微小RNA (microRNA,miRNA)是一类在真核生物中广泛存在的一种内源性非编码RNA，长度为18～25个核苷酸，参与调控细胞生长、分化和凋亡等各个环节。精神分裂症(SZ)患者体内存在多种miRNA表达异常，miR-195是较早发现的一批[1]，但关于miR-195异常表达在精神分裂症中的影响近几年有规模的研究较少。本研究通过检测miR-195在精神分裂症患者外周血中的表达情况，初步探讨miR-195与精神分裂症及临床疗效的关系。

基金项目:国家自然科学基金(81171272，81671326)；江苏省南通市科技局项目(HS13958)；上海交通大学文理交叉认知专项基金项目(16JXRZ06)；上海市科委科研计划项目(7411970000)

作者单位:200030 上海交通大学医学院附属精神卫生中心(鲍晨曦，吕钦谕，赵静，耿瑞杰，程小燕，王颖怡，顾琪，李钰婷，易正辉 )；江苏省南通市第四人民医院(茅卫兵，徐健)

通讯作者:易正辉，E-Mail：yizhenghui1971@163.com；徐健，E-Mail：xujianr@163.com

十几年前，国内有学者就预言，30年后中国大学将不再开设体育课。为什么？当从国家层面启动大中小（幼）一体化体育课程体系建设的时候，大学体育课程将何去何从？如何才能真正建立一套具有国际视野，又符合国情的各学段相互衔接的体育课程体系？这些现实问题摆在了每一个参与建设一体化体育课程体系的专家学者面前。也是体育教育走国际化发展道路必须要解决的重大问题。

1.2.4 统计学方法 数据分析采用SPSS 22.0软件。分类变量如性别等采用卡方检验，连续变量如PANSS评分、RQ值等用均数±标准差表示。Shapiro-Wilk正态性检验显示，非正态分布采用Mann-Whitney U检验。治疗前后组PANSS评分等采用配对t检验；相关性分析采用Spearman相关等方法。作图采用GraphPad Prism 5.0软件。检验标准α=0.05，双侧检验。

1 对象和方法

1.1 对象

1.1.1 精神分裂症组 SZ患者均为2014年至2016年就诊于上海市精神卫生中心的门诊和住院患者。入组标准：①符合《美国精神障碍与统计手册》第4版(DSM-IV)的精神分裂症诊断标准；②汉族，年龄≤45岁；③首发或者复发患者，入组前应未曾服药或已停药4周以上，阳性与阴性症状量表(positive and negative syndrome scale,PANSS)≥60分。排除标准：①精神活性物质滥用及其他重性精神疾病；②颅脑外伤及脑器质性疾病；③孕妇或哺乳期妇女；④3个月内曾行改良电抽搐治疗(MECT)的患者。

1.2.2 总RNA提取 采用EDTA抗凝管抽取静脉血5ml。采用Invitrogin公司的Trizol试剂等，裂解人外周血单核细胞(eripheral blood mononuclear cell,PBMC)，采用氯仿、异丙醇和酒精等提取总RNA，加入DEPC水溶解RNA。使用NanoDrop分光光度计测定RNA浓度和纯度，OD260/OD280范围在1.8～2.0，琼脂糖凝胶电泳分析RNA的完整性，于-80℃冰箱冷冻保存。

两组在性别、年龄、体质量指数(Body Mass Index,BMI)间的差异无统计学意义；HC组的受教育年限高于SZ组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。用药治疗8周后，46例患者均完成量表评估随访，各量表的评分显著下降(P均<0.01)。见表2。

⑦资料来源于搜狐网：http：//www.sohu.com/a/105211150_443684.《从“薰衣草大本营”入手，探索法式乡村旅游》。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法及量表评定 SZ患者入组后即给予第二代抗精神病药物治疗，每位患者在2～4周里从最初剂量逐渐增加到有效剂量。其中单药治疗：奥氮平13例，利培酮4例，喹硫平3例，氨磺必利1例，阿立哌唑5例，其余20例联合用药。治疗前及治疗8周后由2名经过培训的精神科主治医师进行量表评定，包括PANSS、社会功能缺陷筛选量表(social disability screening schedule,SDSS)、临床总体印象量表(clinical global impression,CGI)。

1.1.2 正常对照组(HC) 为同期招募的社会志愿者；18～45岁；与入组患者无血缘关系；两系三代内无精神疾病家族史。

46例SZ患者基线期miR-195相对表达量(2.10±1.80)高于HC组(1.32±0.63)，差异有统计学意义(Z=2.767，P=0.003)。32例完成血液随访的患者基线期miR-195 RQ值(1.84±1.46)高于HC组(1.32±0.63)，差异有统计学意义(Z=-2.203，P=0.028)。治疗后miR-195 RQ值(1.54±0.41)与治疗前相比差异无统计学意义(Z=-0.580，P=0.562)；且与正常对照组比较差异无统计学意义(Z=-1.623，P=0.105)。

1.2.3 逆转录RNA与实时荧光定量PCR检测 采用RIBOBIO公司的Bulge-Loop miRNA Primer set和Bulge-Loop miRNA qRT-PCR Starter Kit(RN：R11067.1)进行miRNA-195和U6内参逆转录反应及实时荧光定量PCR反应。严格按照实验指南进行操作。采用相对定量法，以U6作为内参，利用2-ΔΔCT法计算样本中miR-195的相对表达量(relative quantitation,RQ)。

2004年12月，建设部与国家文物局发布了《中国历史文化名镇名村评价指标体系（试行）》。该指标将评价因子分为三级，各因子的权重值体现在各项因子分值的大小。2012年住房与城乡建设部颁布的《传统村落评价认定指标体系（试行）》，从传统村落的建筑、选址格局、非物质文化遗产等3个方面进行了定性和定量的评价。这些指标是对历史文化村镇和传统村落的保护价值评价，在列入保护名单之后，对于其保护的优劣评价，尚未出台法规标准。

2 结果

2.1 两组一般情况比较

本研究经上海市精神卫生中心伦理委员会批准。所有受试者均自愿参加，并签署知情同意书。

当天晚上，似睡非睡之时，我想起了珊德拉夫人的话，于是竭力把动荡的车厢，想象成一只巨型的钢铁摇篮……这种想象几乎是痛苦的，我始终无法进入婴儿般的睡眠中，只好和珊德拉夫人的美妙睡眠法告别。想象在与我的卧房相距几个车厢的地方，珊德拉夫人戴着古老的睡帽，穿着一个世纪以前的白纱裁剪而成的睡衣，随着车轮震荡恬静地安睡，并梦到她在天堂的母亲。我在暗中微笑。

 

表1 精神分裂症组和正常对照组临床特征比较

  

项目精神分裂症组正常对照组t/χ2P值总人数4649性别 3．7700．066 男性27(58．70%)19(38．77%) 女性19(41．30%)30(61．23%)年龄23．26±8．4020．86±2．34 1．8750．067BMI(m/kg2)21．97±2．2621．45±2．95 0．9710．334受教育年限(年)10．17±2．6414．20±1．84-8．5760．000病程(月)52．83±57．07

 

表2 精神分裂症组治疗前后量表评分比较

  

量表基线治疗8周t值P值PANSS89．80±15．1158．09±8．6712．9830．000SDSS10．69±3．497．30±1．536．5380．000CGI5．22±0．593．37±0．5714．8770．000

2.2 两组miR-195相对表达量比较

《西行漫记》正是在这一时代背景下完成的，它是一部文笔优美的纪实性很强的报道性作品。1936年6月至10月期间，作者埃德加·斯诺在以延安为中心的陕甘宁边区进行实地采访，真实记录了我国西北革命根据地的所见所闻。

2.3 miR-195表达水平与临床量表评分的相关性

Spearman相关分析显示，用药8周后，miR-195 ΔRQ值与ΔPANSS分值、ΔSDSS分值、ΔCGI分值无相关(r=0.106，P=0.564；r=0.253，P=0.162；r=0.201，P=0.270)。

3 讨论

Perkins等[1]首先在SZ患者死后大脑前额叶皮质中发现miRNA差异表达，并进行了验证，结果显示miR-195在SZ患者中低表达。Sun XY[2]等发现miR-195表达水平在SZ组和HC组之间差异无统计学意义。本研究纳入的SZ患者均为首发或复发的急性期SZ患者，PANSS≥60分，一定程度上控制了患者的异质性。研究组织不同，纳入患者临床特征不同可能是导致结果差异性的原因。另外在动物实验中，王昉[3]等通过对SFP小鼠腹腔注射氯胺酮造成早发精神分裂症模型小鼠后发现，miR-195表达高于生理盐水对照组。

本研究观察药物治疗8周后对患者miR-195表达水平的变化，并未发现统计学差异。孙欣羊[4]随访患者服用抗精神病药物后的miR-195 RQ值，也未发现治疗前后表达差异。宋红涛等[5]研究发现，miR-195表达水平与量表总分无明显相关性。与本研究结果一致。抗精神病药物的种类较多可能成为影响miR-195表达水平的混杂因素。

miRNA对基因的主要调控方式是基因沉默，抑制靶基因表达。GUO等[6]通过检测32个前馈回路，构建精神分裂症的microRNA-转录因子网络，发现miR-195是这一监管网络的核心之一，参与众多因子的调节，与脑源性神经营养因子(Brain Derived Neurotrophic Factor，BDNF)关系密切。BDNF在中枢和周围神经系统发育及成长过程中发挥重要作用，与精神分裂症发生及发展关系密切。Mellios等[7]也在SZ患者尸脑组织中发现BDNF能调控前额叶中γ-氨基丁酸(GABA)能转录本，同时自身又受miR-195的负调控。也有研究[8]发现抗精神病药物能改变miRNA的潜在网络，这些网络与5-羟色胺(5-HT)、GABA、谷氨酸和BDNF等密切相关。本研究发现miR-195在精神分裂症患者中表达较高，而治疗前后差异无统计学意义，但较治疗前有下降趋势并接近于正常水平，由此推测精神分裂症患者本身存在一个miR-195表达的异常，经抗精神病药物治疗后，miR-195调控靶基因，与BDNF、GABA、谷氨酸等相互作用，影响蛋白的表达，自身受反馈调节，表达量发生变化。

目前关于miR-195与精神分裂症发病机制的研究相对较少，综合各研究，miR-195可能与精神分裂症有关的基因网络关系密切，互相影响，参与到精神分裂症的发病过程，但对预测疾病转归及预后有待进一步明确。

参考文献：

[1] Perkins DO,Jeffries CD,Jarskog LF,et al.microRNA expression in the prefrontal cortex of individuals with schizophrenia and schizoaffective disorder[J].Genome Biol,2007,8(2):R27.

[2] Sun XY,Zhang J,Niu W,et al.A preliminary analysis of microRNA as potential clinical biomarker for schizophrenia[J].Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet,2015,168b(3):170-178.

[3] 王昉,梅蕊,彭樊,等.miRNA-195在小鼠早发精神分裂症发病机制中的作用[J].中国老年学杂志,2017,37(14):3411-3412.

[4] 孙欣羊.精神分裂症特异性生物标记物microRNA的临床初步验证[D].上海:第二军医大学,2014.

[5] 宋红涛,过伟,孙欣羊,等.精神分裂症患者血浆miRNA表达水平与精神症状的关系研究[J].解放军医学杂志,2014,39(5):388-391.

[6] Guo AY,Sun JC,Jia PL,et al.A novel microRNA and transcription factor mediated regulatory network in schizophrenia[J].BMC Syst Biol,2010,4(1):10.

[7] Mellios N,Huang HS,Baker SP,et al.Molecular determinants of dysregulated GABAergic gene expression in the prefrontal cortex of subjects with schizophrenia[J].Biol Psychiatry,2009,65(12):1006-1014.

[8] Santarelli DM,Liu B,Duncan CE,et al.Gene-microRNA interactions associated with antipsychotic mechanisms and the metabolic side effects of olanzapine[J].Psychopharmacology (Berl),2013,227(1):67-78.