癫痫(epilepsy)又称“羊角风”或“羊癫风”，由大脑神经元的突发性异常放电引起，导致大脑功能短暂性障碍的一种慢性精神疾病。我国癫痫的总患病率约7‰，癫痫不仅给患者造成生命健康的威胁，也给患者家庭及社会带来经济负担。目前对于癫痫的治疗主要通过卡马西平或拉莫三嗪等抗癫痫药物，但抗癫痫药物易造成服药者皮肤过敏反应已是医学界公认的事实〔1〕。SJS综合征及TEN是临床最严重的有皮肤损害的、威胁患者生命的药物不良反应。患者表现为快速进行性的皮肤斑丘疹和疱疹，而后发展为皮肤黏膜溃疡及脱落〔2〕。SJS/TEN是同一种疾病的不同表现形式，皮肤脱落少于10%为SJS，而大于30%为TEN，在10%～30%之间的为SJS与TEN共存〔3〕。SJS/TEN还可伴有发热，以及心、肝、肾的损害，甚至影响呼吸及消化系统。2004年，台湾首次报道卡马西平所致的SJS与HLA-B*1502呈强相关〔4-5〕。HLA-B*1502与SJS的相关性在不同的地域和种族间有很大的差别，LA-B*1502等位基因的频率在各个地区和人群中也是不同的。确定HLA-B*1502与SJS/TEN的强相关性对于临床个体化治疗有很重要的指导意义。本文探究抗癫痫药物所致重症皮肤过敏反应与HLA-B*1502基因的关联性，为抗癫痫药物所致重症皮肤过敏反应的防治提供理论依据。

由图5和图6可知，其等高线图呈现椭圆形，即鲜花椒添加量和菜籽油添加量的交互作用以及十三香添加量与菜籽油添加量的交互作用显著。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究观察对象为2015年6月-2017年2月期间于我院治疗的40例癫痫患者，所有患者均采用卡马西平(CBZ)或拉莫三嗪(LTG)治疗，CBZ致Stevens Johnson综合征(SJS)5例，致中毒性表皮坏死溶解症(Toxic epidermal necrolysis，TEN)3例，SJS/TEN 4例，LTG致TEN 2例，SJS/TEN 2例，共16例患者出现重症皮肤过敏反应，设为过敏组，将24例未发生严重过敏反应者设为耐受组，同期25例体检的健康自愿者设为对照组。过敏组男9人，女7人，年龄15～75岁，平均(34.33±3.43)岁；耐受组男14人，女10人,年龄14～70岁，平均(35.45±3.76)岁；对照组男15人，女10人,年龄16～67岁，平均(35.11±3.54)岁。本研究已获得我院伦理委员会批准。纳入标准：过敏者符合成爱华等《现代皮肤病学》〔6〕SJS/TEN诊断标准；我院收治的汉族癫痫患者；年龄大于14周岁。排除标准：两个月内有CBZ、LTG外的抗癫痫药物服用史；有原发性皮肤病者；患者或家属不同意本次研究方案。比较三组人群的年龄、性别等一般资料无显著性差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2 诊断标准 SJS、TEN诊断标准：参照成爱华等《现代皮肤病学》：皮肤出现大疱；有眼、口腔、鼻、外阴、肛周、消化道、咽喉部及呼吸道、泌尿生殖道黏膜损害，典型或非典型靶形损害；有关节痛、腹痛、发热、内脏损害等全身症状；TEN是SJS的重型表现，是同一疾病谱系的不同阶段的表现，皮肤脱落少于10%为SJS，而大于30%为TEN，在10%～30%之间的为SJS与TEN共存。

1.3 方法 (1)DNA提取：采集所有人员的肘静脉血，采用EDTA抗凝管收集，采用全血DNA抽提试剂盒(美国MP公司FASTDNA SPIN KIT)，测定DNA纯度及浓度，调整浓度为30 ng/μl，于-40 ℃恒温箱保存待检。(2)PCR-SSP：设置4对特异性引物，以S1、S2、S3、S4表示，两组内参引物以C1、C2表示，参照25 μl反应体系：200 μmol/L dNTPs，30～50 ng DNA，0.05 U/μl Taq聚合酶，设置各引物终浓度均为1μmol/L，缓冲液终浓度为1·PCR缓冲液。PCR反应条件：扩增热循环条件：96 ℃预变性(60 s)、96 ℃变性(30 s)、62 ℃退火(45 s)、72 ℃延伸(45 s)，共计4个循环；96 ℃变性(10 s)、55 ℃退火(50 s)、72 ℃延伸(90 s)，共9个循环。采用2.0%凝胶电泳检测以及凝胶成像系统成像。详细过程参照文献〔7〕。

1.4 凝胶成像系统成像判断标准 观察各泳道白色条带出现情况，与标准分子量DNA Marker进行对比，当白色条带位置与目的基因片段位置大小一致时则表明目的基因扩增成功，为目的条带，否则为杂带，将成像图片转换为jpg照片格式后完整保存。

1.5 统计学分析 所有检测资料均录入数据库，采用SPSS 17统计软件，计数资料都以百分比(%)表示，采用Fisher’s确切概率检验，计量资料以表示，当P<0.05时表示有统计学意义。

2 结果

2.1 PCR-SSP检测结果 40例样本中，全部两对内参C1、C2均扩增成功，如CBZ引致SJS组(样本2)所示，S1～S4均扩增出目的片段，则为HLA-B*1502基因型，各组PCR-SSP检测扩增产物见图1。

2.2 抗癫痫药物所致重症皮肤过敏反应与HLA-B*1502基因的相关性 CBZ致SJS者HLA-B*1502基因型阳性4例，基因频率80.00%；CBZ致SJS/TEN者HLA-B*1502基因型阳性3例，基因频率75.00%；CBZ致TEN者HLA-B*1502基因型阳性3例，基因频率100.00%；LTG致TEN、SJS/TEN者HLA-B*1502基因型阳性均为2例，基因频率100.00%；耐受组HLA-B*1502基因型阳性2例，基因频率8.33%；对照组HLA-B*1502基因型阳性3例，基因频率12.00%。两种药物引起的各型重症皮肤过敏反应者HLA-B*1502基因频率均显著高于耐受组与对照组，有统计学意义(P<0.05)。

  

图1 PCR-SSP检测结果1：对照组；2：CBZ致SJS；3：耐受组；4：CBZ致TEN；5：LTG致TEN

3 讨论

抗癫痫药物是神经内科常用药物，其造成的各类不良反应也较为常见，症状较轻者暂停药物或无需特殊处理即可恢复，严重者则可能影响生命健康，因此需要引起高度重视〔8〕。临床观察发现，抗癫痫药物引起的皮肤组织的不良反应较为常见,也较严重，轻者表现为荨麻疹等斑丘疹，严重者出现剥脱性皮炎、高敏反应综合征、多形红斑样药疹、人疱性表皮松解萎缩坏死型药疹等〔9〕。SJS和TEN都是重症皮肤过敏反应，可引发永久性残疾，严重者危及生命〔10〕。

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通过对免疫机制的研究认为，抗癫痫药物造成的皮肤不良反应者其病灶区出现了大量的浸润性炎症细胞，而CBZ的用量增加能够缩短炎症细胞出现时间，病症加重〔11〕。有报道指出，CBZ引起的严重皮肤不良反应中有超过20%发展为SJS和TEN〔12〕。近年来基因研究的进步对抗癫痫药物所致重症皮肤过敏反应有了新的认识，根据Chung等的报道，在我国台湾省，通过检测HLA-B*1502等位基因来预测服用卡马西平等药物是否导致SJS/TEN，其敏感性可达100%，特异性达97%，由此可见HLA-B*1502等位基因与SJS/TEN发生、发展可能存在明显的关系〔13〕。

本研究结果显示，耐受组HLA-B*1502基因型阳性2例，基因频率8.33%；对照组HLA-B*1502基因型阳性3例，基因频率12.00%，而两种药物引起的各型重症皮肤过敏反应者HLA-B*1502基因频率均显著高于耐受组与对照组，由此可见抗癫痫药物所致重症皮肤过敏反应者HLA-B*1502基因频率均保持较高水平。但各地报道HLA-B*1502基因型与SJS/TEN的相关性因地域和种族不同具有很大的差别。在台湾，一项60例SJS/TEN患者的HLA-B*1502基因检测显示，其中59例患者均为HLA-B*1502基因型阳性，基因频率高达98.33%〔14〕；香港一项4例SJS/TEN患者的HLA-B*1502基因检测显示，其中4例患者均为HLA-B*1502基因型阳性，基因频率高达100.00%〔15〕，由此可见在华人群体中抗癫痫药物所致重症皮肤过敏反应与HLA-B*1502基因具有较强的相关性〔16〕。而一项来自欧洲的调查结果表明，英法两国SJS/TEN患者的HLA-B*1502基因阳性率仅为33.33%，而其中大多来自华裔或东南亚裔，而白种人阳性率极低〔17〕。这种HLA-B*1502基因相关性地域及人种的差异为抗癫痫药物的大面积推广使用带来不便。因此临床医生能够通过检测HLA-B*1502等位基因，对抗癫痫药导致SJS/TEN的高风险人群进行区分。对于HLA-B*1502基因阳性者在LTG及CBZ的使用上需多加注意，除非药物的预期疗效能够显著大于可能出现的药物副作用，否则不推荐使用〔18〕。

综上所述，抗癫痫药物LTG及CBZ所致重症皮肤过敏反应发生率较高，且与HLA-B*1502基因的表达具有明显的相关性。

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