胆汁淤积是多种原因引起一组疾病共同的临床症状，可由多种致病因素引起，临床症状为黄疸、皮肤瘙痒、大便色白、肝功能异常等[1]。该病是儿童期肝脏疾病住院的首位原因，其发病率在出生婴儿为1/2 500-1/5 000[2]。过高的胆汁酸可引起肝细胞膜破坏，引起肝细胞凋亡及炎性细胞浸润，进而造成肝组织损伤，最终发展为肝炎或者肝硬化。垂盆草苷为从中药垂盆草中分离的活性成分[3]，已被证实有多种生物活性，包括保肝降脂、免疫抑制等[4]，但对肝内胆汁淤积造成的肝损伤是否有保护作用未见报道。本研究通过观察垂盆草苷对肝内胆汁淤积幼龄大鼠血清生化指标水平和肝脏中髓过氧化物酶的影响，评价垂盆草苷的作用，为临床治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1材料

维生素B1缺乏时，细胞呼吸障碍，ATP合成减少，能量供应不足，心肌弛缓，引起心功能不全或心力衰竭，骨骼肌紧张性减退，甚至萎缩。

1.1.1 实验动物及分组 雄性3周龄SD大鼠60只，体重80～100 g，由河南省实验动物中心提供。

1.1.2 试剂 垂盆草苷购自武汉天植生物技术有限公司；熊去氧胆酸片购自山西云鹏制药有限公司；α-荼基异硫氰酸盐(ANIT)购自美国Sigma 公司；丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)及髓过氧化物酶(MPO)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.2.3 肝组织中Na+，K+-ATP酶的活性测定 取血后分离大鼠肝脏，称取大鼠肝脏加生理盐水制备肝匀浆，比色法测定肝组织中Na+，K+-ATP酶的活性。

1.2.4 统计学处理 采用SPSS 17.0对结果进行统计分析，数据以均数±标准差(±s)表示，多组间比较采用ANOVA分析，组间两两比较用LSD检验，P<0.05为有统计学意义。

1.2.2 生化指标测定 末次给药后2 h，大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉,腹主动脉取血，离心分离血清，微板法检测血清中ALT、AST、ALP的活性和TBIL的含量。

1.2.1 模型制备 60只大鼠随机分为正常组、ANIT组、熊去氧胆酸阳性对照组、垂盆草苷高、中、低剂量组，每组大鼠10只除空白对照组外，其余各组大鼠均按80 mg/kg灌胃ANIT溶液制备大鼠肝内胆汁淤积模型[5]，并于造模当日开始灌胃相应药物，空白对照组(蒸馏水)、ANIT组(蒸馏水)、熊去氧胆酸阳性对照组(熊去氧胆酸，50mg/kg)和垂盆草苷高、中、低剂量组(60、30、15 mg/kg)，每天1 次，连续7 d。

(3)水权确权为水权交易提供了前提，建立了一种倒逼机制。水权确权不只是为了交易，确权本身就建立了一种倒逼机制，对转变发展方式、调整产业结构、促进节约用水、规范水事秩序，提高水资源利用效率效益具有至关重要的作用。水权也为实行基本水价、超定额累进加价、节水奖补等水价制度建设提供了基本依据。庆安县柳河灌区开展水权确权登记工作，以推动农业水价综合改革为核心，以完善末级渠系工程为基础，以健全终端水价制度为保证，在核心试点区初步建立起科学、系统、完备的农田水利良性运行机制，抢抓进度、全力全速推进水权试点。

1.2实验方法

2 结果

2.1垂盆草苷对大鼠血清生化指标的影响 与空白对照组比较，ANIT组大鼠血清中各项生化指标水平明显升高。与ANIT组比较，熊去氧胆酸阳性对照组、垂盆草苷高、中、低剂量组大鼠血清ALT、AST、ALP活性降低，TBIL含量减少(P<0.05，P<0.01)。垂盆草苷各剂量组大鼠血清中各项生化指标水平高于熊去氧胆酸阳性对照组，且垂盆草苷各剂量组大鼠血清中生化指标水平随着垂盆草苷剂量的增加而减少，呈现剂量依赖关系。各组大鼠血清中生化指标测定结果见表1。

2.2垂盆草苷对大鼠肝脏MPO的影响 与ANIT组比较，熊去氧胆酸阳性对照组、垂盆草苷高、中、低剂量组大鼠肝脏中MPO活性降低(P<0.05，P<0.01)。垂盆草苷各剂量组大鼠肝脏中各MPO活性高于熊去氧胆酸阳性对照组，随着垂盆草苷剂量的增加大鼠肝脏中MPO活性降低。结果见表2。

 

表1 垂盆草苷对大鼠血清中ALT、AST、ALP和TBIL影响

  

组别ALT(U/L)AST(U/L)ALP(U/L)TBIL(μmol/L)正常对照组73．39±7．12158．62±12．60119．37±9．241．21±0．20 ANIT组161．30±14．86283．84±22．29226．55±20．235．68±1．12 阳性对照组78．69±7．63∗∗161．27±14．02∗∗123．98±11．16∗∗1．35±0．24∗∗ 垂盆草苷低剂量组136．61±13．20231．55±18．68∗183．05±17．27∗3．29±0．67∗∗ 垂盆草苷中剂量组101．37±10．68∗190．07±16．82∗∗152．26±14．82∗∗1．93±0．43∗∗ 垂盆草苷高剂量组84．67±8．82∗∗172．85±13．99∗∗130．10±12．33∗∗1．42±0．26∗∗

注：与ANIT组比较，*P<0.05，**P<0.01

心电图测量指标如下:① 室早时，右胸导联(V3R、V4R、V5R)R波振幅；② 室早时，右胸导联S波振幅；③ 右胸导联R波振幅比率，即右胸导联R波振幅(mV)与(R+S)波振幅(mV)的比值。

 

表2 垂盆草苷对大鼠Na+，K+-ATP酶活性的影响

  

组别Na+，K+⁃ATP酶(U/mgprot)正常对照组3．93±0．51 ANIT组9．39±1．15 阳性对照组4．16±0．62∗∗ 垂盆草苷低剂量组7．01±0．91∗ 垂盆草苷中剂量组5．69±0．73∗∗ 垂盆草苷高剂量组4．51±0．61∗

注：与ANIT组比较，*P<0.05，**P<0.01

3 讨论

肝内胆汁淤积是指由于肝细胞及毛细胆管胆汁分泌功能障碍或肝内胆小管弥散性梗阻引起一系列的病理和临床表现。患者主要症状为黄疸、瘙痒、尿色深、粪色变浅、肝功能异常及肝脏病理学改变等[6]。其发生发生机制尚不完全清楚，诱因较为复杂，包括遗传性、感染性、药物性、酒精、自身免疫性、妊娠、手术后等，若不能有效治疗，将会进展为肝纤维化、肝硬化甚至肝功能衰竭，因此此病受到消化内科、儿科、妇产科的多方关注。

α-荼基异硫氰酸盐是公认的急性胆汁淤积模型诱导剂，其诱导的胆汁淤积模型在病理上主要表现为肝实质细胞和胆管上皮细胞损伤，造成胆管阻塞引起胆汁淤积，与胆汁淤积症临床症状的相似性较一致[7]。近年来，以中性粒细胞为主的炎性细胞浸润在胆汁淤积所致的肝损伤中的作用日益受到重视。采用中性粒细胞的活化和浸润受到抑制后，胆汁酸对中性粒细胞的诱导作用可被明显抑制，进而改善胆汁淤积性肝损伤。MPO主要存在于中性粒细胞等髓系细胞中，外界刺激可导致中性粒细胞聚集，释放MPO[8]。本实验表明在胆汁淤积的肝脏中，MPO活性升高。

本文用Radfrac模块在表1的模拟条件下，考察了乙二醇、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、糠醛和环丁砜4种萃取剂对异丙醇-环己烷体系的分离效果，模拟结果见表2。

本研究结果显示，ANIT组大鼠血清中ALT、AST、ALP活性升高，血清中TBIL增加，肝组织中MPO活性增加。垂盆草苷可显著改善幼龄大鼠胆汁淤积造成的肝脏损伤、保护肝脏功能，降低ALT、AST、ALP、MPO的活性和TBIL含量，并且高剂量垂盆草苷的作用与阳性药物熊去氧胆酸相近。本实验结果表明垂盆草苷对肝内胆淤积造成的幼龄大鼠肝功能损伤具有改善作用，由于样本较少，只是初步观察结果，其作用的具体机制有待进一步研究。

4 参考文献

[1] 李晓玲,孙凤霞,王晓静,等.复方茵丹汤对大鼠急性肝内胆汁淤积的干预作用[J].中国中西医结合消化杂志,2014,22(9):497-500.

[2] Diniz G,Tosun Yildirim H,Calkavur S,et al.Canneonatalhepatitisbemorefatalthan biliary atresia [J].Fetal Pediatr Pathol,2015,34(3):162-168.

[3] 潘金火,何满堂,罗兰.垂盆草药材质量控制方法研究[J].成都中医药大学学报,2002,25(1):44-45.

[4] 赖荣胜,潘金火.垂盆草苷的含量测定与药理研究[J].中医药学刊,2003,21(8):1306-1307.

[5] Chen Z,Ma X,Zhu Y,et al.Paeoniflorin ameliorates ANIT-induced cholestasis by activating Nrf2 through an PI3K/Akt-dependent pathway in rats[J].Phytother Res,2015,29(11):1768-1775.

[6] 韩平,田德安.肝内胆汁淤积发病机制及药物治疗新进展[J].胃肠病学和肝病学杂志,2016,25(5):584-588.

[7] 欧巧群,钱新华,黄笑群,等.ANIT诱导大鼠亚急性肝内胆汁淤积的生化和病理变化[J].胃肠病学和肝病学杂志,2015,24(4):463-465.

[8] 罗敏,谭桢,宋丹军,等.过氧化物酶体增殖物激活受体α在肝脏代谢性疾病和肝毒性中的研究进展[J].中西医结合肝病杂志,2016,26(2):124-127.