酮洛芬(Ketoprofen，KP)是一种非甾体抗炎药(NSAIDs)，可用于各种关节炎如类风湿关节炎、骨性关节炎、强直性脊柱炎、痛风性关节炎等所引起的关节痛、肿及各种疼痛的治疗。由于以上疾病为多发病、慢性病，因此在治疗中，需要被选用治疗药物的药效持续时间更长[1-2]。由于酮洛芬消除半衰期短，普通制剂每日需服用3～4次，造成血药浓度波动大，不良反应发生率也较高[3]。因此，开展酮洛芬缓释制剂的研发以减少不良反应、提高患者依从性具有十分重要的意义。

单壁碳纳米管(Single-walled carbon nanotubes，SWCNTs)是1991年发现的一种新型的一维碳材料，其具有极大的疏水表面积，能够与多种药物分子以共价或非共价形式结合，使药物吸附于碳纳米管中空结构中，有利于药物的稳定性并能使药物从中空结构中缓慢释放，具有缓释效果，因此在医药领域具有较好的应用前景[4-6]。然而，碳纳米管具有极高的比表面能，不能溶于水和有机溶剂中，使其难以分散，生物相容性差，严重限制了单壁碳纳米管在生物医学领域的应用 [7-8]。壳聚糖作为一种天然高分子多糖，具有可降解性和良好生物相容性，已广泛应用于医药领域，用壳聚糖修饰单壁碳纳米管，有望改善单壁碳纳米管的分散性和生物相容性[9-10]。因此，作者以经壳聚糖修饰的单壁碳纳米管为载体，考察其分散性及缓释性能，并初步探究其释放机制，为缓释制剂的开发提供参考。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

单壁碳纳米管：质量分数>90%，中国科学院成都有机化学有限公司；酮洛芬：批号：20160913056，质量分数>99.0%，药用级，湖北拓楚慷元医药化工有限公司；壳聚糖：脱乙酰度90%～95%，国药集团化学试剂有限公司；乙酸、甲醇、浓硫酸、浓硝酸：分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司；磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾：分析纯，天津市天力化学试剂有限公司。

除服饰特点外，每个民族还有自己悠久的历史、独特的信仰和奇异的人文传说，追述这些历史文化也能让画家们心醉神迷，以广西地区为例，这里有壮族的“歌圩”、苗族的踩花山、仡佬族的走坡，还有别具一格的打油茶等浓郁的民俗节日活动，那么以表现少数民族民俗风情的画作也不胜枚举。

万分之一电子分析天平：ALC-210.4，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；恒温加热磁力搅拌器：DF-101S，巩义市予华仪器有限公司；超声波清洗器：KH7200B，昆山禾创超声仪器有限公司；台式低速离心机：WTL-6K，湖南湘仪仪器开发有限公司；傅里叶变换红外光谱仪：T-27，德国布鲁克公司；紫外可见分光光度计：ZF-7N，上海佳鹏有限公司；差示扫描量热仪：DSC1，梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司。

青稞和油菜9月份收获，蚕豆10月份收获。2016、2017年都能保证冬灌，6月干旱期也能保证浇一次水，整个生育期蚕豆、油菜、青稞长势良好。

1.2 酮洛芬含量测定方法的建立及方法学考察

精密称取10 mg酮洛芬，置于10 mL容量瓶中，加入适量甲醇定容配成1 mg/mL的酮洛芬标准溶液。以甲醇为溶剂，精密量取上述标准液20、40、60、80、100 μL定容至10 mL的容量瓶中，配制成ρ(药物)分别为2、4、6、8和10 μg/mL的系列溶液，在254 nm波长处，测定吸光度(A)，以A为纵坐标，ρ为横坐标，绘制标准曲线。同时，进行精密度、稳定性和加样回收率的考察。

1.3 单壁碳纳米管的羧基化

1.8.2 红外光谱表征

1.4 载酮洛芬单壁碳纳米管的制备

精密称取5 mg的CS-KP-SWCNTs，溶于5 mL的PBS溶液中，将溶液装入提前处理好的截留量为3 000 Da的透析袋中，释放介质为pH=7.4的100 mL的PBS溶液，37 ℃恒温磁力搅拌，分别在0.5、1、2、4、8、12、24、36、48 h时吸取释放液5 mL，同时补入5 mL的pH=7.4的同温度的PBS溶液，在254 nm处测量吸取的释放液中KP的紫外吸光度，计算累积释放度Q，绘制释放曲线，对释放结果分别进行Weibull模型、零级方程、一级方程、Higuchi方程拟合。累积释放度Q的计算公式见式(2)。

1.5 载药量的测定

精密称取5 mg的SWCNTs-KP溶于4 mL的甲醇溶液中，超声将药物充分提取出来，溶液经0.22 μm的微孔滤膜过滤，取少量溶液定容至10 mL的容量瓶中，在254 nm处测定吸光度。载药量计算公式见式(1)。

载药量

(1)

1.6 制备工艺的优化

选择对载药量影响较大的三个因素即m(单壁碳纳米管)：m(酮洛芬)(A)、超声功率(B)、加入磷酸盐缓冲液(PBS)后的超声时间(C)为因素，以载药量为评价指标，进行三因素三水平正交实验[12]。因素水平表见表1。

 

表1 因素水平表

  

水平AB/WC/min11∶1200321∶2280431∶33605

1.7 壳聚糖修饰单壁碳纳米管

量取40 mL 体积分数为1%的乙酸溶液，精密称取40 mg壳聚糖将其溶解至乙酸溶液中，让SWCNTs/SWCNTs-KP充分分散在少量水中后缓慢加入到壳聚糖乙酸溶液中，在室温下搅拌6 h，使载药单壁碳纳米管充分分散并接触和连接上壳聚糖。离心，取上清液，用1%乙酸溶液洗去游离的壳聚糖，加NaOH溶液调节pH至碱性，静置析出沉淀，离心后取沉淀，烘干后即得壳聚糖-单壁碳纳米管(CS-SWCNTs)或壳聚糖-酮洛芬-单壁碳纳米管复合物(CS-KP-SWCNTs)。

1.8 载体的表征

1.8.1 水分散性考察

分别称取2 mg的SWCNTs、SWCNTs-COOH、CS-SWCNTs分散于5 mL蒸馏水中，超声后静置观察其分散性，记录是否有聚沉现象。

精密称取500 mg单壁碳纳米管置于100 mL烧杯中，加入V(浓硫酸)∶V(浓硝酸)=3∶1的混酸，室温下超声5 h，加入去离子水洗涤抽滤，再用去离子水稀释，洗涤至中性，60 ℃烘箱烘干得到羧基化后的单壁碳纳米管，记为SWCNTs-COOH[11]。

分别取适量SWCNTs、SWCNTs-COOH、CS-SWCNTs的干燥粉末，溴化钾压片后置于傅里叶红外光谱仪进行扫描，记录红外图谱。

1.8.3 DSC表征

总之，对马克思主义进行继承和创新基础上的理论重构，既要顺应时代潮流，更也要结合中国实际，在发扬马克思主义和中国优秀传统文化的同时，积极进行理论对话。只有这样，我们才能谱写出新的中国化马克思主义的宏伟乐章。

1.9 体外释药研究

精密称取一定量SWCNTs-COOH于小烧杯中，加入少量的甲醇使SWCNTs-COOH充分分散开，再加入一定量的酮洛芬，将其放入超声仪中超声30 min(功率400 W，频率40 Hz)，逐滴加入少量的磷酸盐缓冲液，酮洛芬析出后，再超声一段时间，使酮洛芬与单壁碳纳米管充分接触产生物理吸附。超声后磁力搅拌5 h，用甲醇洗涤游离的酮洛芬，离心，去上清液，60 ℃烘干沉淀即得载酮洛芬单壁碳纳米管，记为SWCNTs-KP。

 

(2)

式中：ρn为释放各时间点测得释放介质中KP的质量浓度，mg/mL；ρi为释放各时间点取样液中KP的质量浓度，mg/mL；m为投入的CS-KP-SWCNTs的总质量，mg；V为释放介质的总体积，mL；Vi为每次取样的体积，mL；X为测得的CS-KP-SWCNTs的载药量。

2 结果与讨论

2.1 酮洛芬含量测定方法学结果

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0软件进行统计分析。计数资料采用率或百分比表示，两组比较用卡方检验。正态分布的计量资料描述采用两组比较采用t检验；非正态分布的计量资料描述用中位数(M)和四分位数间距(P25-P75)表示，组间比较采用秩和检验。多因素分析采用Logistic回归分析，计算其OR值，P<0.05为差异有统计学意义。

2.2 正交实验结果

正交实验结果见表2，方差分析见表3。

 

表2 正交实验结果

  

实验号AB/WC/min载药量/%11∶1200311．721∶1280410．331∶1360513．541∶2280511．351∶2360314．061∶2200415．071∶3360417．881∶3200516．691∶3280319．5K111．83313．60014．433K213．43313．63313．700K317．96716．00015．100R6．1342．4001．400

 

表3 方差分析

  

因素偏差平方和自由度F值F临界值显著性A66．729225．1365．14∗B11．36224．7035．14C2．94221．2185．14误差2．4206

[3] 刘嘉.酮洛芬24 h缓释片的制备与处方工艺优化[D].成都：西南交通大学，2011.

营养钵育苗技术是一种新型的种苗培育技术，其主要由育苗钵壁以及营养土两个部分组成。在营养钵育苗技术中，种植的营养土是最为核心的组成部分，只有营养土能够提供充足的有机质和营养元素，才可以更好的保证林木种苗培育的顺利进行。另外，营养土中的水分含量也需要进行严格的控制，这样才可以更好的保证种苗的健康生长。

2.3 验证实验

按A3B3C3最优处方工艺制备3批载药复合物，测定其载药量分别为20.16%、21.12%、20.73%，平均载药量为(20.67±0.48)%，可知该处方和制备条件稳定可行，载药量高。

2.4 水分散性考察

水分散性考察结果表明，单壁碳纳米管分散性较差，极易发生聚集后沉淀；酸化氧化后的单壁碳纳米管的分散性较未处理的单壁碳纳米管分散性好，但是放置一段时间后也会发生聚集而沉淀；壳聚糖修饰后的单壁碳纳米管分散性最好，放置12 h较稳定。

2.5 红外光谱表征结果

按照1.8.2方法对SWCNTs、SWCNTs-COOH、CS-SWCNTs进行红外光谱表征，结果见图1。

14）农业部503号公告《高致病性动物病原微生物菌(毒)种或者样本运输包装规范》（2005-05-24施行）。

  

σ/cm-1图1 样品红外光谱图

由图1可知，SWCNTs-COOH在1 631 cm-1处有—C=O明显强烈的峰，并在1 173 cm-1处有—C—O—的伸缩振动峰，说明单壁碳纳米管羧基化成功。壳聚糖在3 427 cm-1处有—N—H伸缩振动峰，在1 082 cm-1处有—C—O—的伸缩振动吸收峰，但是CS-SWCNTs在这两处的吸收峰均减小，说明壳聚糖与单壁碳纳米管发生了化学反应，导致峰形的改变，说明单壁碳纳米管成功接枝壳聚糖。

2.6 DSC表征结果

按照1.8.3方法对KP、CS-KP-SWCNTs进行DSC表征，结果见图2。

分别称取相同量的KP、CS-KP-SWCNTs，依次进行DSC分析，以验证药物的分散状态。分析条件：高纯氮气下，扫描范围25～325 ℃，升温速度10 ℃/min。

  

t/℃图2 样品DSC曲线

由图2可知，酮洛芬在约100 ℃出现熔融峰，而壳聚糖-酮洛芬-单壁碳纳米管DSC曲线里药物的峰消失，说明药物可能被包封于碳纳米管管腔内。

2.7 体外释放结果

按照1.9体外释放度研究方法进行体外释药研究，绘制释放曲线，结果见图3。

  

t/h图3 体外释放曲线

由图3可知，CS-KP-SWCNTs在0.5 h时释放了(24.3±0.65)%，释放较快，这可能是由于部分酮洛芬吸附于载体表面引起。12 h时释放(78±1.67)%，释放开始变缓，接近平台期，表现出明显的缓释行为，24 h时释放(88±1.67)%，到48 h时释放(98.9±1.1)%，释放接近完全。对载药碳纳米管复合物的释放曲线分别进行零级方程、一级方程和Higuchi方程拟合，结果见表4。

通过比较三种释放模型的r值，发现一级释放模型和Higuchi释放模型都能很好地拟合CS-KP-SWCNTs的体外释放行为，而一级释放模型为最佳释药模型，即ln(1-Q)=-0.086 5t-0.407 5，r=0.993 0。推测机理是由于单壁碳纳米管的大π结构和酮洛芬的共轭体系，使得二者能够通过π-π吸附连接在一起[13]。结合红外光谱表征结果，推测酮洛芬可能是吸附到单壁碳纳米管的管壁内，在一定程度上阻碍了药物的释放[14]。药物从单壁碳纳米管的管内释放后，还需经过包裹在单壁碳纳米管外的壳聚糖这一层屏障才能释放出去，这两种释药阻力使壳聚糖-酮洛芬-单壁碳纳米管复合物实现缓释效果[15]。

 

表4 模型拟合结果

  

模型方程相关系数r零级释放模型Q=0．0133t+0．46850．8850一级释放模型ln(1-Q)=-0．0865t-0．40750．9930Higuchi释放模型Q=0．1106t1/2+0．31020．9597

3 结 论

(1) 以单壁碳纳米管为载体，以酮洛芬为模型药，以载药量为指标，考察了载药单壁碳纳米管的处方及工艺，得最优处方工艺为：m(单壁碳纳米管)∶m(酮洛芬)=1∶3，超声功率为360 W，超声时间为5 min，经验证该制备条件稳定可行，载药量高，为(20.67±0.48)%；

(2) 碳纳米管经壳聚糖修饰后分散性显著改善，载药碳纳米管复合物具有明显的缓释特征，并且释放过程符合一级动力学，载药碳纳米管的生物相容性有待进一步研究。

参 考 文 献：

纳入标准[3-4]：①签署知情同意书；②无严重心、肝、肾、脑等重要脏器及系统病变；③经病理学核实的早期声门喉癌；④无颈部淋巴结转移；⑤术前未接受其它治疗；⑥具备开喉手术或低温等离子射频消融术指征。排除标准[5]：①不符合上述任何一条及一条以上纳入标准；②麻醉禁忌症；③合并其它系统或器官严重病变；④精神病史；⑤哺乳期或妊娠期女性。

[1] 陈琰，胡晋红，范国荣，等.酮洛芬的制剂研究[J].药学进展，2001，15(4)：219-223.

[2] 宋明霞.类风湿性关节炎治疗现状[J].中医药临床杂志，2017，29(8)：1200-1204.

由表2、表3可知，各因素对载药量的影响程度依次为A>B>C，且A对载药量有显著性影响(P<0.05)。实验结果表明，载药复合物的最佳处方工艺为A3B3C3，即m(单壁碳纳米管)∶m(酮洛芬)=1∶3，超声功率为360 W，超声时间为5 min。

阿东觉得长久这样，也不是个事。便再次跟父亲商量，要不要干脆告诉阿里，姆妈已经死了，姆妈不会再回家来了，这样索性断了他的念想。

本研究调查对象主要是美国医景网 (Medscape)的注册使用者，2016年的调查样本来自25个专业，超过15 000人；2017年的调查样本来自30个专业，超过14 000人；2018年的调查样本来自29个专业，超过15 000人。因为其调查对象的专业、人数在美国医生中都有较大的覆盖面，所以能在很大程度上代表美国医生的倦怠状况，美国国家心理健康机构和美国国家医学研究院也常参考和采用该网站的调查结果[7]。

按1.2 标准曲线绘制方法，得标准曲线方程为A=0.055 6ρ+0.049 8(r=0.997 3)，表明在质量浓度为2.0～10.0 μg/mL线性关系良好。经精密度、稳定性、重复性考察，计算得RSD值分别为0.58%、0.76%、1.22%，加样回收率在90%～110%，表明精密度、稳定性、重复性、加样回收率均良好。

扬州地处江苏中部，境内河湖广布，水系发达，襟江枕淮，京杭大运河纵穿腹地，由北向南沟通白马湖、宝应湖、高邮湖和邵伯湖，汇入长江。20世纪70年代起随着城市经济建设的加速发展，扬州的河流湖泊受到不同程度的污染，尤其是流经中心城区的20多条河道水体发黑发臭，污染严重。90年代逐步迁移了针织厂、布厂、食品厂、印染厂；关闭了染料化工厂、造纸厂、药用辅料厂，并筹建城市污水处理厂，2000年后黑臭现象基本消除，环境质量有了明显提升。

[4] 于金刚，黄可龙，杨巧勤，等.碳纳米管作为药物载体的研究进展[J].药学学报，2008，43(10)：985-991.

[5] 范玉涵，姚瑛，马全武，等.单壁碳纳米管-异甘草素复合物在大鼠体内缓释性能的研究[J].中国医院药学杂志，2017，37(4)：325-332.

[6] 李育珍，徐伟，张卫珂，等.叶酸功能化碳纳米管负载布洛芬及可控释放[J].功能材料，2015，46(13)：13071-13073.

在“面”层面综合交通系统框架完善的基础上，重点关注铁路“线”性空间释放后沿线带形走廊的交通局部织补，缝合原有割裂的城市功能与交通联系。一方面，结合用地功能布局，优化加密次支路网，加强与跨区干路网的衔接，提升沿铁路线地块轴向与纵向的道路交通可达性；其次，充分利用铁路线性走廊，将慢行空间由轴向铁路沿线向两侧延伸，串联街头公园、滨水绿廊等，丰富地区慢行网络空间；再次，结合公交走廊与枢纽的布局，进一步完善换乘公交场站、P+R停车等设施，加强公交系统与其他城市交通方式的衔接与转换，通过枢纽“锚固”周边地区的交通联系。

[7] 邱家乐，徐豆豆，赵真凤，等.碳纳米管的功能化修饰及应用研究进展[J].材料导报，2015，29(3)：20-24.

[8] 徐卫娟.RGD偶联壳聚糖修饰载药单壁碳纳米管的新型递药系统的研究[D].苏州：苏州大学，2014.

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[14] 于金刚.碳纳米管的化学修饰及对甲磺酸帕珠沙星的缓释研究[D].长沙：中南大学，2008.

2.1.9 样品测定 按“2.1.3”项下的方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10 μL，按“2.1.1”项下的色谱条件测定样品中的姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素、总姜黄素含量，采用外标一点法计算样品中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素的含量。

[15] GE D，LEE H K.Polypropylene membrane coated with carbon nanotubes functionalized with chitosan：application in the microextraction of polychlorinated biphenyls and polybrominated diphenyl ethers from environmental water samples[J].Journal of Chromatography A，2015，1408：56-62.

比较实施评分制后两家医院VBAC成功率（疤痕子宫阴道分娩成功病例数/尝试vbac总数）均提高，我院2014年至2015年两年成功率260/642=40.5%，实施评分表后2016年至2017年两年成功率621/763=81.4%，成功率提高一倍；武宁县人民医院2014至2015年两年成功率15/71=21.1%，实施评分表后2016年至2017年两年成功率48/79=60.8%，成功率提高近3倍。