灵芝 Ganoderma lingzhi Sheng H.Wu,Y.Cao & Y.C.Dai，俗称赤芝，是非常重要的一种药用真菌（戴玉成和杨祝良 2008；戴玉成等 2013；Dai et al.2018），我国记载和利用灵芝至今已有两千多年的历史。近现代关于灵芝的研究始于1907年，法国真菌学家Patouillard（1907）将我国贵州的灵芝标本鉴定为Ganoderma lucidum，并沿用了一个世纪。随着分子系统学的发展，研究证明我国广泛分布并栽培利用的灵芝与原产欧洲的模式种 Ganoderma lucidum (Curtis.) P.Karst.不同，其合法科学名称应为 Ganoderma lingzhi（Cao et al.2012）。过去有关灵芝的药效与功能有过很多报道，灵芝具有非常丰富的药理活性，如调节免疫系统、通过增强宿主免疫调节达到抑肿瘤作用、促进体内生理代谢、通过提高氧化酶活性而清除体内自由基起到抗氧化、抗衰老、镇静、强心、降血糖血脂等作用（Paterson 2006；Santesso & Wieland 2016；Rathore et al.2017）。

广义的遗传多样性指生物携带的遗传信息总和。物种由不同的种群组成，同一种群中不同个体的遗传差异造成了种群内的遗传多样性；而不同种群又由于自然选择、历史地质气候事件或当代人类活动、景观因素等的影响造成遗传信息差异。种群内和种群间的遗传多样性构成了物种遗传多样性总和。物种的遗传多样性是其长期进化的产物，物种遗传多样性越高，遗传变异越丰富，表明对环境的适应能力越强，反之则越弱。正确评估物种的遗传多样性是物种保护的基础，是确定优先保护种、筛选优良种质、恢复种群的关键（蒋志刚和马克平 2009）。利用DNA分子标记研究物种的遗传背景可以反映不同的影响因素，其中核基因组标记在研究较低分类阶元关系时表现出较高的趋异率，信息位点数量适中，能够提供良好的支持（田欣和李德铢 2002）。此外，用于物种鉴定和系统发育研究的DNA标记片段需具有足够长度包含丰富的信息，具有保守性，便于设计通用引物，对大部分物种具有普适性，但不能过于保守，要有适量的变异，保守性的同时还要兼具同塑性和足够的遗传变异信息，从而使物种区分开（Hebert et al.2003，2004）。ITS（internal transcribed spacer）即核糖体 DNA（nrDNA）的内转录间隔区，其变异位点的差异率合适，具有足够的变异，目前已被广泛用于真菌的物种鉴定和遗传多样性研究（胡伟等 2013；Xing et al.2013；唐传红等 2014；汤欢等 2016）。

(3)Glenn Selig was in Kabul on business related to his Florida public relations firm when he became one of at least 22 people killed during a 14-hour attack that began Saturday night and stretched into Sunday,his company reported in a statement.

本研究利用ITS序列作为 DNA分子标记分析了我国不同地区灵芝Ganoderma lingzhi的遗传多样性、群体遗传分化和群体遗传结构等，探讨了地理分布对灵芝群体遗传特性的影响，为我国野生灵芝资源的保护策略提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试样本

本研究共收集了全国范围内的灵芝样本 168份，研究材料保存在北京林业大学微生物所标本馆。为探究不同地理区域样本的遗传多样性、遗传结构差异，遵循层次聚类算法原则进行地理群体划分（表1）。

1.2 基因组 DNA提取、目的基因片段 PCR扩增测序

本研究采用干燥的子实体标本，Aidlab植物基因组DNA快速提取试剂盒提取总基因组DNA。经琼脂糖凝胶电泳检测，并拍照记录后，保存于‐20℃冰箱。本研究所用的序列片段引物均参照White et al.（1990）的方法，通用引物 ITS5（5′‐GGAAGTAAAAG TCGTAACAAGG‐3′）和 ITS4（5′‐TCCTCCGCTTATGA TATGC‐3′）对灵芝ITS区域进行扩增。所用引物由生工生物工程（上海）有限公司合成。PCR反应采用30μL 反应体系：2× Easy Taq® PCR Super Mix 15μL，10μmol/L上下游引物各 1μL，DNA 模板 1μL，ddH2O 12μL。PCR 反应扩增程序为：94℃预变性 3min，94℃变性 40s，54℃退火 45s，72℃延伸 1min，完成35个循环，最后72℃延伸10min，然后4℃保存。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测合格后交由北京六合华大基因科技股份有限公司进行纯化测序，测序引物与扩增引物相同，正反链双向测序。

 

表1 采于中国不同地区的灵芝样本信息 Table 1 Information of Ganoderma lingzhi samples from different areas in China

  

North China 华北地区：天津、山东 North China: Tianjin,Shandong Central China 华中地区：河南、湖南、安徽、江西 Central China: Henan,Hunan,Anhui,Jiangxi East China 华东地区：浙江、福建、江苏 East China: Zhejiang,Fujian,Jiangsu South China 华南地区：广东、广西、云南热带地区 South China: Guangdong,Guangxi,tropical areas of Yunnan Central Yunnan 滇中地区：楚雄、昆明、玉溪 Central Yunnan: Chuxiong,Kunming,Yuxi Gaoligong Mountains 横断山区：高黎贡山地区 Hengduan Mountains: Gaoligong Mountains North Sichuan 四川北部地区：广元、巴中、达州 North Sichuan: Guangyuan,Bazhong,Dazhou South Sichuan 四川南部地区：攀枝花 South Sichuan: Panzhihua 个体数 Sample size 23 28 11 7 43 12 11 33 Total 中国China 168

1.3 序列处理

使用Lasergene7.0软件包中Seqman程序检查序列质量并生成一致序列，手动检查峰图，所得一致序列用Mafft进行比对，人工校正后在NCBI上BLAST比对确定序列，获得的序列提交到GenBank数据库中（GenBank登录号：MG732940−MG732974，MG865278−MG865281）。

1.4 ITS序列变异情况

使用MEGA5.1编辑序列比对结果，计算出核苷酸组成/保守位点（conserved sites）、变异位点（variable sites）、简约信息位点（parismony‐ information sites）、转换（transitions）/颠换（transversions）位点数比。

1.5 单倍型统计及单倍型网络关系图

使用 DnaSP5软件统计单倍型，TCS2.1基于95%简约标准（parsimony criterion）构建基于总群体的单倍型网络图（Clement et al.2000），分析各单倍型之间的谱系与演化关系。MEGA5.1软件基于 K2P（Kimura 2‐parameter model）模型，用最大似然法（maximum likelihood，ML）和邻接法（neighbor‐joining，NJ）构建单倍型系统发育树，分枝置信度通过1 000次重复自展程序检验，InDel处理为 Complete deletion。Adobe Illustrator CC 2017和Photoshop CS6优化图像。

1.6 中性检验

使用 Arlequin3.5软件进行 Tajima’s D中性检验（Excoffier & Lischer 2010），DnaSP5 软件生成错配（mismatch distribution）分析图，测量各地理群体的遗传分化程度。

1.7 AMOVA分子变异分析与遗传变异分析

使用Arlequin3.5软件进行AMOVA分子变异分析，计算群体遗传差异指数 Fst，测量各地理群体的遗传变异（Excoffier et al.1992；Pons & Petit 1996）。DnaSP5软件计算群体的核苷酸平均差异数Kxy、核苷酸歧义度Dxy、基于灵芝总群体的遗传分化系数Gst、基因流Nm等遗传学系数（Nei 1973），对各地理群体进行遗传多样性评估（Librado & Rozas 2009）。

2 结果与分析

2.1 ITS序列变异情况

本研究获得168个灵芝样本的ITS序列，经处理去掉两端侧翼序列后长度为 588bp，多态位点42个，包括简约信息位点数16个，单一变异位点26个，突变位点在序列中均匀分布，未发现插入/缺失碱基（Weber et al.2002）。4 种碱基组成分别为：A=22.1%，T=29.5%，G=24.2%，C=24.2%，A+T含量（0.516）略高于G+C含量（0.484）。转换/颠换 R值为 7.81，绝大部分核苷酸替换为转换，验证了亲缘关系近的分类阶元之间的替换主要以转换为主、而亲缘关系较远核苷酸之间的替换以颠换为主的规律（Simon et al.1994；Frati et al.1997）。

2.2 单倍型系统演化及群体遗传多样性分析

根据ITS分子标记数据，对灵芝不同地理群体的遗传多样性进行了分析（表2）。从按采集地生境划分为8个地理群体的168个灵芝样品个体中，共检测到39个单倍型。物种水平上单倍型多样性（Hd）为 0.867±0.018，核苷酸多样性（Pi）为0.00304±0.00024。单倍型多样性高、核苷酸多样性较低，表明灵芝群体在不同环境下有相应的生存适应对策，生存能力较强。各群体间差异不大（Hd= 0.727−0.952， Pi=0.00176−0.00256）， 华 南 地 区（South China）群体单倍型多样性最高，云南高黎贡山地区（Gaoligong Mountains）群体最低。

Frati F,Simon C,Sullivan J,Swofford DL,1997.Evolution of the mitochondrial cytochrome oxidase II gene in Collembola.Journal of Molecular Evolution,44(2): 145‐158

ML法（图2）和NJ法（图3）分别构建单倍型系统发育树，二者树形和数值相似，各单倍型也并未按地理分布在系统发育树上聚集到一起，支持率较低，说明单倍型之间差异较小，不能形成可靠分支。各地理群体是由多个单倍型组成（图4），说明各地理群体间存在基因交流，遗传分化较小。

河南省水利系统网络建设起步较早，信息积累较多，这些都为网站的建立打下良好的基础。近几年，河南省水利各级政府部门纷纷在互联网上推出自己的网站，18个地市水利（务）局中14个有自己独立的网站，2个地市网站在地市政府网站群中，厅属单位中也有部分单位建立自己的网站，但基本上都是各自独立、封闭的系统，网站间不能进行有效的信息共享。

  

图1 灵芝基于 ITS序列的单倍型进化网络关系图 不同颜色代表单倍型所在的地理群体，大小代表各单倍型出现频率，黑色节点代表突变过程中未发现或缺失的单倍型 Fig.1 Haplotype network of ITS sequences for Ganoderma lingzhi.The different colors represent the geographical groups of the haplotype.The size represents the frequency of each haplotype.The black node represents the undetected or missing haplotype in the process of mutation.

 

表2 灵芝不同地理群体的遗传多样性指数 Table 2 Genetic diversity indexes of different geographic populations of Ganoderma lingzhi

  

群体编号 Geographical population 多态位点 Polymorphic sites 单倍型数 Number of haplotypes 单倍型多样性 Haplotype diversity (Hd) 核苷酸多样性 Nucleotide diversity (Pi) 核苷酸平均差异数 Average number of nucleotide difference (k) North China 16 11 0.877±0.049 0.00370±0.00104 2.166 Central China 13 13 0.854±0.055 0.00311±0.00569 1.828 East China 5 7 0.818±0.119 0.00266±0.00291 1.564 South China 10 6 0.952±0.096 0.00536±0.00147 3.143 Central Yunnan 17 16 0.837±0.044 0.00291±0.00038 1.710 Gaoligong Mountains 4 5 0.727±0.113 0.00176±0.00041 1.030 North Sichuan 5 6 0.836±0.089 0.00198±0.00291 1.164 South Sichuan 9 10 0.864±0.029 0.00256±0.00025 1.500 Total 42 39 0.867±0.018 0.00304±0.00024 1.780

  

图2 基于最大似然法的39个灵芝单倍型系统发育树 Fig.2 ML phylogenetic tree of 39 haplotypes of Ganoderma lingzhi.

  

图3 基于邻接法的39个灵芝单倍型系统发育树 Fig.3 Neighbor‐joining phylogenetic tree of 39 haplotypes of Ganoderma lingzhi.

  

图4 灵芝8个群体的地理与单倍型频率分布情况 Fig.4 Geographical distribution and haplotype frequency of eight populations of Ganoderma lingzhi.

2.3 种群动态历史分析

Ohta T,Kimura M,1975.The effect of selected linked locus on heterozygosity of neutral alleles (the hitch‐hiking effect).Genetical Research,25(3): 313‐325

将168个灵芝样品作为整体进行分析，P＞0.1不显著，表明所有灵芝样品作为一个整体，其进化过程为中性进化，群体大小保持相对稳定，进化符合中性假说（Neutral theory of molecular evolution）（Kimura 1968）。

所有灵芝样品的错配分布曲线呈现单峰泊松分布（图5），表明168个灵芝样品作为一个整体发生过一次群体扩张，推测部分地理群体发生过扩张，各群体进化程度不一致，但群体大小保持相对稳定。

导游词是在导游讲解过程中使用的一种应用性文体，它有别于演讲稿和朗诵稿，为了保持文体一致，在创作中要善于使用导游语言，应设置导游词必要的称呼和问候。

2.4 灵芝的群体遗传结构与遗传变异分析

本研究中，灵芝168个样品的AMOVA分子变异分析结果显示（表4）：来自不同地理群体之间的变异占4.33%，群体内部的变异占95.67%。不同地理群体间的变异方差组分为0.03959，群体内的方差组分为0.87451，表明遗传分化主要来自于样品间的个体差异，不同地理群体间的差异较小。

 

表3 灵芝不同地理群体Tajima’s D中性检验 Table 3 Tajima’s D neutrality test of different geographic populations of Ganoderma lingzhi

  

注：NS，无显著性，P＞0.1；* 0.01＜P＜0.05；** 0.001＜P＜0.01 Note: NS,not significant,P＞0.1; * 0.01＜P＜0.05; ** 0.001＜P＜0.01.

 

群体编号 Geographic population Tajima’s D 显著性 Statistical significance (P)North China ‐1.79889 0.02100,* Central China ‐1.51738 0.04400,* East China ‐0.32197 0.41400,NS South China ‐1.23413 0.12100,NS Central Yunnan ‐1.80850 0.01000,* Gaoligong Mountains ‐0.78132 0.25700,NS North Sichuan ‐1.21975 0.11400,NS South Sichuan ‐0.98451 0.18100,NS Total ‐1.20831 0.14525， NS

不同地理群体间的 Fst值范围为0.00207−0.20741 ， 云 南 高 黎 贡 山 （ Gaoligong Mountains）和四川北部群体（North Sichuan）分化最小，Fst值为 0.00207；华东地区群体（East China）和云南高黎贡山（Gaoligong Mountains）群体分化最大，Fst值为0.20741（表5）。不同地理群体间核苷酸差异数 Kxy变化范围为1.21212−2.68831，核苷酸歧义度 Dxy范围为0.00207−0.00468，华南地区（South China）与其他群体差异较大，说明该群体相对其他群体变异较大，遗传距离较远（表6）。

Tajima F,1989.Statistical method for testing the neutral mutation hypothesis by DNA polymorphism.Genetics,123(3): 585‐595

  

图5 灵芝168个样品的错配分布分析图 Exp：期望值；Obs：观测值 Fig.5 Mismatch‐distribution analysis curve of 168 samples of Ganoderma lingzhi.Exp: Expected values; Obs: Observed values.

 

表4 不同地理群体间的分子变异分析 Table 4 Analysis of molecular variation of different geographic populations of Ganoderma lingzhi

  

变异来源 Source of variation 自由度 Degree of freedom 平方和 Sum of square变异组成 Variance component 变异所占比例 Percentage of variation (%) 群体间 Among populations 7 11.668 0.03959 Va 4.33 群体内 Within populations 160 139.921 0.87451 Vb 95.67 总变异 Total variances 167 151.589 0.91410 —

 

表5 不同地理群体间的Fst值 Table 5 Population pairwise Fst of different geographic populations of Ganoderma lingzhi

  

Note: 1: North China; 2: Central China; 3: East China; 4: South China; 5: Central Yunnan; 6: Gaoligong Mountains; 7: North Sichuan; 8: South Sichuan.

 

群体编号 Geographic population 2 1 3 4 5 6 7 1 0.00381 — — — — — — 3 0.11919 0.04879 — — — — — 4 0.04668 0.03092 0.12464 — — — — 5 0.06464 0.03005 0.10396 ‐0.02145 — — — 6 0.13633 0.09241 0.20741 ‐0.04329 ‐0.00421 — — 7 0.03007 ‐0.00766 0.05172 0.03041 0.00251 0.00207 — 8 0.07432 0.02162 0.07633 0.00878 0.00276 0.00226 0.00221

 

表6 不同地理群体间的核苷酸平均差异数（Kxy，上三角）和核苷酸歧义度（Dxy，下三角） Table 6 Pairwise average number of nucleotide differences (Kxy) (above the diagonal) and nucleotide divergence (Dxy) (below the diagonal) among different geographic populations of Ganoderma lingzhi

  

Note: 1: North China; 2: Central China; 3: East China; 4: South China; 5: Central Yunnan; 6: Gaoligong Mountains; 7: North Sichuan; 8: South Sichuan.

 

群体编号 Geographic population 1 2 3 4 5 6 7 8 1 — 2.00466 1.96047 2.73913 1.99798 1.76087 1.65217 1.87352 2 0.00343 — 1.92533 2.60714 1.89120 1.65476 1.54221 1.79762 3 0.00335 0.00329 — 2.68831 1.82664 1.63636 1.43802 1.65840 4 0.00468 0.00446 0.00460 — 2.37542 2.00000 2.22078 2.34199 5 0.00342 0.00323 0.00312 0.00406 — 1.36434 1.46723 1.61663 6 0.00301 0.00283 0.00280 0.00342 0.00233 — 1.21212 1.32323 7 0.00282 0.00264 0.00246 0.00380 0.00251 0.00207 — 1.29477 8 0.00320 0.00307 0.00283 0.00400 0.00276 0.00226 0.00221 —

3 讨论

本研究基于全国不同地区野生灵芝的ITS序列信息，研究了不同地理群体灵芝的遗传变异和种群扩张，建立了灵芝的单倍型进化网络关系图和系统发育树，解析了我国野生灵芝群体的遗传多样性、遗传分化和种群动态。

计算机主要由硬件和软件两大部分组成。计算机的硬件设备构成了计算机的外壳(包括输入输出设备、存储设备、运算设备和控制设备)，软件(包括系统软件、通用软件和应用软件)则是支持计算机运行的内部构件，计算机语言编程的正是这些软件。计算机的具体组成可以参照图1。

Grant W,Bowen BW,1998.Shallow population histories in deep evolutionary lineages of marine fishes: insights from sardines and anchovies and lessons for conservation.Journal of Heredity,89(5): 415‐426

Maya Angelou is a versatile and extraordinary black woman,always concerning about those people who have the same situation and encounters with her.Her works have encouraged many black girlsfromgeneration togeneration.

中性检验是利用统计学模型、基于种内多态性的一种验证中性假说的方法（Ohta & Kimura 1975），可以反映出较长时间尺度的种群变化历史，中性进化模型理论上Tajima′s D值为0。本研究168个灵芝样品整体的中性检验结果显示群体进化遵循中性进化模型，群体大小保持相对平衡多态稳定（Tajima 1989，1996）。168个灵芝样品整体的错配分析图表明灵芝种群经历过扩张。另外，本研究的单倍型多样性指数和中性检验结果符合Grant & Bowen（1998）估算种群动态的理论：如果种群单倍型多样性高而核苷酸多样性低，则意味着种群经历过扩张。

受到外界和他人的影响，农村留守儿童容易产生行为偏差，沉溺于游戏厅和网吧等娱乐场所，法律意识淡薄，出现违法违纪现象。农村留守儿童问题具有长期性和特殊性的特点，关心不同性别、不同年龄段留守儿童的需求，有利于促进留守儿童的身心健康发展。

群体的遗传结构是遗传变异在群体中的非随机分布，是由物种的长期进化历史、遗传漂变、突变、基因流等各种因素共同形成的（Kelley et al.2000）。AMOVA分析表明遗传分化主要来源于个体间的差异，不同地理群体间差异很小，仅占4.33%。同一物种不同群体间的遗传分化程度可以用遗传分化指数 Fst来判别，衡量群体间的遗传距离（Rousset 1997）。Fst＜0.05，则认为群体间几乎没有遗传分化；如果 ，则表示群体间分化程度较低；Fst在0.15−0.25之间为中度分化；大于 0.25表明群体间遗传分化程度较高（Weir & Cockerham 1984）。本研究的遗传分化指数结果显示，群体间存在着较低程度的遗传分化。基因流（gene flow）是基因在不同群体中的移动交流（Husband & Barrett 1995），表示不同地理群体间的个体迁移，即群体每代迁移数。基因交流在群体中越频繁，群体之间差异就越小，不同群体相似度就越高，进而影响群体内部与群体之间的遗传分化（Slatkin 1987）。Nm＜1 时认为群体之间基因交流水平低，群体的遗传分化是因为低水平的基因流限制；当Nm＞1时，可能是某一历史时刻发生基因流，也可能是选择压力带来的遗传分化，不能反映实际情况；当 Nm＞＞1时，认为群体间可能地理距离很近，或有一定的方式发生基因交换（Whitlock & McCauley 1999）。本研究的基因流结果表明，168个灵芝样本整体上基因交流非常频繁，群体间相似性大。基因流的作用抵消了遗传漂变和自然选择的作用，不同生境下的灵芝地理群体间存在着较低程度的遗传分化，有基因型和表型的差异，但频繁的基因交流带来的均质化作用更降低了群体的遗传分化，造成群体遗传多样性较低。

综上认为，我国灵芝遗传多样性较低，各地理群体间遗传分化程度低，绝大部分分化来自于个体的差异，推测原因可能是灵芝种群扩张历史较短，没有积累过多的遗传变异。群体遗传分化大小主要是环境作用主导，物种遗传多样性是物种生境、生活史、突变等多方面因素共同作用的结果。物种的分布对物种遗传多样性的影响远大于物种生活型和繁育系统的影响，分布范围越广，表明物种适应性越强，遗传多样性越高；反之分布范围越小，遗传多样性越低（金燕和卢宝荣 2003）。我国不同灵芝群体间基因交流较为频繁，群体间分化较小，可能是造成灵芝遗传多样性偏低的原因。另外，云南和四川群体所收集到的个体数多于其他群体，单倍型多样度也较丰富，整体上进化程度较高，遗传多样性相对丰富。

灵芝作为我国重要的药用真菌，具有显著的经济价值，正确评估灵芝的遗传多样性，了解种群历史和遗传分化，对保护物种和种质筛选至关重要，也是人工栽培药用灵芝的基础。本研究首次采用ITS标记评估了我国野生灵芝的遗传多样性和种群的遗传分化情况，获得了多态性位点和关键的遗传学数据信息。下一步研究中，还需要增加不同地理群体样本数量，配合其他类型分子标记，如表达序列标签微卫星（EST‐SSR）标记或单核苷酸多态性（SNP）标记等，精确评估物种遗传多样性，分析预测灵芝种群的发展动态，为保护我国野生灵芝资源奠定理论基础。

[REFERENCES]

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Dai YC,Cao Y,Zhou LW,Wu SH,2013.Notes on the nomenclature of the most widely cultivated Ganoderma species in China.Mycosystema,32(6): 947‐952 (in Chinese)

杨秉奎:“小曲,你来得正好!这上海的女学生,我劝张连长收到他的连,张大连长不给我面子。你看怎么办吧。”

Dai YC,Zhou LW,Hattori T,Cao Y,Stalpers JA,Ryvarden L,Buchanan P,Oberwinkler F,Hallenberg N,Liu PG,Wu SH,2018.Ganoderma lingzhi (Polyporales,Basidiomycota),the scientific binomial for the widely cultivated medicinal fungus Lingzhi.Mycolopical Progress,16: 1051‐1055

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Excoffier L,Smouse PE,Quattro JM,1992.Analysis of molecular variance inferred from metric distances among DNA haplotypes: application to human mitochondrial DNA restriction data.Genetics,131(2): 479

单倍型网络图显示了各地理种群单倍型分布和演化关系情况（图1）。单倍型H1出现频率最高，是所有地理群体的共享单倍型，分布在 8个地理群体51个样本中，占总量的30.3%，并且H1处于演化网络图的中心，其他单倍型由H1经过突变演化而成，推测H1为原始单倍型；其次是单倍型H23，在6个地理群体23个样本中出现，占样本总量的13.6%；其他出现频率较高的单倍型为 H2（8.3%）、H12（10.1%）、H15（8.3%）；有29个是单独地理种群特有的独享单倍型。各单倍型以H1为中心呈放射状分布，以H2、H12、H14、H23等单倍型为节点杂乱的分布在不同地理群体中，单倍型分布没有与所在地理群体呈明显的对应关系，没有形成明显的谱系结构。

在创建调整区域之后，我们还可以使用画笔工具对调整范围做更精细的手动修改。首先使用快捷键Y打开蒙版叠加显示，以便于观察当前工具的影响范围，接着选择画笔工具，然后在画面中涂抹修改径向滤镜的调整范围。绘制时，可以使用快捷键]与[修改画笔的大小。

实验结果表明我国野生灵芝群体整体上表现出较低的遗传多样性。不同地区的8个灵芝地理群体单倍型多样性较高，核苷酸多样性较低，是遗传多样性较低的表现。各地理群体内单倍型多样性较丰富，表明灵芝在不同地理群体中的生存适应能力强。单倍型H1出现频率最高（30.3%），而且是共享单倍型，处于单倍型进化关系的中心，认为是灵芝群体的祖先单倍型，是在种群中稳定存在、适应环境能力强的优势单倍型。各地理群体的遗传多样性指数变化不大，云南高黎贡山（Gaoligong Mountains）群体单倍型多样性和核苷酸多样性明显低于其他群体，群体遗传多样性较低；华南地区（South China）群体明显高于其他群体，遗传多样性最高。结合单倍型系统发育树和单倍型网络关系图分析，各进化分支之间的分歧度很低，没有形成明显的聚类分支，单倍型分布与地理群体分布之间没有发现明显的对应结构关系。

降香黄檀(Dalbergia odorifera T. Chen)属于蝶形花科黄檀属，为国家二级保护植物，其心材具有极高的经济价值，是红木家具的珍贵用材，从心材中提取的降香油也是一种定香剂，具有重要的药用价值。同时，降香黄檀也适用于城市绿化和山地造林[1, 2]。

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最后，教师追问，什么类型的数列也能用错位相减法求和？学生很快就能答出，“等差×等比”型数列.继续追问，为什么呢？让学生思考错位相减法的内涵：和式乘以公比并向右错一位后，除首、尾两项外，各项公比的指数对应相等，相减后提取指数式，系数为等差数列的后一项减前一项，即公差，能够化简求和.然后，教师再举一个简单的例子，让学生操作体验一下这个基本方法.

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本次调查发现，480例现患哮喘儿童哮喘发作时85．21%患儿使用过抗生素，提示较多的临床医生把支气管哮喘误认为是细菌、病毒感染所引起的炎症，但吸入皮质激素治疗者占55．42%，发作缓解后继续吸入激素者50．5%，提示宝鸡市在推广全球哮喘防治创议指南（GINA）工作较2000年有明显进步。

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中文版MMAS-8测量类风湿关节炎患者用药依从性的信效度分析 ………………………………………… 吴 凡等（2）：263

本研究对灵芝进行中性检验的结果显示（表3），灵芝168个样品整体及各个地理群体的Tajima’s D统计值均为负数，表明存在大量的低频等位基因位点，可能是由于负向作用或群体扩张存在瓶颈效应。华北地区（North China）、云南滇中地区（Central Yunnan）和华中地区（Central China）群体中性检验 P＜0.05显著，说明群体进化受到选择压力；其他地理群体P＞0.1不显著，表明序列进化遵循中性进化模型。

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168个灵芝样品总体水平上遗传差异指数 Fst为0.04331，基因流Nm为2.99，表明168个灵芝样品整体上基因交流频繁，遗传分化程度较低。

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对企业社会责任满意程度的主观评价，是指员工可以直接评价他们对企业社会责任的满意程度，包括企业的发展目标、企业社会责任行为及其在公众心目中的形象、声誉及员工期望等。民营企业所处环境对企业社会责任的期望越高，员工对民营企业的社会责任行为的反应就越大，那么对民营企业就有利。这个评价与客观因素不同，并不依赖于对具体衡量指标的评价，而是源于员工的心理感受。因此，本文提出指标：V1（员工的主观评价）。

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