上皮－间质转化(EMT)是肿瘤浸润转移的非常关键的环节，其主要意义在于使上皮细胞通过成纤维细胞等转变方式来进行迁移。锌指转录因子Snail是整个过程当中的重要因素，可以有效地对于转录过程进行抑制。Nanog基因是Chambers等2003年在胚胎干细胞内发现的，该基因在肿瘤细胞中表达较多。本实验采用免疫组化方法检测上述两种基因在宫颈癌中的表达模式，从而有效地对于宫颈癌的诊断进行分析，同时对于两者在宫颈癌的发生全过程的关系进行探讨。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取2016年1月—2016年12月，在青岛大学附属医院手术切除的宫颈蜡块标本共100例，均经病理确诊。其中宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变（CIN）和正常宫颈组织分别占比为3∶1∶1。年龄28～54岁，平均年龄为44岁，标准差为5.40岁，中位数为42岁，肿瘤的进展分级是按照国际标准(FIGO 2000)来进行的，CIN 20例，宫颈鳞癌Ⅰ期34例，Ⅱ期24例，Ⅲ期2例，有淋巴结转移14例，无淋巴结转移46例。

1.2 主要试剂 羊抗人Nanog多克隆抗体，购于北京奥森生物技术有限公司；鼠抗人Snail单克隆抗体，购于美国Abcam公司；PBS缓冲液、DAB酶底物显色试剂盒，购于中杉金桥生物有限公司。

1.3 方法 免疫组织化学染色法：蜡块的切片采用免疫组化SP法来进行分析，同时利用PBS作为对照试验样本。Snail的阳性判别依据为细胞质出现棕黄色颗粒，Nanog可以从细胞核出现相同类型颗粒而作为阳性，表达强度的检测方法是把每个切片进行视野的选取，然后计算视野当中出现的阳性细胞，按照取平均值的方法来进行计算。按照这样的方式进行测定，根据阳性细胞所占百分比打分，则其分数范围为0～3分，按照颜色对其进行排序，由无色到棕褐色分别记为0～3分，以上两个数值的乘积大于3分的时候为弱阳性（＋）、6分及以上为阳性（++）、12分为强阳性（+++）。

1.4 统计学处理 应用SPSS20.0软件，所获数据采用方差分析和t检验。

2 结果

2.3 Nanog与Snail表达的相关性 通过分析，在宫颈癌组织当中，Nanog和Snail表达呈正相关关系的(r=-0.49 ；P＜0.01)。

2012年中秋节前，原本由中铁建公司负责施工的肇庆市阅江大桥疏浚项目，又通过政府的行政审批，变相把清理疏浚物变成了开采河砂和河砂销售。而开采和销售河砂需要公开招投标，如此一来，中铁建公司的河砂处理资格被取消了，只是负责航道的清理。

2.2 Nanog、Snail在正常宫颈、CIN及宫颈癌中的表达 见表2。

  

图1

 

1A、1B所示为Nanog在正常宫颈组织的阴性表达和在宫颈鳞癌中的阳性表达，1B中箭头所指为Nanog染色阳性颗粒。Nanog阳性细胞主要为点状分布，偶见灶状聚集，主要集中在细胞核，其在间质与癌区交界部位表达。2A、2B所示为Snail在正常宫颈组织的阴性表达和在宫颈鳞癌中的阳性表达，2B中箭头所指为Snail染色阳性颗粒。Snail蛋白阳性细胞位于细胞核，在宫颈癌细胞中呈强阳性表达。

 

表1 Nanog、Snail在正常宫颈、CIN及宫颈癌中的表达

  

组别 n Nanog表达强度 Snail表达强度- + +++++ - + ++ +++正常宫颈 20 18 2 0 0 17 3 0 0 CIN 20 6 8 6 0 5 9 6 0宫颈癌 60 6 6 22 26 5 6 24 25

2.1 Nanog、Snail表达免疫组化结果 见图1。

3 讨论

EMT是恶性肿瘤细胞进行迁移的重要过程，同时其可以使得肿瘤干细胞发挥出干细胞特性来加强增殖能力，抑制化疗效果[8]。近年来的研究发现大部分上皮源性恶性肿瘤在转移和浸润等过程当中都伴随着类似的问题[9]，很多证明都说明这样的现象主要集中于恶性肿瘤发生的早期。

Snail为锌指蛋白转录因子，其可以有效地促进细胞的周期调整与迁移，同时进行转录抑制。使得上皮细胞的形态得以保留，其表达减少容易导致细胞间的粘附作用下降，使得vimentin可以激活EMT信号，加强肿瘤细胞的转移速率[10,11]。已经发现Snail高表达于多种实体恶性肿瘤，如乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌[12,13]，免疫组化法对宫颈癌组织进行监测，发现其中Snail的阳性率略高，因此，可以看出Snail表达加强可能预示着宫颈癌的出现与转移。

Nanog存在于胚胎干细胞中，可以进行特异性的表达。作为可以维持干细胞增殖和胚胎干细胞多能性的关键基因。细胞质Nanog阳性细胞可以使得宫颈癌进展迅速。其高效表达使得癌细胞加快增殖速度，使细胞周期阻滞，减少细胞凋亡，增强细胞的侵袭和迁移能力[1,2]。Siddique等报道Nanog可以对于Aurora A酶进行诱导从而使得NUMB蛋白磷酸化导致p53蛋白难以形成，使得肿瘤干细胞在这个过程中得以更新，让该蛋白的稳定性下降[3]。该基因对于肿瘤细胞来说可以有效地进行调解，抑制化疗，使得上皮间质完成转化过程，因此，对于这个基因进行表达抑制可以有效地组织肿瘤细胞恶化[4]。目前已在多种实体恶性肿瘤如卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和肝癌中发现Nanog基因的表达上调[5-7]。本研究显示，Nanog在正常宫颈组织与CIN和宫颈癌组织中表达有差异，发现该阳性细胞与宫颈癌的转移等有着密切的关系，可通过研究干细胞的方式来进行分析。

根据美国国家县级政府协会（NAC）、美国规划协会（APA）的研究及实践，可将精明增长总结为“将城市空间扩展融入到区域整体生态体系和人与社会的和谐发展为目标的协调思想；是一种在提高土地利用效率的基础上控制城市蔓延扩展、保护生态环境、服务于经济发展、促进城乡协调发展和人们生活质量提高的发展模式；是一项与城市蔓延针锋相对的城市增长管理政策”。

研究表明，在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中，Nanog的阳性表达率分别为10.0%、70.0%和90%；Snail的阳性表达率分别为15.0%、75.0%和91.7%。随着宫颈癌的恶化，Nanog和Snail的阳性率在不断地进行升高，宫颈癌与正常组织和CIN之间比较，P＜0.05；CIN和宫颈癌之间也具有较大差异，且这两种肿瘤标志物的表达情况和宫颈癌患者的临床分期进展情况、淋巴结转移等无关，但与肿瘤分化情况呈为密切的正相关。

综上所述，Nanog和Snail的表达在正常宫颈与癌变组织中有着较为明显的差异，因此，在宫颈癌的诊断中有着重要的意义。同时，Snail相关因子，未来可能成为宫颈癌基因诊断和治疗的新靶点，这也为宫颈癌的诊断与治疗提供了一个新的方向。

飞播造林具有速度快、工效高、成本低，以及事半功倍的效果。辽西大部分条件较好的地块已基本绿化，剩余宜林地的多为高山远山石质山，人工造林难度大，成本高，可通过飞播造林，加快这些荒山绿化，本研究主要寻求多种技术方法提高飞播造林成活率与保存率。

建立完善的房屋施工安全管理体系，使施工安全管理与施工质量管理相协调，并形成房屋建筑市场安全施工管理的完整系统。要明确工程控制人员的具体安全责任，对工程任务进行分解，使工程的安全目标控制成为体系，并以此为依据来完善工作制度。各个建筑企业应该为员工定期举办安全管理讲座，通过各种实践性的学习强化完其安全管理意识，在安全管理讲座举办完毕之后，建筑企业应该组织施工人员进行安全管理知识讨论，通过实践交流与合作探究，不断的强化员工的安全管理意识。凡是施工现场必须配有安全监理及专职的安全员来负责施工现场的指导工作，保障能够及时发现建设过程中的质量问题及安全隐患。

参考文献

[1] Kawamura N,Nimura K,Nagano H,et al.CRISPR/Cas9-mediated gene knockout of NANOG andNANOGP8 decreases the malignant potential of prostate cancer cells[J].Oncotarget,2015,6(26):22361-22374.

[2] Liu Y,Wang C,Jiang Z.The expression of retrogene Nanogp8 is related to the biologicalcharacteristics of human SGC-7901 gastric cancer cells[J].Xi Bao Yu Fen ZiMian Yi XueZa Zhi,2015,31(6):763-768.

[3] Si d di qu e HR,Fe l dma n DE,Ch en CL,e t a l.NUMBPhosphorylation destabilizes p53 and promotes self-renewalof tumor-initiating cells by NANOG-dependent mechanism inliver cancer[J].Hepatology,2015,62(5):1466-1479.

[4] Santaliz-Ruiz IV,Luis E,Xie X,et al．Emerging role of nanog in tumorigenesis and cancer stem cells［J］．Int J Cancer,2014:1-8

[5]Virant-Klun I,Kenda-SusterN,SmrkoljS.Smallputative NANOG,SOX2,and SSEA-4-positive stem cells resembling very small embryonic-like stem cells in sections of ovarian tissue in patients with ovarian cancer[J].J Ovarian Res,2016,9(1):12.

[6] Kawamura N,Nimura K,Nagano H,et al.CRISPR/Cas9-mediated gene knockout of NANOG and NANOGP8 decreases the malignant potential of prostate cancer cells[J].Oncotarget,2015,6(26):22361-22374.

[7] Allouba MH,El Guindy AM,Krishnamoorthy N,et al.Na Nog:A pluripotency homeobox(master)molecule[J].Glob Cardiol Sci Pract,2015,2015(3):36.

[8] Yin X,Zhang BH,Zheng SS,et al.Coexpression of gene Oct4 and Nanog initiates stem cell characteristics in hepatocellular carcinoma and promotes epithelial-mesenchymal transition through activation of Stat3/Snail signaling[J].J Hematol Oncol,2015,8:23.

[9] Liu CW,Li CH,Peng YJ,et al.Snail regulates Nanog status duringthe epithelial- mesenchymal transition via the Smad1/Akt/GSK3βsignaling pathway in non-small-cell lung cancer［J］.Oncotarget,2014,5(11):3880-94.

[10]陈晓红，黄俊花，赖宜段.上皮-间质转化标志物E-cadherin、vimentin在不同病理分期宫颈癌中的表达及意义[J].齐齐哈尔医学院学报，2016，37（25）：3124-3127.

[11]Peng J,Qi S,Wang P,et al.Meta-analysis of downregulated E-cadherin as a poor prognostic biomarker for cervical cancer[J].Future Oncol,2016,12(5):715-726.

[12]班振英，曾宪旭，张威，等.Snail及p-Akt在宫颈癌癌变过程中的表达及意义[J]. 中国妇幼保健，2014，29（26）：4243-4246.

[13]龚晓萌，陶仪声，周蕾，等.宫颈癌中Snail、Slug和KAI1的表达及临床意义[J].南方医科大学学报，2015，35（12）：1733-1736.