分析大量病例资料可知，痛经、经量增多、经期延长、不孕、贫血等为子宫腺肌病患者的主要临床表现，对于有生育要求的妇女来说，是一个值得重视的问题〔1〕。随着研究的不断深入，有学者发现，子宫腺肌病虽为良性疾病，但其也具有复发、转移以及浸润的特点和侵袭组织及血管形成的能力，类似于肿瘤，由此，子宫腺肌病也成了目前临床上的研究热点〔2-3〕。不少国内外研究表明，基底膜的破坏和细胞外基质的降解与细胞组织的侵袭和转移有着密不可分的关系，而在这其中，多种蛋白酶和蛋白体系的参与在这其中也起着极为重要的意义，但目前尚未明确具体指标〔4〕。本文通过分析不同子宫内膜组织标本的资料，旨在探讨反转录富含半胱氨酸蛋白(RECK)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在子宫腺肌病中的表达及临床意义，具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 对象 选取我院2012年5月至2017年5月病理科石蜡存档包埋的96例组织标本作为研究对象，根据其标本来源将其分为A组36例(为子宫腺肌病异位内膜标本)、B组34例(为因子宫腺肌病切除子宫的在位内膜标本)和对照组26例(来自因其它妇科疾病而治疗的患者标本，均非子宫腺肌病)，其中增生期56例和分泌期40例。所有组织标本来源患者其年龄为32～58岁，平均年龄为(44.28±9.32)岁。(1)纳入标准：①所有组织标本来源患者其入院前3个月均未采用激素等类似药物进行治疗；②所有组织标本均在手术过程中切取送入病理科后取材。(2)排除标准：①所有组织标本来源患者存在其他系统严重疾病者；②存在恶性肿瘤者；③临床记录资料不完整者。

1.2 方法 所有组织标本均采用免疫组织化学法进行RECK和MMP-2的检测。免疫组化试剂：RT-PCR一步法试剂盒，琼脂糖、免疫组织化学 U1traSensitiveTmS-P超敏试剂盒，即用型鼠抗人MMP-2单克隆抗体，浓缩型兔抗人单克隆抗体RECK，DAB显色剂，其他如氯仿、异丙醇、无水酒精、水、双氧水、蛋白酶、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、树脂、苏木素等。检测方法：三组组织标本均经石蜡包埋组织5 μm厚连续切片后裱于载玻片上，60 ℃烤箱烘烤30 min，组织切片在二甲苯中脱蜡2次，每次10 min。实验开始前37 ℃烤箱过夜，后进行免疫组织化学染色。RECK和MMP-2水平检测：取RT-PCR扩增产物5 μl和溴酚蓝上样缓冲液2 μl，混合后上样于2%的琼脂糖凝胶(0.5 μg/ml溴化乙锭染色)加样孔中，80 V电泳30 min，紫外反射投射仪下观察条带，凝胶图像分析仪对目的基因(RECK和MMP-2)及内参照基因(GAPDH)进行积分吸光度分析并摄像，对比DNA marker，扩增出221 bp和325 bp的条带为阳性表达，内参照基因为101 bp条带。RECK/GAPDH和MMP-2/GAPDH的比值分别代表RECK和MMP-2在各样本中的表达水平。

1.3 观察指标及标准 根据其资料及检测结果记录三组标本来源患者的年龄等一般临床资料及RECK、MMP-2水平，并分析其与子宫腺肌病的相关性。RECK和MMP-2结果判定标准〔5〕：RECK、MMP-2 的阳性染色模式均为细胞浆着色，呈浅黄色至棕黄色颗粒，结果判定遵循双盲法，由两名病理科医师独立观察，细胞计数时均不显示标本患者的临床病理资料。RECK、MMP-2 染色结果判定：参照文献报道随机并计数10个高倍镜(x400)视野，计数1000个细胞，计数阳性细胞百分率：<10%为阴性(-)，10%～50%为弱阳性，>50%～75%为阳性(++)，>75%为强阳性(+++)，将弱阳性、阳性和强阳性统称为阳性〔6〕。

1.4 统计学方法 所有数据均采用SPSS 18.0软件进行数据统计学分析，计量资料以均数±标准差进行描述，采用方差分析，事后两两间采用Snk-q进行检验，计数资料以率/构成比描述，两组间采用χ2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三组标本来源患者一般临床资料比较 三组患者在年龄、病程、体质指数、内膜时期以及文化程度等一般资料上比较无显著差异，具有可比性(P>0.05)，详见表1。

2.2 RECK在不同组织标本中表达情况比较 对照组和B组其RECK的阳性表达率均显著高于A组(P<0.05)，但对照组和B组比较无差异(P>0.05)，详见表2。

 

表1 三组标本来源患者一般临床资料比较

  

分组例数年龄(岁)病程(年)体质量指数增生期/分泌期初中及以上/初中以下对照组2644.08±9.062.34±0.6422.68±5.3418/816/10A组3644.28±9.242.08±0.6022.60±5.2020/1628/8B组3444.36±9.362.64±0.5822.74±5.4818/1624/10

 

表2 RECK在不同组织标本中表达情况比较(例)

  

分组例数阴性弱阳性阳性强阳性阳性率(%)对照组266461076.92∗A组362473233.33B组3410810670.59∗

与A组比较：*P<0.05

2.3 MMP-2在不同组织标本中表达情况比较 A组和B组其MMP-2的阳性表达率均显著高于对照组(P<0.05)，但A组与B组比较无统计学差异(P>0.05)，详见表3。

2.4 RECK在不同标本的不同时期其表达情况比较 A组和B组其增生期和分泌期RECK的阳性表达率比较均无明显差异(P>0.05)，但对照组增生期 RECK的阳性表达率显著高于分泌期(P<0.05)，详见表4。

2.5 MMP-2在不同标本的不同时期其表达情况比较 A组和B组其增生期和分泌期 MMP-2的阳性表达率比较均无差异(P>0.05)，但对照组其分泌期 MMP-2的阳性表达率显著高于增生期(P<0.05)，详见表5。

表3 MMP-2在不同组织标本中表达情况比较(例)

  

分组例数阴性弱阳性阳性强阳性阳性率(%)对照组261483146.15A组366681683.33∗B组3410810670.59∗

与对照组比较：*P<0.05

 

表4 RECK在不同标本的不同时期其表达情况比较(例)

  

表达情况对照组增生期分泌期合计A组增生期分泌期合计B组增生期分泌期合计阴性3361311245510弱阳性325437538阳性5162135510强阳性729112336阳性率(%)83.3362.50∗76.9235.0031.2533.3372.2268.7570.59

与本组增生期比较：*P<0.05

 

表5 MMP-2在不同标本的不同时期其表达情况比较

  

表达情况对照组增生期分泌期合计A组增生期分泌期合计B组增生期分泌期合计阴性122144375510弱阳性538336538阳性1235385510强阳性0118715336阳性率(%)33.3375.00∗46.1580.0081.2580.5672.2268.7570.59

与本组增生期比较：*P<0.05

3 讨论

近年来，因外界环境、生活习惯方式以及遗传等多种因素所致，我国妇科疾病种类及患者逐渐增多，其中子宫腺肌病在相关数据中被报道发病率在近年呈逐渐上升趋势〔7〕。目前，临床上对于子宫腺肌病的致病原因及具体发病机制尚未完全阐述清楚，但分析以往临床病理研究可知，子宫腺肌病是指子宫内膜腺体和间质细胞向肌层浸润并在其中弥漫性生长的一种良性子宫病变，在育龄妇女中最为常见，有相关数据曾报道手术切除的子宫标本中子宫腺肌病检出率为40%～60%，故明确子宫腺肌病的发病机制并及时采取干预措施是降低该病发病率的关键措施〔8-9〕。

本组研究结果显示，在子宫腺肌病患者的子宫内膜中，其RECK和MMP-2的阳性表达率较正常子宫内膜组织分别显著降低和升高，由此认为，RECK和MMP-2在机体中表达水平的高低与子宫腺肌病的发生可能有着密不可分的关系。另一方面，本组研究结果还显示，在异位子宫内膜和在位子宫内膜组织中其增生期和分泌期的RECK与MMP-2的阳性表达率比较均无差异；但对照组增生期RECK阳性表达率显著高于分泌期，而MMP-2的阳性表达率在分泌期显著高于增生期，由此则进一步提示RECK和MMP-2的表达水平与子宫疾病的相关性。结合以往临床研究〔10〕可知，MMP-2在细胞外基质的降解过程中起着极为重要的作用，细胞外基质与组织细胞的转移和侵袭有着密不可分的关系。曾有研究显示，含有细胞外基质成分平滑肌束组成的子宫肌层有阻止子宫内膜侵入的作用，故当MMP-2的表达水平升高时，细胞外基质逐渐被降解，其对子宫内膜侵入的阻止作用则进一步减弱，从而加大其侵袭可能。而RECK是近年来新发现的MMP抑制剂，其对MMP-2、MMP-9及MT1-MMP等具有一定的抑制作用，从而可进一步阻止相关血管的形成及转移。目前，临床上对于RECK的研究多侧重于肿瘤转移〔11〕。但本组研究结果显示RECK与子宫腺肌病的形成也可能存在着一定的关系。考虑其原因可能因为其对MMP-2具有一定的抑制作用，随着RECK的增多，MMP-2则逐渐减少，随之细胞外基质降解程度减小，由此起到阻止内膜侵入的效果〔12〕。

综上所述，在子宫腺肌病患者中，MMP-2和RECK分别为较高和较低表达，其中MMP-2可能为促发子宫腺肌病发生的因素，而RECK可作为一种阻止子宫腺肌病发生的保护因素。但本组研究所选样本含量过小及研究时间过短，对于其两者的具体关系尚未明确，可加大样本含量和延长研究时间进一步深入研究。

参考文献：

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〔2〕 王木森,柳雅玲.子宫腺肌病组织中MMP2、MMP7、RECK、TWIST1、CD133表达及MVD变化〔J〕.山东医药,2016,56(26):53.

〔3〕 高浩然,佟德惠,黄泽清,等.RECK、MMP-14及VEGF在喉癌中的表达及临床意义〔J〕.中国医药导报,2016,13(2):85.

〔4〕 张伟,胡倩倩,王璐,等.MMP-2、MVD及MEK-2在子宫内膜异位症中的表达及临床意义〔J〕.海南医学院学报,2016,22(5):463.

〔5〕 王刚,刘浩乾,马蓉,等.Vav3与MMP-2在人胃癌组织中的表达及临床意义〔J〕.临床肿瘤学杂志,2016,21(2):156.

〔6〕 王光辉,王虎霞,陈楠,等.MMP-2在乳腺癌中的表达及临床意义〔J〕.陕西医学杂志,2017,46(11):2593.

〔7〕 王芹,马赛,安峰,等.分化抑制蛋白-1和基质金属蛋白酶2在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义〔J〕.中国临床药理学杂志,2016,32(15):1403.

〔8〕 刘念,曹颖光,朱光勋.RECK、MMP-2在牙龈瘤及慢性牙周炎牙龈组织中的表达〔J〕.临床口腔医学杂志,2017,33(8):462.

〔9〕 张阿娜.乳腺癌组织中VEGF-D、MMP-2及MMP-9的表达及其临床意义〔J〕. 实用癌症杂志,2016,31(2):198.

〔10〕 喻长法,叶丽君,段达荣,等.MMP-2、MMP-9和VEGF在子宫内膜异位症中的表达及其意义〔J〕.中国优生与遗传杂志,2016，21(1):34.

〔11〕 孔丽娟.宫颈癌患者癌组织中基质金属蛋白酶2和9的表达及临床意义〔J〕.中国综合临床,2016,32(3):267.

〔12〕 杜柏兴,尹小朋,王冰,等.RAGE与RECK在涎腺多形性腺瘤复发及恶变中的表达及意义〔J〕.口腔医学研究,2017,33(2):145.

(收稿日期:2018-01-11; 修回日期：2018-02-26)