胰腺癌是一种恶性程度高、进展快、预后极差的恶性肿瘤，其5年生存率不足5%-7%［1-3］。目前胰腺癌的发病机制尚不明确，一般认为与癌基因（如K-ras）的激活及抑癌基因（如CDKN2A、P53、DPC4等）的失活有关［4］。SATB-1是一种核基质结合区结合蛋白，通过修饰重构高级染色质结构调控基因组表达［4］。SATB-1在多种恶性肿瘤的生长、转移中发挥重要作用［6-8］，但在胰腺癌的研究中仍不明确。α-SMA是肌成纤维细胞的标志蛋白，在肿瘤研究中，常被作为肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）的标志［9］。本研究通过免疫组化法检测71例胰腺癌中SATB-1和α-SMA的表达，并分析两者的表达与胰腺癌患者临床病理特征的联系，探讨其对胰腺癌患者预后的影响。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集2014年6月至2016年5月期间中山大学孙逸仙纪念医院肝胆胰外科收治的71例手术患者的胰腺癌石蜡包埋组织块，所有患者均未接受术前新辅助化放疗、免疫治疗等辅助治疗，术后病理均证实为胰腺导管腺癌。本研究经中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会审核并批准实施，且术前均已获得患者的书面知情同意书。所有病例由专人随访至2017年12月。

国内绝大多数高校场馆管理组织机构设置混乱，岗位人员结构层次不齐，职责定位模糊，内部管理和外部市场开发普遍缺乏人才，对外经营多指派一至两名工作人员简单负责场地收费和安全管理，经营效率低下，已难以适应场馆长期发展要求。可行的路径是根据实际需求科学设置场馆管理部门，明确部门规章制度和岗位工作职责，按部门需求招纳核心人才(尤其是急需的市场开发专业人才)，以整体提高场馆业务水平。实施“走出去，引进来”策略，积极开展员工内部培训和校外交流，盘活存量人力资源，有条件的高校可以赴国外高校场馆参观学习，汲取并借鉴国外体育场馆先进的管理理念，提高场馆的综合服务水平以反哺学校和公共体育事业。

1.2 主要试剂

兔抗人SATB-1单克隆抗体（1∶100，ab109122，Abcam公司），兔抗人α-SMA多克隆抗体（1∶100，ab5694，Abcam公司），辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG标记二抗及DAB显色试剂盒来自Polymer双染检测试剂盒（DS-0005，中杉金桥公司）。

1.3 实验方法及结果判定

1.3.1 实验方法 免疫组化具体步骤参照Polymer双染检测试剂盒说明书。大致如下：石蜡切片经烤片、二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化后，置入pH 9.0 EDTA-Tris抗原修复液于微波炉中中高火处理15 min，冷却至室温后PBS冲洗3次；滴加3%H2O2溶液中阻断内源性过氧化酶活性15 min；PBS冲洗后滴加山羊血清封闭30 min，甩去封闭液滴加稀释后的一抗于4℃过夜；复温至37℃后PBS冲洗3次，孵育二抗30 min；PBS冲洗后，滴加DAB显色，并于显微镜下观察，及时终止反应；苏木素复染细胞核，冲洗，晾干，脱水、透明，封片。

对71例胰腺癌患者随访资料进行Kaplan-Meier生存曲线分析提示，SATB-1阴性的胰腺癌患者中位总生存期（mOS）为24.0±4.6个月，其1年、2年生存率分别为83.3%、49.4%；而SATB-1阳性的胰腺癌患者中位总生存期（mOS）为12.0±1.1个月，其1年、2年生存率分别为42.6%、4.5%（P＜0.001，图2）。α-SMA阴性的胰腺癌患者中位总生存期（mOS）为24.0±6.0个月，其1年、2年生存率分别为81.3%、37.5%；而α-SMA阳性的胰腺癌患者中位总生存期（mOS）为12.0±1.2个月，其1年、2年生存率分别为49.1%、12.6%（P＜0.01）。

1.4 统计学分析

我们进一步分析了SATB-1和α-SMA的表达与71例胰腺癌患者的临床病理特征的关系，如表1所示。结果显示，SATB-1的表达与胰腺癌患者的TNM分期和淋巴结转移有关（P＜0.05），而与胰腺癌患者的性别、年龄、分化程度和T分期无关（P＞0.05）。α-SMA的表达与胰腺癌患者的分化程度、淋巴结转移有关（P＜0.05），而与胰腺癌患者的性别、年龄、T分期和TNM分期无关（P＞0.05）。

2 结果

2.1 SATB-1和α-SMA在胰腺癌中表达

胰腺癌是一种富含基质的硬癌，瘤内含有大量的CAFs［10］。CAFs可以通过旁分泌SDF-1、TGF-β、IL-6等细胞因子促进胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、维持干性和化疗耐药等［10，11］。本研究中，我们通过免疫组化染色检测了71例胰腺导管腺癌组织中SATB-1和α-SMA（CAFs的标志物）表达情况，并分析二者与胰腺癌患者的临床病理特征的联系，发现胰腺癌患者的组织中SATB-1和α-SMA的阳性表达率分别为70.4%和77.5%，二者与胰腺癌患者总体预后明显相关，同时，SATB-1可作为判断胰腺癌患者预后的独立因素。

(1)LVQ神经网络可以很好地实现对地下水源热泵系统EER等级划分的预测，并能清楚地计算该系统的节能等级，对以后系统在节能方面的完善奠定了一定的基础。

2.2 SATB-1和α-SMA的表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系

  

图1 免疫组化染色 a-dSATB-1染色，200×；e-hα-SMA染色，200×

本研究的临床和实验数据使用SPSS 23.0软件进行统计分析，使用Graphpad primer 7.0软件绘制生存曲线。相关性分析采用卡方检验；生存分析采用Kaplan-Meier和Log Rank法检验；单因素、多因素分析采用Cox回归模型进行检验。统计学意义：*，P＜0.05；**，P＜0.01；***，P＜0.001。

 

表1 SATB-1和SDF-1在胰腺导管腺癌中的表达与临床病理特征的联系（n=71）

  

a Chi-square test，*P＜0.05，**P＜0.01bAmericanJointCommitteeonCancer（AJCC），患者均根据第7版AJCC肿瘤TNM分期的标准进行分期。

 

临床因素总例数性别例数71 SATB-1表达阴性21阳性50 P值α-SMA表达阴性16阳性55 P值a男 女44 27 14 10 30 170.65236 190.262年龄＜60岁≥60岁分化程度低分化中分化高分化T分期T1 T2 T3 T4 TNM分期（AJCC）b 27 44 9 15 18 290.948 8 8 5 1 22 110.526 14 40 17 2 13 12 270.067 14 320.002**0 9 5 9 0 4 1 8 0 5 3 0.157 1 0 8 8 0 3 1 9 0 6 4 0.095ⅠⅡⅢⅣ4 8 5 3 5 8 1 4 1 6 7 1 2 1 1 8 3 2 8 22 9 17 8 0.031*15 9 0.090淋巴结转移无 有29 42 4 5 1 1 7 7 12 350.000***3 0 2 7 7 0 1 0 6 19 360.045*

2.3 SATB-1和α-SMA的表达与胰腺癌患者生存期的关系

1.3.2 结果判定 采用半定量方法随机选取5个高倍视野，以阳性细胞数量及阳性染色深浅进行判断。阳性细胞数量：阳性比≤10%为0分，11%～25为1分，26%～50%为2分，＞51%分为3分。阳性染色深浅：阴性为0分，弱阳性为1分，阳性为2分，强阳性为3分。将两项评分相乘为该病例的免疫组化评分，评分≥2为阳性表达，否则为阴性表达。由两位经过病理科训练的观察者双盲阅片、独立评分，评分不一致时再次评估。

Cox回归模型单因素分析提示，分化程度、T分期、TNM分期、淋巴结转移、SATB-1表达、α-SMA表达等因素影响胰腺癌患者的预后（P＜0.05，表2），性别和年龄不影响胰腺癌患者预后（P＞0.05）。将单因素分析有统计学意义的所有因素纳入Cox回归模型，多因素分析结果提示，分化程度和SATB-1表达为影响胰腺癌患者预后的独立因素（P＜0.05）。

2.4 胰腺癌预后的单因素和多因素分析

@大木：这么明显地放出涨价信号是给同行听的，同行的选择是跟涨，但是不涨那么多。过两年对家多涨，这边少涨，倒霉的是消费者，看似聪明，其实被轰来轰去。

2.5 SATB-1和α-SMA在胰腺癌中表达的相关性

SATB-1是一种核基质结合区结合蛋白［12］。SATB-1通过与非配对碱基区中富AT的DNA序列结合，改变核基质基因位点从而重构高级染色质结构［13］，从而调节基因组表达［12］。越来越多证据表明SATB-1在多种肿瘤的细胞增殖、转移中发挥重要作用［14-16］，并与卵巢癌、胆管癌、皮肤黑色素瘤等多种肿瘤的预后差有关［6，17-19］。本研究中，SATB-1的表达与胰腺癌患者预后有关（P＜0.05），SATB-1阳性与阴性表达者的中位生存期分别为12.0±1.1个月和24.0±4.6个月，Log Rank检验P＜0.05。为了验证SATB-1的作用，更多的体外实验如细胞增殖、细胞周期、transwell等实验应实施，进一步验证此结论。

  

图2 SATB-1与α-SMA的表达与胰腺癌患者的生存曲线分析（n=71）

 

表2 胰腺癌患者总生存期的单因素和多因素分析（n=71）

  

缩写:HR=hazard ratio;95%CI=95%置信区间;ref=reference，参照.Cox回归分析,方法:Enter,*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001.

 

变量性别因素男（ref）女＜ 60岁（ref）≥60岁低分化（ref）中分化高分化T2（ref）T3 T4Ⅰ（ref）单因素分析HR 0.916 95%CI 0.711-1.180 P值0.498多因素分析HR 95%CI P值年龄0.9080.708-1.1640.446分化程度0.192 0.375 0.088-0.420 0.196-0.715 0.205 0.337 0.082-0.515 0.152-0.744 T分期1.324 14.976 0.642-2.732 4.878-45.980 0.675 2.846 0.210-2.166 0.499-16.242 TNM分期ⅡⅢⅣ淋巴结转移1.744 3.277 25.146 2.486 0.667-4.563 1.173-9.151 7.057-89.606 1.453-4.253 0.000***0.000 0.003 0.000***0.447 0.000 0.000***0.257 0.024 0.000 0.001**2.329 3.241 7.076 1.645 0.535-10.138 0.763-13758 1.014-49.390 0.824-3.282 0.003**0.001 0.007 0.095 0.509 0.239 0.182 0.260 0.111 0.048 0.158 SATB-1表达0.2850.158-0.5170.000***0.4230.201-0.8880.023*α-SMA表达无（ref）有阴性阳性（ref）阴性阳性（ref）0.4020.213-0.7600.005**0.8910.437-1.8190.752

3 讨论

通过免疫组化检测了71例胰腺癌组织中SATB-1和α-SMA的表达，结果显示胰腺癌组织SATB-1的阳性表达率为70.4%（50/71），α-SMA阳性表达率为77.5%（55/71）。SATB-1和α-SMA在胰腺癌中的表达见图1。

 

表3 胰腺癌中SATB-1与α-SMA的关系

  

α-SMA阴性阳性合计SATB-1阴性10 14 24阳性6 41 47合计16 55 71

根据统计结果，α-SMA阴性的患者阳性表达SATB-1的比例为37.5%（6/16），而α-SMA阳性的患者阳性表达SATB-1的比例为74.5%（41/55）。采用卡方检验分析SATB-1和α-SMA在胰腺癌中表达的相关性，结果提示SATB-1的表达与α-SMA表达明显相关（χ2，P=0.006）。

其中，f和g分别表示参考子区和变形子区中某点(x,y,z)的灰度值；和代表参考子区和变形子区的平均灰度值;M是子区在x和y方向的半宽;N是子区在z方向的半宽。

CAFs是胰腺癌中含量最丰富的细胞类型，可分泌胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ型和透明质酸等物质构成复杂的肿瘤外基质。大量研究发现，CAFs可促进多种恶性肿瘤的发生、发展，对肿瘤演进起促进作用［20-22］。我们通过检测CAFs的标记物α-SMA在胰腺癌中表达情况，发现其与胰腺癌预后明显相关。而在口腔癌、结直肠癌和乳腺癌中，α-SMA的表达同样与预后相关［23-25］。

我们发现SATB-1与α-SMA之间的表达存在明显的相关关系，在SATB-1阳性患者中α-SMA表达更高，同样在α-SMA阳性患者中SATB-1的表达更高。Gong，J等发现，在慢性肝炎中SATB-1上调可促进肝星形细胞分泌CTGF、IL-6和PDGF等促进其活化［23-25］。在本课题组尚未发表的研究中发现，胰腺癌细胞PANC-1与CAFs共培养后，芯片测序发现SATB-1可上调4.8倍。这些数据提示了CAFs与SATB-1之间存在一定的相互促进的环路机制，也可以解释本研究中SATB-1与α-SMA表达的相关性，当然还需要更多的实验进一步验证。

1986年，我到文化馆工作，经常到市属各区（相当于乡镇）的文化站做辅导培训工作。我从法者116道班徒步到新田公社，我看到许多山头都被砍伐得光秃秃的。

本研究通过免疫组化检测胰腺癌组织中SATB-1、α-SMA的表达，证实了两者在胰腺癌中高表达，且SATB-1可以作为判断胰腺癌预后的独立因素。这对临床评估胰腺癌患者的病情和预后有一定的指导意义。而且进一步研究SATB-1和α-SMA之间的关系在胰腺癌发生发展中发挥的作用，有重要的研究意义。

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