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蓖麻液泡膜质子泵RcVP1基因克隆与表达分析

更新时间:2009-03-28

土壤盐渍化是全球面临的一个重要生态和环境问题。随着耕地盐渍化面积的不断扩大以及土壤次生盐渍化日趋严重,土壤盐渍化已成为世界农业面临的一个巨大难题。耕地盐渍化严重影响农作物的生长、发育、光合作用以及代谢,造成农作物严重减产甚至死亡。因此,探索植物的耐盐机理,挖掘耐盐基因,培育耐盐新品种是当今的研究热点。盐碱土中过高浓度的Na+ 对于植物细胞膜有直接伤害,并且影响植物对K+、Ca2+ 等矿质元素的吸收,从而导致渗透胁迫、营养胁迫与代谢紊乱。植物通过Na+ 外排和将Na+ 区域化到液泡内的途径来减轻这些胁迫的伤害,这两种途径分别由分布在质膜和液泡膜上的Na+/H+ 逆向转运蛋白来完成[1-2]。液泡膜上的Na+/H+ 逆向转运蛋白在区域化Na+ 时,需要液泡膜质子泵(H+-pyrophosphatase)V-H+-ATPase和 V-H+-PPase形成的H+ 跨膜电化学梯度为其提供驱动力[3-4]。核酸、蛋白质等大分子物质氧化产生PPi,V-H+-PPase利用其中的高能磷酸键,催化胞质中H+ 向液泡运输,形成跨液泡膜的pH梯度、电化学势梯度,从而为跨液泡膜运输提供动力,这种动力在缓解逆境胁迫中起到至关重要的作用[5-6]

ModBus总线是在硬件基础上的一种通信协议,该协议应用广泛,被很多厂家支持。各个不同的厂家可以通过该协议进行相互的数据传输。ModBus协议是通过不同的命令确定需要进行的操作功能。

目前,已从拟南芥(Arabidopsis thaliana)、绿豆(Vigna radiata)、大麦(Hordeum vulgare L.)、水稻(Oryza sativa)、小麦(Triticum aestivum L.)、陆地棉(Gossypium hirsutum L.)、大麻槿(Hibiscus cannabinus)等多种植物中克隆到耐盐基因[7-16]。有研究结果表明,液泡膜H+-PPase基因能够促进植物根系发育,加快生长素的运输,使植物在盐胁迫下吸收更多的水分和养分,从而提高耐盐性[17-19]。包爱科[20]、杨茹[21]、程星[22]分别在紫花苜蓿(Medicago sativa L.)、黑麦草(Lolium perenne L.)和百脉根(Lotus corniculatus L.)中表达拟南芥H+-PPase基因AVP1,均提高了转基因植株的耐盐性。在拟南芥、烟草中超表达其液泡膜H+-PPase基因,也使得转基因植株的耐盐性增强[23-24]。因此,该基因在探索植物耐盐机制和改良作物耐盐性中具有深入研究的价值。

蓖麻(Ricinus communis L.)是大戟科蓖麻属草本植物,双子叶一年生或多年生,为世界十大油料作物之一,蓖麻油可应用于航空、航天、化工等众多领域,是能够代替石油的可再生绿色资源。土壤盐渍化导致蓖麻耕种面积不断缩小,产量逐年降低,提高蓖麻耐盐性成为发展蓖麻种植的研究重点[25]。本研究以蓖麻为材料,设计特异性引物克隆获取蓖麻液泡膜质子泵基因,并进行生物信息学分析与表达分析,为进一步验证该基因的功能和培育耐盐新品种奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

蓖麻种子通蓖5号购于当地市场,选取籽粒饱满、大小均一的种子进行水培,HgCl2消毒15 min,无菌水清洗8~10遍。将8 cm的培养皿铺上2层滤纸,加入8 ml无菌水,种子均匀摆放在培养皿中,放入温度为30 ℃、湿度55%、无光照的人工气候箱中培养。芽长达2 cm左右时移栽到装有营养土∶蛭石=3∶1的基质中,放入昼夜温度30 ℃/25 ℃、湿度55%、光照度2 200 lx、光周期14 h/10 h的人工气候箱中,长出3片真叶后,取新鲜叶片提取总RNA。

1.2 试验试剂

[22] 程 星. AVP1基因转化百脉根及其转基因植株的耐盐抗旱性研究[D]. 兰州:兰州大学, 2009.

植物液泡膜质子泵V-H+-PPase是一种结构简单的转运酶,一般包含大小约为 8.0×104的多肽,大多数多肽含有12~17个跨膜片段[28-30],并且在各种植物体中均存在CS1、CS2、CS3 3个高度保守区域,催化PPi水解等反应[26,31]。本研究从蓖麻中克隆到RcVP1基因,其完整开放阅读框长度为2 304 bp,编码767个氨基酸,含有保守的H+-PPase结构域,蛋白质分子量为8.04×104,包含14个跨膜片段,与毛白杨、绿豆等植物的液泡膜质子泵氨基酸序列的相似性较高,达92.57%,推测RcVP1基因编码蓖麻液泡膜质子泵。

1.3 引物设计

以拟南芥AVP1基因序列为探针,在Phytozome网站中(https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html)对蓖麻基因组序列进行Blast比对,用Primer premier 5.0设计引物,分别在上下游引物加上酶切位点及保护碱基。上游引物加Sma Ⅰ酶切位点,序列F (5′→3′):TCCCCCGGGATGGGTGATGCTATTTTGCCAG;下游引物加Xba Ⅰ 酶切位点,序列R (5′→3′):GCTCTAGATTAGAATATCTTGAAAAGTAGACCTCC。引物由华大基因公司合成。

1.4 蓖麻总RNA提取与cDNA合成

[18] LI B, WEI A, SONG C, et al. Heterologous expression of the TsVP gene improves the drought resistance of maize[J]. Plant Biotechnology Journal, 2008, 6(2):146.

1.5 RcVP1基因的克隆

[15] 李 辉,李德芳,陈安国,等. 红麻液泡膜质子泵H+-PPase(Hcvp1)基因的克隆、序列分析和表达[J]. 华北农学报, 2017, 32(1):9-14.

1.6 RcVP1基因生物信息学分析

在NCBI网站利用ORF Finder (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)找到RcVP1基因的完整开放阅读框,推测氨基酸序列,利用NCBI的Conserved Domains (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/ wrpsb.cgi)对基因的保守区进行预测;利用Prot Param工具 (http://ca.expasy.org/tools/protparam.html)计算RcVP1的稳定指数;利用NPS网站(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=/NPSA/npsa_server.html)预测蛋白质二级结构;利用TMHMM 2.0 (http://www.Cbs.Dut.Dk/serv-Ices/TMHMM.2.0/)进行跨膜区结构分析;利用Cell-PLoc 2.0(http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/)进行蛋白质亚细胞定位预测;利用DNAMAN软件分析RcVP1分子量、等电点,并将其氨基酸序列与其他植物液泡膜H+-PPase进行多重序列比对,绘制进化树。

1.7 RT-PCR分析

以蓖麻RcActin基因(XM_002522148)作为内参基因,上游引物RcActin-F(5′→3′)为TCTTACCTTGAAATACCCCAT,下游引物RcActin-R(5′→3′)为CCTCAGGAGCAACACGAA。分别提取蓖麻的叶片、茎、种子总RNA,分析盐胁迫下RcVP1基因在不同组织中的表达情况。蓖麻种子处理组用 0.1 mol/L NaCl溶液水培,对照组用无菌水水培,每个处理3个重复,当芽突破种皮时,收集种子,液氮速冻,-80 ℃保存。蓖麻幼苗处理组用 0.1 mol/L NaCl溶液浇灌,对照组正常浇水,每个处理3个重复,浇盐水后12 h混合采集叶片、茎,液氮速冻,-80 ℃保存。提取总RNA,反转录合成cDNA,PCR扩增反应体系为:2×Es Taq Master Mix 12.5 μl,cDNA 1.0~2.0 μl,Primer-F 1.0 μl,Primer-R 1.0 μl,dd H2O 8.5~9.5 μl,共25.0 μl。反应条件为:94 ℃ 2 min;94 ℃ 30 s,55 ℃ 45s,72 ℃ 30 s,25个循环;72 ℃ 2 min,4 ℃保温,取5 μl PCR产物进行1.0 %琼脂糖凝胶电泳检测。

2 结果与分析

2.1 蓖麻叶片总RNA提取

蓖麻叶片总RNA电泳检测结果见图1,28 S、18 S、5 S 3条带较为清晰,说明RNA未降解,纯度较高,可作为反转录模板。

已于2018年8月7日重新生效的第1245条要求,总统对“被认定为在明知情况下直接或间接向伊朗销售、供应、转移,或从伊朗转移会被应用于能源领域的石墨、金属原料或半成品金属(例如铝、钢、煤,以及集成工业过程中使用的软件)”的人实施至少5项报复性制裁。

  

M:DL 2 000 maker; 1:总RNA。图1 蓖麻叶片总RNA琼脂糖凝胶电泳图Fig.1 Agarose gel electrophoresis of total RNA of Ricinus communis L. leaf

2.2 蓖麻液泡膜质子泵基因(RcVP1)的克隆

PCR扩增RcVP1基因,得到大小为2 304 bp的产物(图2)。经过胶回收纯化连接pUC-T载体,转化涂板,挑取单菌落进行菌液PCR检测,得到阳性克隆菌(图3)。

  

M: DL 5 000 marker; 1: PCR产物。图2 RcVP1基因的PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图Fig.2 Agarose gel electrophoresis of RcVP1 gene PCR product

  

M: DL 15 000 marker; 1: PCR产物。图3 载体转化大肠杆菌菌液PCR检测Fig.3 PCR detection of Escherichia coli containing the vector

2.3 RcVP1基因的生物信息学分析

2.3.1 RcVP1蛋白结构特性 测序结果显示RcVP1基因大小为2 304 bp,提交GenBank得到登录号为MF611925。利用NCBI中ORF Finder进行分析,结果表明2 304 bp序列为完整的ORF,推测编码767个氨基酸。Conserved Domains保守区预测结果表明RcVP1在74~752氨基酸处含有保守的H+-PPase结构域,属于H+-PPase蛋白家族成员,在253~263氨基酸处,存在序列为DVGADLVGKVE片段(图4),符合Maesshima[5]根据绿豆液泡膜H+-PPase亲水性图谱提出的植物液泡膜H+-PPase拓扑结构中第1个保守片段CS1模型(E/D)(X)7KXE。500~559氨基酸为CS2保守区。在723~728氨基酸处,存在序列为GDTIGD的片段(图4),与CS3拓扑结构模型中的序列一致。DNAMAN分析推测蛋白质分子量为8.04×104,等电点为4.94。编码的氨基酸中53个是碱性氨基酸(+) (R、K、H),59个是酸性氨基酸(-) (D、E),398个是疏水氨基酸(A、F、I、L、M、P、V、W), 257个是极性氨基酸(G、S、T、C、Y、N、Q),59个极性带负电荷氨基酸(D、E),47个极性带正电荷氨基酸(R、K)。Prot Param工具计算结果显示RcVP1的不稳定指数是22.31,表明该蛋白质为稳定蛋白质。TMHMM在线分析结果显示RcVP1含有13个跨膜结构。NPS二级结构预测结果表明RcVP1存在348个α螺旋,62个β转角和189个无规则线圈。亚细胞定位预测结果表明,RcVP1定位于液泡。

2.3.2 多重序列比对和系统进化树分析 将蓖麻RcVP1 (MF611925)与毛白杨PVP3 (KT164754)、百脉根VP1 (EF440187)、大麻槿Hcvp1 (KX687919)、绿豆VrVP (AB009077)、烟草TVP5 (X77915)、拟南芥AVP1 (M81892)、大麦HVP1 (AB032839)的氨基酸序列进行多重比对,结果表明相似性高达92.57% (图4)。根据拟南芥液泡膜H+-PPase AVP1和AVP2可将植物体内的H+-PPase分为Ⅰ型(AVP1类)和Ⅱ型(AVP2类),这2种类型的H+-PPase共存于植物液泡膜上,但氨基酸序列相似性只有36%,其中Ⅰ型存在保守区EYYTS和GNTTAA,而Ⅱ型的EYYTS保守区中,E被其他氨基酸所替换,GNTTAA区则多以GNTTKA的形式出现[26-27]。蓖麻RcVP1与Ⅰ型H+-PPase拟南芥AVP1氨基酸相似性较高,达88.53%,与Ⅱ型H+-PPase AVP2(AF182813)氨基酸相似性较低,只有36.41%,并且存在Ⅰ型H+-PPase保守区EYYTS和GNTTAA(图4),表明蓖麻RcVP1为Ⅰ型H+-PPase。将蓖麻RcVP1氨基酸序列与多种植物的H+-PPase氨基酸序列构建系统进化树(图5),结果表明,蓖麻与毛白杨关系最近。

2.3.3 盐胁迫下RcVP1基因表达分析 用RT-PCR方法对RcVP1基因在盐处理和对照的蓖麻叶片、茎、种子中的表达情况进行检测。结果显示RcVP1在盐处理的叶片和茎中表达量高于对照(图6),在盐处理的种子中表达量低于对照,表明RcVP1基因在盐胁迫下的表达具有组织特异性,在叶片、茎中受盐胁迫诱导上调表达,在种子中盐胁迫抑制其表达。

  

百脉根VP1登录号为EF440187,蓖麻RcVP1登录号为MF611925,大麻槿Hcvp1登录号为KX687919,大麦HVP1登录号为AB032839,绿豆VrVP登录号为AB009077,毛白杨PVP3登录号为KT164754,拟南芥AVP1登录号为M81892,烟草TVP5登录号为X77915。保守区CS1、CS2、CS3 用方框标出,保守构型(E/D)(X)7KXE的氨基酸由星号标出,保守区EYYTS和GNTTAA用下划线标出,保守区GDTIGD用双划线标出。图4 蓖麻RcVP1基因编码的氨基酸序列与其他物种氨基酸序列多重比对Fig.4 Alignment of the deduced amino acid sequences of Ricinus communis L. RcVP1 and other species

  

蒺藜苜蓿VP1登录号为FJ176929,新疆沙冬青AnVP登录号为KT005387,葫芦PHP1登录号为JN940186,番茄LeVP1登录号为AB300442,番茄vp1.1登录号为NM_001278976,红叶藜CVP1登录号为AF533336,野大麦HAVP1登录号为AY255181,小麦TaVP登录号为AY296911,葡萄VPP2登录号为NM_001281226。图5 蓖麻RcVP1蛋白氨基酸序列与其他植物氨基酸序列的系统进化树Fig.5 Phylogenetic tree based on the deduced amino sequences of RcVP1 of Ricinus communis L. and other plants

  

图6 盐胁迫下蓖麻RcVP1基因的半定量RT-PCR分析Fig.6 Semi-quantitative PCR analysis of RcVP1 gene in Ricinus communis L. under salt stress

3 讨 论

我数着从头等车里下来的乘客。为什么不数三等车里下来的呢?这里并没有故意的挑选,头等座在车的前部,下来的乘客刚好在我面前,所以我可以很看得清楚。第一个,穿着红皮雨衣的俄罗斯人,第二个是中年的日本妇人,她急急地下了车,撑开了手里提着的东洋粗柄雨伞,缩着头鼠窜似地绕过车前,转进文监师路去了。我认识她,她是一家果子店的女店主。第三,第四,是像宁波人似的我国商人,他们都穿着绿色的橡皮华式雨衣。第五个下来的乘客,也即是末一个了,是一位姑娘。她手里没有伞,身上也没有穿雨衣,好像是在雨停止了之后上电车的,而不幸在到目的地的时候却下着这样的大雨。我猜想她一定是从很远的地方上车的,至少应当在卡德路以上的几站吧。

[5] MAESHIMA M. Vacuolar H+-pyrophosphatase[J]. Biochimica et Biophysica Acta(BBA)- Biomembranes, 2000, 1465(1/2):37-51.

在盐胁迫下,H+-ppase可能受Na+ 影响而抑制活性,也可能受NaCl诱导,活性或转录水平增加[37-38]。近年来,多位研究者克隆了液泡膜H+-PPase基因并对其进行表达分析。盐处理陆地棉后,其根系中液泡膜H+-PPase(GhVP)的表达量显著升高;大麻槿液泡膜H+-PPase(Hcvpl)的表达量随着NaC1浓度的增加而增加;泌盐植物费尔干猪毛菜(Salsola ferganica)受到高浓度盐分胁迫时H+-PPase基因SfVP的表达量则一直维持在较高水平[13,15,39]。张春蕊等[27,40]从刚毛柽柳(Tamarix hispida)中克隆得到的2种类型的液泡膜H+-PPase基因ThVP1和ThVP3在高盐胁迫下均上调表达。然而Brini等[11]用NaCl处理小麦根和叶后,H+-PPase的转录水平与胁迫前相比并无明显差别。蓖麻RcVP1基因在叶片和茎中,受NaCl诱导,表达量增加,而在种子中,受NaCl胁迫,抑制表达,这与包爱科等[37]提出的H+-PPase基因转录水平变化存在器官差异性的结论一致。本研究成功克隆了蓖麻液泡膜质子泵基因RcVP1,并对其进行生物学分析和表达分析,研究结果为进一步研究该基因的盐胁迫响应机制和培育蓖麻耐盐新种质奠定了基础。

参考文献

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RcVP1的稳定性分析和跨膜结构以及二维结构预测结果表明,蓖麻液泡膜质子泵是稳定的跨膜蛋白质。通过跨膜结构分析和氨基酸序列多重比对发现,蓖麻RcVP1第5个跨膜片段区域序列与毛白杨、百脉根、大麻槿、绿豆、烟草、拟南芥、大麦第5个跨膜片段区域序列高度保守,这与Ru等[32]发现很多植物H+-PPase中第5个跨膜片段(TM5)高度保守的结论一致,这个片段亲水性极高,推测该片段与质子转运相关。保守区CS1位于细胞质侧的亲水环e上,可能直接参与底物、Mg2+ 与酶的结合,是酶的假定底物结合区域,与另一高度保守区EYYTS参与PPi的水解和质子运输的藕联[33-34]。保守区CS2位于细胞质侧的亲水环i上,与CS1共同催化酶反应。保守区CS3中3个谷氨酸残基在酵母中表达时,任何一个残基的替换都会导致酶丧失活性,表明CS3在酶催化反应中起着关键作用[35-36]

因为“1oo2”模型多了由危险失效导致的危险状态,因而当模型第一次发生危险失效时先转换到中间状态。中间状态再次发生失效时才能转换到最终结果状态。“1oo2”电路模型马尔科夫状态转换如图4所示,图4中相关物理量见表2所列。

雅尔塞镇哈拉新村东与嫩江支湾的广阔草原,已确定为每年举办库木勒节活动的固定场所。每年的六月中旬是举办庆祝活动的日子,成千上万的人们聚集到这里,参加一年一度的库木勒节庆祝活动。庆祝主要以文体活动为主。文艺活动主要包括传统的扎恩哒嘞、乌春、哈库麦嘞及现代歌舞和其它形式的文艺表演;体育活动主要包括摔跤、曲棍球、颈力、拉棍、陶力棒、老鹰抓小鸡和围鹿棋等民族传统体育项目。库木勒节庆祝活动开展的有声有色,热烈而隆重,深受全区广大干部群众欢迎。近些年来,省、市有关部门对梅里斯达斡尔族区每年举办的这项活动高度重视,该节日已被列为省级非物质文化遗产保护项目。

[6] 李平华. 盐胁迫下盐地碱蓬液泡膜质子泵表达分析及过量表达SsNHX1-AVP1对拟南芥耐盐性的影响[D]. 济南:山东师范大学, 2003.

依托涠洲岛独特资源所形成的不可替代和不可复制的产品优势,面向中高端市场,打造以休闲度假为核心,集海洋文化、休闲运动、海岛养生、南珠文化、时尚生活、主题娱乐、海岛度假等功能于一体的国内一流、国际知名的休闲度假海岛,使之成为旅游改革发展创新先行区、绿色生态宜居示范区和国际海岛休闲度假胜地(简称“两区一胜地”)。

[7] BRITTEN C J, TURNER J C, REA P A. Identification and purification of substrate- binding subunit of higher plant H+-translocating inorganic pyrophosphatase[J]. Febs Letters, 1989, 256(1):200-206.

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自改革开放以来,特别是近10多年由于经济社会不断发展,环境污染日趋严重,秦淮河逐渐失去了原有的风貌。据环保部门的监测资料,10年前外秦淮河水系污水总排放量约为3 440万t/a,其中生活污水排放量与工业废水排放量之比约为2.3∶1,生活污水是其主要污染源。工业废水以有机污染为主。据南京水利部门2000年7月水环境现状评价报告,秦淮河水质句容河水系为Ⅳ类水,溧水河水系除氨氮超标达Ⅴ类外,其他监测指标为Ⅰ~Ⅲ类。汛期水质优于枯水期水质。

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人的嗓子都具备两种机能:一种是“重机能”,即发真声的,真嗓子机能;另外一种就是“轻机能”,即发假声,假嗓子机能。无论是民族唱法还是美声唱法,都需要真假声的混合,如果偏废其一,那么嗓子就会受到损害。除了对声带使用轻重机能的要求,在发声的方法上,两种唱法也存在着许多的共同之处,主要体现在三个方面:

(4) 分析4日~5日武威、兰州、平安、西宁四站的PM10逐小时浓度变化,受沙尘天气影响,PM10浓度上升和下降阶段,均表现为先武威后兰州,再回流至平安,最后影响西宁的变化规律,具有典型的自西向东后回流输送特征。

[14] 宁丽华,何晓兰,张大勇. 大豆耐盐相关基因GmNcl1功能标记的开发及验证[J].江苏农业学报,2017,33(6):1227-1234.

以反转录得到的cDNA 为模板进行RcVP1基因的PCR扩增,反应体系为:PrimeSTAR© Max DNA Polymerase 12.50 μl,cDNA 1.00 μl,Primer-F 0.75 μl,Primer-R 0.75 μl,dd H2O 10.00 μl。反应条件为:94 ℃ 3 min;94 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 90 s,30个循环;72 ℃ 10 min,4 ℃保温。取5 μl PCR产物进行1.0%琼脂糖凝胶电泳检测,扩增出目的条带后,将剩余PCR产物进行1.0%琼脂糖凝胶电泳,切胶,回收。胶回收产物连接pUC-T载体,转化Top 10感受态细胞,菌液进行PCR验证,选取阳性克隆菌送至北京华大基因公司进行测序。

本研究显示,不同疾病分期的缺血性股骨头坏死患者,其经微创减压植骨生物陶瓷棒植入术治疗12个月后的Harris评分明显高于术前。表明微创减压植骨生物陶瓷棒植入术的应用,可较好改善患者的髋关节功能,为其预后的改善奠定基础。本文研究结果与尚炜,赵刚,舒钧等研究结果相比,一致性较高,表明本文研究具有一定的参考价值。

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按照大连宝生物公司的总RNA提取试剂盒说明书提取通蓖5号蓖麻叶片总RNA,1.0 %琼脂糖凝胶电泳检测。取1 μl RNA反转录为cDNA,反应体系为:Oligo 18 (dT)Primer 1 μl,dNTP 1 μl,RNA 1 μl,RNase Free dH2O 7 μl。离心数秒混匀,在PCR仪上65 ℃反应5 min,置于冰上10 min。向上述10.0 μl反应液中加入5×PrimeScript Buffer 4.0 μl,PrimeScript RTase 1.0 μl,RNase Inhibitor 0.5 μl,RNase Free dH2O 4.5 μl。离心数秒混匀,在PCR仪上25 ℃ 5 min;42 ℃ 60 min;70 ℃ 15 min;冰上冷却,-20 ℃保存。

以人为本是当今时代和社会发展提出的最根本要求,习近平总书记曾反复强调人身是红线、是底线,经济发展、社会发展不能以牺牲人的生命作为基础。近年来,国家陆续修改了《安全生产法》、《刑法》,将安全事故过失纳入刑责;行业内,集团公司也将外包工程纳入主体单位事故考核统计,2015年修订了安全生产奖惩规定,进一步扎紧了人身等不安全事件追责的笼子,安全生产责任和压力越来越大。维护企业安全稳定,确保人身安全;因地制宜采取新举措,推动安全生产基础管理从粗放型向精益化转变,实现差异化特色管理是每个企业管理者无法回避的严峻课题。宿州公司“百条禁令”给我们提供了有益的鉴戒。

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总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、PCR高保真酶、加A试剂盒购自大连宝生物(TaKaRa)公司,胶回收试剂盒、pUC-T TA快速连接试剂盒、2×Es Taq Master Mix购自康维世纪公司,其余试剂均为国产分析纯。

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综上,影响串联补偿装置主要补偿效果的因素有:线路负荷、功率因数、阻抗值和补偿度。阻抗值和导线截面积、导线长度有关,从前面讨论可知,更换大直径导线存在投资大、停电时间长且效果不大的缺点。因此当配电线路导线截面积一定时,只需考虑串联补偿装置的安装位置对补偿效果的影响。

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李惠根,王晓宇,李平,从娇娇,张丽雪,张继星,冀照君,穆莎茉莉
《江苏农业学报》 2018年第02期
《江苏农业学报》2018年第02期文献

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