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车前草干、鲜品提取物有效成分含量的对比研究*

更新时间:2009-03-28

车前草为车前科植物车前 (Plantago asiatica L)或平车前(Plantago degresa Willd)干燥全草,车前草主要含有熊果酸、齐墩果酸、桃叶珊瑚苷、黄酮类化学成分,具有祛痰、止咳、利尿等作用,临床上常用于治疗水肿,淋病,肺热咳嗽[1],清下焦湿热[2]等症。在我国古今医学典著中均有药物鲜品治疗疾病的记载,如三鲜汤、四生丸等[3],车前草亦常以鲜品应用于中医临床,随着保鲜技术的发展,使得对中药鲜品的研究呈上升趋势,而中药鲜品和干品其有效成分和药理作用往往会有所不同[4],因此对于车前草鲜品有必要进行更深入的研究。熊果酸作为车前草的一个主要成分,具有护肝、抗肿瘤,可明显改善肝纤维化大鼠的肝功能[5];总黄酮作为已被认可的具有生物活性的物质。本文通过以车前草中主要成分熊果酸和总黄酮为指标,探讨车前草鲜品干品的成分差别,为进一步拓展车前草鲜品的利用,提高车前草制剂的质量提供参考。

数控机床之所以会出现问题,是因为元动作单元本身或关联元动作单元之间的连接发生了故障,对数控机床的功能或性能产生了影响,这些故障的表现形式称为故障模式。考虑到元动作单元自身的特点,可将元动作单元故障模式分为动作型和连接型两大类,如图3所示。图中所提到的“动作”指的就是“元动作”,它造成部件的运动故障,最终导致机床的性能受到影响甚至某些功能无法正确完成。图中的“连接”有2类:一类指的是元动作单元本身的结构连接、运动连接;另一类是指关联元动作单元之间的连接,包括管道连接和线缆连接。结合企业历史数据和文献[15]的相关内容,笔者归纳总结了元动作单元故障模式,具体如表1所示。

1 材料与方法

1.1 仪器和试药 DIONEX UltiMate 3000型高效液相色谱仪 (美国赛默飞科技公司):DAD二极管阵列检测器;UV5800紫外分光光度计 (上海元析仪器有限公);KQ-500E型超声波清洗器 (昆山市超声仪器公司);RE-52AA型旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂);芦丁对照品(批号:20161111,纯度98.0%,北京坛墨质检科技有限公司);熊果酸对照品(批号:20160705,纯度98.1%,北京坛墨质检科技有限公司);乙腈(色谱纯,美国Fishier试剂公司);其他试剂均为分析纯,液相用水为纯化水。车前草药材采集于赣州,鲜品到干品的质量比为5.02。

1.2 提取物的制备[6,7]

一方面,尽管东昌区政府高度重视并采取一系列卓有成效的措施支持葫芦文化产业的发展,却没有深刻认识到葫芦文化在乡村旅游中的发展地位,没有充分抓住山东省全面开发乡村旅游的良好机遇,利用本地丰富的葫芦文化旅游资源,大力发展极具地域特色的乡村旅游。另一方面,社区居民对种植、加工葫芦的收入较为满意,且因文化层次较低,缺少乡村旅游开发经验,从而对开发葫芦文化旅游缺乏足够的信心和热情。

1.4.3 供试品溶液的测定 精密量取供试品溶液2ml,置10ml量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml摇匀,静置6min;再加10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀,静置6min,再加入4%氢氧化钠溶液4ml,用60%乙醇稀释定容刻度,摇匀,静置12min,以60%乙醇溶液作空白,于510nm处测吸光度,计算浸膏中总黄酮的含量。

(4) 新增换乘厅可减缓换乘客流对于既有标准站的冲击,同时减弱换乘长通道给乘客在行进过程中带来的不适感,从而营造两站舒适便捷的换乘空间。同时应统筹考虑新增换乘客流对原进、出站客流的影响,以及综合换乘便捷性、改造难度、施工工期等因素来确定最优改造方案。

1.2.2 干品提取物的制备 称取洗净晾干水分的新鲜车前草2kg,置于60℃烘箱中至干燥,粉碎药材,取药材粉末,提取方法同1.2.1。

1.3 熊果酸含量的测定与结果

1.3.7 稳定性试验 取车前草鲜药提取物,制备供试品溶液,分别在 0、2、4、6、8、24h 时精密量取20μl注入液相色谱仪,计算峰面积的RSD=1.6%,表明该样品溶液在24h内稳定性良好。

1.3.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的车前草鲜药提取物约0.1g,共6份,按1:1加入熊果酸对照品,按“1.3.3”项下方法制备供试品溶液并测定,计算回收率。熊果酸的平均加样回收率为99.09%,RSD为1.0%。结果表明,熊果酸回收率符合要求,测定方法可行。结果见表1。

  

图1 车前草鲜品提取物(A)、车前草干品提取物(B)和熊果酸对照品(C)溶液的HPLC色谱图

1.3.2 对照品溶液的制备 精密称取熊果酸对照品溶液10.89mg,至10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀;精密量取1ml,至10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,得每1ml含108.9μg的熊果酸对照品溶液。

1.3.3 供试品溶液的制备 精密称取车前草鲜药和干药提取物浸膏粉末各0.2g,置50ml量瓶中,加80%甲醇超声使溶解,用80%甲醇稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液即得。

1.3.4 线性关系考察 分别精密量取对照品贮备液0.2、0.4、0.8、1.6、2.0ml,置 10ml量瓶中,加入 80%甲醇稀释至刻度,即得浓度为1.995、3.991、7.981、15.96、19.95μg·ml-1的熊果酸对照品溶液, 按“1.3.1”项色谱条件进行测定,以对照品浓度为横坐标(C),峰面积为纵坐标(A),进行回归分析,制定标准曲线,得回归方程为:A=0.1703C+0.0456(r=0.9999),表明熊果酸在 1.995-19.95μg·ml-1浓度范围内线性关系良好。

1.3.5 精密度试验 取15.963μg·ml-1熊果酸对照品溶液,按“1.3.1”项色谱条件连续进样6次,测定峰面积。计算的平均峰面积的RSD=0.95%,表明本条件精密度良好。

为了实现教学目的和要求,网络插补实验教学的关键技术包括交互性、动态性等。下面对其实现过程进行具体分析。

1.4.2 供试品溶液的制备 称取车前草鲜品或者干品提取物0.1g,精密称定,置100ml量瓶中,加60%乙醇超声15min使溶解,放冷,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得供试品溶液。

1.3.1 色谱条件 Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇:乙腈:0.2%磷酸水(40:50:10);流速:1ml·min-1; 柱温:25℃; 检测波长:210nm;进样量:20μl。 在此色谱条件下,对照品及样品的色谱图如下:

显然,学生从例1的分析过程中至少有两点收获:其一,解题首先明确要做什么,再借助“知识溯源”找准解题思路的切入点,确定转化方向;其二,当思维转化受阻时,懂得如何通过挖掘条件的隐含信息适时调控,激活受阻思维的活力点,强化了转化技能.换言之,学生不仅知道“怎样做”,还懂得“为什么这样做”,从而学会“怎样想”,转化能力自然也就得到有效锤炼与全面提升.

 

表1 熊果酸加样回收率试验结果

  

编号 样品中含量(μg)加入量(μg)测得量(μg)回收率(%)1 2 3 4 5 6取样量(g)0.1145 0.1204 0.108 0.1145 0.1068 0.1121 341.2 358.8 321.8 341.2 318.3 334.1 299.3 299.3 299.3 299.3 299.3 299.3 635.0 656.0 616.5 642.6 617.0 627.9 98.14 99.29 98.43 100.7 99.80 98.18

1.3.9 样品的测定 取车前草鲜药及干药提取物各0.2g,精密称定,制备供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 20μl,按““1.3.1”项色谱条件测定,采用标准曲线法计算样品中熊果酸的含量。结果:车前草鲜品提取物的含量为2.980mg·g-1;车前草干品提取物的含量为 1.479mg·g-1

1.4 总黄酮的含量测定与结果[8]

第一,依据是“改写世界历史”。马克思主义唯物史观认为,一切社会的历史都是阶级斗争的历史。阶级斗争既创造了历史,又改写了历史。《共产党宣言》宣告了超越资本主义文明的一个基本前提,就是全面、彻底地反省资本主义对于人类历史所具有的“超出之前全部历史总和”的伟大革命作用。马克思恩格斯也肯定了资产阶级革命作用。这个作用就是改写世界历史。[6]P106

1.4.1 芦丁对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品12.51mg,置100ml量瓶中,加60%乙醇溶液使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得0.1201mg·ml-1对照品溶液。

1.3.6 重复性试验 取同一批车前草鲜药提取物,平行制备6份供试品溶液,按“1.3.1”项色谱条件进行进样分析,测定峰面积,计算熊果酸的平均含量为 2.980mg·g-1,RSD=1.40%,表明该方法的重复性良好。

2.1.5 学生安全和纪律状况总体良好,但安全隐患也应重视 由于学校层面及工程学院对学生管理较细致、要求较严格,对外出组织活动有限制,总体上,学生的安全状况和纪律状况良好。然而,学校周边的安全隐患也不能忽视,如娱乐场所、交通、食品安全等。部分学生在课余偶尔参与打麻将、玩扑克牌等娱乐,有三成学生在此娱乐中有一定的经济刺激行为,需要加强思想教育。学生宿舍无门禁带来的安全隐患,应引起重视。对学生使用大功率电器的问题,一方面需要继续加强安全教育,同时也应积极改善学校的基础设施条件,满足学生的合理生活需求,治标更应治本。

1.2.1 鲜品提取物的制备 称取洗净晾干水分的新鲜车前草2kg,粉碎,第一次加4800ml的60%乙醇超声提取1h,过滤,药渣再加入3200ml的60%乙醇超声提取1h,过滤,合并两次提取液,旋转蒸发至干,放入60℃烘箱烘干,粉碎,即得。

1.4.4 标准曲线的制备 精密量取对照品液0、0.5、1、2、3、4、5ml分别置于 10ml容量瓶中, 分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml摇匀,静置6min;再加10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀,静置6min,再加入4%氢氧化钠溶液4ml,用70%乙醇稀释定容至10ml刻度线,摇匀,静置12min,以60%乙醇溶液作空白,于510nm处测吸光度。以吸光度(A)为纵坐标,对照品浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程为 A=0.0121C+0.0094(r=9998),芦丁在 6.01-60.05 μg·ml-1与吸光度线性关系良好。

1.4.5 精密度试验 取对照品溶液3ml,置于10ml容量瓶中,照“1.4.4”项下方法,自“加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml”起,依法测定吸光度,同份显色样品;连续测定6次,计算RSD=0.12%,结果显示精密度良好。

1.4.6 重复性试验 取车前草鲜品提取物0.1g,共称取6份,照“1.4.2”项下方法制备供试品溶液,精密量取2ml置10ml量瓶中,照“1.4.3”项下方法,测定吸光度,结果6份样品中总黄酮含量的RSD为1.58%,说明样品的重复性良好。

1.4.7 稳定性试验 取重复性项下的供试品溶液,在室温下分别放置0、30、60、120分钟,测定吸光度,计算各吸光度的相对标准偏差RSD=0.91%,说明样品的稳定性良好。

1.4.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的车前草鲜药提取物约50mg,共6份按1:1加入芦丁对照品,按“1.4.2”项下方法制备供试品溶液,照“1.4.3”项下方法进行测定,计算回收率。芦丁的平均加样回收率为99.26%,RSD为1.4%。结果表明,芦丁的回收率符合要求。测定方法可行。结果见表2。

民俗旅游的开发,其本质是通过旅游的形式,促进民俗文化的传承,且以此带动地区经济发展,而开发者大多将经济作为重点,将文化传承放在一边,因此,在民俗旅游项目开发时,政府必须明确其开发目的,并对民俗文化的开发及资源保护做出正确的指示,而对于已经成型的且不符合标准的,要严令整改,进而保证民俗旅游项目的民族性。

1.4.9 样品的测定 取车前草鲜品和干品提取物0.1g,精密称定,照“1.4.2”项下方法制备供试品溶液,照“1.4.3”项下方法进行测定,结果:车前草鲜品提取物的含量为167.8mg·g;车前草干品提取物的含量为 128.1mg·g。

2 讨论

本研究中车前草干品为鲜品经烘箱60℃干燥而来,干燥之前的鲜品与鲜品提取物所用鲜品为同一批采购,保证了原材料的一致性,从而保证最后结果的可靠性。对鲜品-干品-干品提取物,干品提取物的得膏率为5.667%;从鲜品-鲜品提取物,鲜品提取物的得膏率为5.769%,表明鲜品提取物和干品提取物的得膏率基本一致。

 

表2 芦丁加样回收率试验结果

  

编号 样品中含量(μg)加入量(μg)测得量(μg)回收率(%)1 2 3 4 5 6取样量(g)49.43 50.32 51.23 54.45 48.78 50.09 8.29 8.44 8.60 9.14 8.19 8.41 8.91 9.03 8.34 8.32 8.65 8.77 17.11 17.45 17.09 17.32 16.71 17.01 98.94 99.74 101.8 98.36 98.55 98.12

在对车前草提取物中熊果酸的含量进行测定时,用纯甲醇处理提取物,提取物不易溶散,从而使熊果酸提取不完全,经过多次试验,采用80%甲醇作为提取溶剂效果较好,故采用80%甲醇处理提取物。

从实验结果看,采用相同的提取工艺,车前草鲜品提取物中熊果酸和总黄酮的含量均高于干品提取物,鲜品提取物中熊果酸含量比干品高了1倍多,鲜品提取物中总黄酮含量比干品高约30%。随着对车前草鲜品研究的深入,以及保鲜技术的发展,可以发掘出车前草鲜品的更多新用途,本实验为合理高效的利用车前草鲜品提供了一定的参考依据。

参考文献

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李剑琦,刘宇政,余承欢,曾飞,冷红文,杨慧,郭新秀
《江西医药》 2018年第03期
《江西医药》2018年第03期文献

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