原发免疫性血小板减少症(ITP)为临床常见自身免疫性出血性疾病，以内脏出血、皮肤黏膜出血及颅内出血为主要临床表现，流行病学数据显示ITP占出血性疾病总数的30%，且其患病率日益增高，病机与血小板生成不足、血小板破坏增多以及机体免疫功能异常有关〔1〕。现阶段临床对其病机尚未完全明确，常认为与遗传、感染、免疫功能异常等众多因素有关，而国内外已有大量文献研究表明T细胞免疫功能紊乱是ITP疾病发生的重要环节〔2-4〕。T细胞经血流分布至外周免疫器官胸腺，经淋巴管、外周血和组织液等再循环，最终发挥细胞免疫及免疫调节等功能，相关学者研究指出CD4+ T淋巴细胞在自身免疫性疾病发生中起到一定作用〔5〕。近期有文献报告指出IL-37与多种自身免疫性疾病的发生有紧密关系〔6〕，但现阶段临床有关ITP患者外周血CD4+ T淋巴细胞与IL-37表达的变化及意义的研究尚未涉及，为此笔者于本文展开临床对照性研究，结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年2月-2017年2月我院收治的32例ITP患者〔治疗前患者记为治疗前组(n=32)，治疗后缓解患者记为治疗后缓解组(n=26)〕和同时期在我院体检的健康志愿者30例(记为健康组)为对象。(1)纳入标准：①患者符合中华医学会血液学会血栓与止血组2011年制定的有关ITP诊断标准〔7〕；②均为初发病；③纳入研究前未接受糖皮质激素等免疫抑制剂治疗。(2)排除标准：①合并有其它引起血小板减少的疾病者；②妊娠期及哺乳期妇女；③合并有炎症性疾病者；④纳入研究前使用过抗炎药物治疗者；⑤合并严重心、肝、肾等重要脏器功能障碍。治疗前组32例，男、女各18、14例，年龄25～59岁，平均(38.57±5.47)岁；健康组30例，男、女各17、13例，年龄25～60岁，平均(39.01±5.43)岁。治疗前组、健康组上述性别、年龄基线资料相较无明显差异(P>0.05)，有可比性。纳入的32例患者均给予地塞米松治疗(40 mg/d，持续给药4 d)后检测血小板计数>30×109/L，临床症状得以有效缓解且无出血现象的患者共有26例，记为治疗后缓解组，治疗后缓解组性别、年龄基线资料与健康组相较无明显差异(P>0.05)，有可比性。

1.2 研究方法 (1)主要仪器和试剂：振荡仪(VOR-TEX-genie，美国)、流式细胞仪(BD，FACSCalibur，美国)、酶标仪(Thermo Scientific，Multiskan MK3，美国)、血细胞计数仪(sysmex XN-1000，日本)，PE标记的抗-CD4(BD，美国)，血清IL-37酶联免疫吸附法检测试剂盒(Cat No BMS223INST)。(2)外周血CD4+ T淋巴细胞阳性率的测定：三组研究对象均取100 μl外周静脉血，将8 μl抗-CD4抗体加入并标记，另每例患者取外周血100 μl，不加抗体标记，作为流式细胞仪阴性对照，漩涡震荡30 s后，混匀避光放置10 min后，加入2 ml细胞裂解液，漩涡震荡30 s，避光放置10 min后，离心分离上清液，加入2 ml 1×PBS清洗2遍，去掉上清液后，加200 μl 1×PBS，后采用FACS Calibur进行检测。(3)血清IL-37检测：采用酶联免疫吸附法检测IL-37，所有操作严格按照试剂盒说明书进行。(4)血小板计数：采用sysmexXN-1000血细胞计数仪检测三组血小板计数。

1.3 观察指标 (1)三组外周血CD4+ T淋巴细胞阳性率比较；(3)三组血清IL-37水平和血小板计数比较；(3)ITP患者外周血CD4+ T淋巴细胞阳性率与IL-37水平、血小板计数的相关性分析。

1.4 统计学处理 选用统计学软件SPSS19.0对研究数据进行分析和处理，计量资料表示，组间对比进行t值检验，组间CD4+ T淋巴细胞阳性率、血清IL-37、血小板计数比较采用重复测量方差分析，服从正态分布各变量间相关性比较采用Pearson直线相关性分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组外周血CD4+ T淋巴细胞阳性率比较 治疗前组外周血CD4+ T淋巴细胞阳性率最低，为(18.24±3.15)%；治疗后缓解组次之，为(25.57±5.98)%；健康组最高，为(32.51±8.87)%。三组两两相比较差异均有统计学意义(P<0.01)。

2.2 三组血清IL-37水平和血小板计数比较 治疗前组IL-37水平较治疗后缓解组、健康组明显高，血小板计数较治疗后缓解组、健康组明显低，差异显著(P<0.01)；治疗后缓解组IL-37较健康组明显高，而血小板计数较健康组明显低，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 三组血清IL-37水平和血小板计数比较

  

组别例数IL-37(ng/L)血小板计数(×109/L)治疗前组32144.19±68.76∗#15.68±8.47∗#治疗后缓解组2696.05±64.98∗102.21±59.21∗健康组3049.21±37.12201.15±69.57F18.24723.578P<0.01<0.01

与健康组比较：*P<0.01；与治疗后缓解组比较：#P<0.01

2.3 ITP患者外周血CD4+ T淋巴细胞与IL-37水平、血小板计数相关性分析 相关性分析结果显示，ITP患者外周血中CD4+ T淋巴细胞阳性率与IL-37呈明显负相关(r=-0.478，P<0.001)，但与血小板计数呈明显正相关(r=0.422，P<0.001)，见图1、2。

 

图1 外周血CD4+ T淋巴细胞与IL-37水平的相关性分析

  

图2 外周血CD4+ T淋巴细胞与血小板计数的相关性分析

3 讨论

ITP病理基础为血小板抗体参与血小板生成、抑制和破坏，最终引起自身免疫出血、血小板数量降低，目前对其病机尚未完全明确。有研究认为体液免疫、机体自身免疫反应异常可产生抗血小板抗体，引发血小板减少〔8〕。近年来临床有关ITP与免疫功能异常关系的研究不断深入，如既往学者研究发现ITP患者体内T淋巴细胞功能障碍，进一步深入研究发现ITP患者外周血CD4+ T淋巴细胞水平出现明显下降趋势〔9〕。另有学者研究表明在ITP疾病发展过程中，炎症细胞分泌大量促炎因子和抗炎因子，炎症因子平衡失调，引发自身免疫紊乱，导致本病发生和进展，IL-37作为一种新型抗炎因子，其对多种细胞因子表达有较好的调控作用〔10〕。

本次结果发现，治疗前组CD4+ T淋巴细胞阳性率、血小板计数最低，IL-37最高，治疗后缓解组次之，健康组CD4+ T淋巴细胞阳性率、血小板计数最高，IL-37最低，三组之间两两相较有显著性差异。经进一步相关性分析发现，ITP患者外周血中CD4+ T淋巴细胞阳性率与IL-37呈明显负相关，但与血小板计数有明显正相关，初步证实了ITP患者存在CD4+ T淋巴细胞阳性率和血小板计数下降，以及IL-37升高现象，提示CD4+ T淋巴细胞可通过间接抑制炎症因子IL-37表达从而延缓本病进展〔11〕。ITP患者外周血CD4+ T淋巴细胞阳性率下降时，预示着机体T淋巴细胞功能异常，免疫功能降低，其对自身的细胞抑制功能减弱，而对应的T淋巴细胞亚群Th2细胞反应将变得更为强烈，由CD4+ T淋巴细胞亚群分泌的细胞因子随之增多，进一步导致B细胞抗血小板抗体增多，最终加速了对患者血小板破坏。既往Qiu等〔12〕学者文献报告中对ITP小鼠研究发现，CD8+ T细胞引发巨噬细胞形态学变化及诱导血小板生成减少的模型时，需有CD4+ T淋巴细胞参与，也证实了CD4+ T淋巴细胞在ITP疾病发生、进展中有一定作用。IL-37在人体多种细胞、组织中广泛存在，尤以淋巴细胞、单核细胞和皮肤表皮细胞中最为常见，是β-三叶草结构白介素新成员，属于炎症反应的抑制因子〔13〕。本次研究发现其在ITP治疗前患者中存在高表达，且ITP外周血CD4+ T淋巴细胞阳性率与IL-37存在明显负相关，在ITP发病初期，机体免疫功能异常，大量细胞因子释放，促炎因子破坏血小板，同时机体保护性机制也随之启动，释放抑炎症因子，对抗促炎因子，但免疫平衡仍遭到破坏，患者经过治疗后，随疾病缓解，抑炎因子日益减少，抗炎活性降低，提示IL-37与ITP发病机制有一定关系〔14〕。IL-37属于一种抑炎性细胞因子，在自身免疫性疾病中发挥抑制过度免疫反应、调节机体免疫平衡和维持机体免疫内环境稳定的作用〔15〕。本次研究还发现，治疗后缓解组外周血CD4+ T淋巴细胞阳性率、IL-37和血小板计数与健康组相较存在显著性差异，表明药物治疗后缓解患者机体中仍存在一定程度的免疫紊乱，可能预示复发风险高，同时提示IL-37和血小板计数与患者外周血CD4+ T淋巴细胞阳性率存在关联，对评估疾病进展程度有一定临床意义〔16〕。

综上所述，外周血CD4+ T淋巴细胞和血清IL-37与ITP疾病发生、进展有一定关联，为其未来在临床疾病监测中的应用提供了理论依据。

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