胞,其余属于异倍体肿瘤细胞。

 

1 两组淋巴细胞DNA异倍体检出率、DI、SPF比较

  

组别例数DNA异倍体检出数DISPF(%)观察组6034(56.67)1.34±0.1212.14±3.42对照组200(0.00)1.00±0.028.13±2.23t/χ2值29.3212.5614.897P值<0.001<0.001<0.001

 

2 观察组不同分期NHL淋巴细胞与对照组DI、SPF比较

  

组别例数二倍体非整倍体DISPF(%)对照组2020(100.00)0(0.00)1.01±0.018.15±2.26NHL-Ⅰ期148(57.14)6(42.86)1.04±0.139.43±3.65NHL-Ⅱ期179(52.94)8(47.06)1.12±0.1410.52±3.65NHL-Ⅲ期188(44.44)10(55.56)1.36±0.231)13.42±4.111)NKL-Ⅳ期113(27.27)8(72.73)1.58±0.221)18.72±5.321)

:与对照组比较,1)P<0.05。

(7)假设一天中人们的出去和回来的人数相同,那么在一楼的等待人数为其他楼层等待人数之和,即可假设50%的人从1楼上电梯,50%的人从其他楼层上电梯;

 

3 观察组不同病理分型NHL淋巴细胞与对照组DI、SPF比较

  

组别例数二倍体非整倍体DISPF(%)对照组2020(100.00)0(0.00)1.01±0.018.15±2.26低度恶性组126(50.00)6(50.00)1.24±0.141)12.43±3.541)中高恶性组4821(43.75) 27(56.25)1.65±0.381)2)20.07±5.321)2)

:与对照组比较,1)P<0.05;与低恶性组比较,2)P<0.05。

3 讨论

免疫细胞化学诊断NHL具有一定优势,主要体现在石蜡组织染色后,与形态学相结合,镜下观察有关抗原表达情况,但也存在较大局限性,表现在部分抗体无法采取石蜡进行封埋,解释其染色结果时存在很大程度主观性[2]。FCM为一种可对细胞或亚细胞结构进行分析的新型技术,其原理在于将细胞离心并经处理后,加入已标记抗体,相互结合,经信号转化,并行图像分析,进而对临床诊断提供指导[3]。FCM用于NHL诊断,具有较高广泛性,行表面抗原检测敏感性更高,可获得比较准确结果。NHL诊断时,仅凭形态学表现对单克隆性及分化阶段进行判断存在较大难度,且仅行形态学分析或免疫细胞化学分析,预后判断效果不理想[4]。本文结果显示,观察组DNA异倍体检出率、DI值、SPF均高于对照组;NHL-Ⅲ期或NHL-Ⅳ期的DI、SPE均高于对照组;两种病理分型组DI、SPF均高于对照组;中高恶性组DI、SPF均高于低度恶性组。表明应用FCM,有助于判断NHL病情严重程度,提高诊断质量,为治疗提供指导。机体癌变发生是由致癌因素引起。致癌因素经各种作用机制,导致正常细胞基因组发生变化。异常变化可引起FCM检测DNA相关参数发生变化,具体体现在DI增大或减少,DNA倍体变化和SPF值变化等[5]。恶性肿瘤易出现异倍体变化,NHL检查中,其检出率较高。按SPF值大小不同,可将淋巴瘤严重程度予以分类,为临床治疗提供指导。本文中临床分期越大的NHL患者SPF、DI也明显增大,提示可根据此数值变化诊治病情。

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综上所述,采用FCM检测免疫表型和分析DNA倍体,按DI、SPF大小,可使得肿瘤增殖程度得以反映,并可按患者病情严重程度进行分期,对预后有重要指导意义。

参考文献

[1] 姚奕斌, 彭志刚. 自体造血干细胞移植治疗非霍奇金淋巴瘤的研究进展[J]. 实用肿瘤杂志, 2015, 30(4):355-359.

[2] 刘平毅, 陈玲玲. 脾脏细针穿刺针吸细胞学联合流式细胞术对淋巴瘤诊断价值分析[J]. 中华肿瘤防治杂志, 2015, 22(21):1688-1694.

[3] 智峰, 马燕萍, 包慎,等. 骨髓穿刺及活检联合流式细胞术在检测淋巴瘤骨髓侵犯中的临床研究[J]. 宁夏医学杂志, 2015, 37(11):1002-1004.

[4] 田垚垚, 刘欢, 杨珊珊,等. 淋巴瘤患者血细胞免疫表型分析及其意义[J]. 哈尔滨医科大学学报, 2015, 49(5):419-422.

[5] 钟亮尹, 曾智华. 流式细胞术检测免疫表型和分析DNA倍体对非霍奇金淋巴瘤患者的临床价值[J]. 中国实验血液学杂志, 2016, 24(1):94-97.

 
胡华丽
《河南医学高等专科学校学报》2018年第02期文献

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