0 引言

汉麻（Cannbis sativa L.Hemp）也称为工业大麻、火麻，是指四氢大麻酚含量低于0.3%的大麻类型，是大麻科大麻属一年生草本植物[1]。汉麻的根、茎、叶和籽都可以开发利用，产业涉及纺织、食品、医药、建材等领域[2]。

机载双基雷达构型难以枚举，图1给出了任意几何构型下机载双基雷达的几何模型[2,17-18]。为简化问题，假设发射、接收载机平台在与地面平行的平面运动，且发射、接收天线均为正侧面放置(从杂波抑制的角度讲，侧视线阵是一种较优的天线配置方式[2])，在实际情况中这些条件是容易满足的。

汉麻籽具有很高的营养价值，汉麻籽中蛋白质含量较高，含量为20%～25%，经脱脂的汉麻籽粕蛋白质含量达50%以上。汉麻蛋白质中含有21种氨基酸，其中包括人体所需的8种氨基酸。汉麻蛋白的65%为麻仁球蛋白，麻仁球蛋白对促进消化有很好的作用，另外35%为白蛋白，也是一种优质蛋白[3]。2002年，卫生部将火麻仁（汉麻籽仁）列为“既是食品又是药品”的目录，为汉麻籽的食品级应用敞开了大门。多肽是蛋白质酶解过程的中间产物。研究表明，多肽无论从理化特性、营养特性都显著优于蛋白，多肽具有良好的溶解性、耐酸、热稳定性、黏度低等理化性质；比蛋白质更易吸收，同时具有抗氧化、降血压、降血脂、降血糖、提高免疫力等多种功效[4]。目前，采用酶法制备汉麻籽多肽技术已经成熟[5]，但关于汉麻籽多肽急性毒性方面的研究还未见报道，为确保其食用的安全性，对汉麻籽多肽粉的急性毒性进行了研究，以期为汉麻籽多肽在食品、药品等领域开发应用提供科学依据。

2.3.3 屋顶绿化的分布情况 徐州市区二环路内花园式屋顶绿化主要集中在市中心商业区,另外，北面、南面各有1处,盆栽植物种植分布没有规律可循,主要集中在居住建筑,基本上是零星散布．

1 材料和仪器

1.1 仪器

MOL-300型全自动生化分析仪，上海力申科学仪器有限公司产品；FA1104N型电子天平，上海民桥精密科学仪器有限公司产品；DHG-9070A型鼓风干燥箱，上海飞跃实验仪器有限公司产品；BIOQ-MU1000型切向超滤系统，汇和堂生物工程设备公司产品；VFD-6000型真空冷冻干燥机，北京博医康实验仪器有限公司产品；Master-DUF型超纯水机，上海和泰仪器有限公司产品；GL10M大型离心机，湖南湘立科学仪器有限公司产品。

1.2 汉麻籽多肽粉

以脱脂的汉麻籽粕为原料，采用木瓜蛋白酶与中性蛋白酶复配水解的方法，通过正交试验优化双酶水解的酶解条件，提高蛋白的水解度。

1.3 试验动物

SPF级KM小白鼠，体重18～22 g，雌雄各半，由哈尔滨医科大学实验动物学部提供，动物合格证号为SCXK（黑） 2013-001。

1.4 试验条件

汉麻籽多肽粉小鼠经口急性毒性试验体重变化结果见表2。

2 试验方法

2.1 汉麻籽多肽制备

汉麻籽多肽粉由黑龙江省科学院大庆分院研制。汉麻籽多肽粉样品为乳白色粉末状，无特殊气味。放置-20℃冰箱中保存，试验时以蒸馏水制成所需浓度的混悬液。

2.2 汉麻籽蛋白酶解液的分离纯化及冷冻干燥

制备汉麻籽蛋白酶解液经灭酶，再以转速6 000 r/min离心15 min，收集上清液。采用离心及超滤系统，利用5 000 Da的超滤膜包，截留分子量为5 000 Da以下的多肽液，进一步纯化汉麻籽多肽。将5 000 Da以下多肽液放入真空冷冻干燥机中，进行冷冻干燥制备汉麻籽冻干粉，将汉麻籽多肽粉放置于-20℃冰箱中保存备用。

2.3 汉麻籽多肽粉急性毒性试验

依据中华人民共和国国家标准《食品安全国家标准经口急性毒性试验》 （GB 15193.3—2014）。根据预试验结果，正式试验采用限量法进行试验。健康昆明种小鼠雄、雌各10只，试验前禁食4～6 h，自由饮用清洁水。精确称取受试样品20 000 mg加蒸馏水定容至40 mL成均匀悬液，每只小鼠按20 mL/kg·bw体积于12 h内经口灌胃2次上述样品的混悬液（此为最大使用浓度和最大灌胃体积，2次灌胃间隔时间为6 h），2次总剂量达20 000 mg/kg·bw，末次灌胃1～2 h后喂饲饲料和水。对给予受试物的小鼠进行连续观察14 d。记录小鼠试验时的初始体重、7 d时体重及14 d时体重；观察并记录小鼠的中毒症状和死亡结果，对濒死的小鼠和试验结束时存活小鼠进行主要器官大体病理学检查，如发现有可疑病变时进一步做病理组织学检查。疑病变时进一步做病理组织学检查。

体育老师在具体的动作示范过程中，要让学生直观地看清自己的每一个示范动作，因此老师要根据动作的展示方向变换不同的示范方位，比如正面示范法、背向示范法、侧向示范法等，以此增强老师示范的成效，学生也能充分了解所学动作的构成和要领。

3 结果分析

3.1 木瓜蛋白酶与中性蛋白酶复配酶解条件的优化

将汉麻籽蛋白酶解液经转速6 000 r/min离心15 min，收集上清液。通过切向流超滤系统，截留分子量5000Da以下的小分子肽。超滤系统的压力在0.8～1.0 Bar，流速0.93 r/min。将分子量5 000 Da以下和5 000 Da以上的多肽液放入真空冷冻干燥机中分别进行低温冷冻干燥，制备汉麻籽多肽冻干粉。结果表明，分子量5 000 Da以下小分子肽占多肽总量的90%以上。

木瓜蛋白酶、中性蛋白酶复配酶解正交试验结果见表1，9个处理对多肽得率的影响见图1。

 

表1 木瓜蛋白酶、中性蛋白酶复配酶解正交试验结果

  

D中性蛋白酶酶添加量/%2.0 2.5 3.0 3.0 2.0 2.5 2.5 3.0 2.0 19.27 19.75 19.91 R 5.04 7.84 2.55 0.64最优水平 A1 B3 C2 D3主次顺序 B＞A＞C＞D试验号 A pH值B酶解温度θ/℃水解度DH/%1 2 3 4 5 6 7 8 9 5 5 5 6 6 6 7 7 7 50 60 70 50 60 70 50 60 70 17.29 23.13 26.63 17.40 17.87 22.54 13.59 15.71 22.64 K1 K2 K3 22.35 19.27 17.31 16.09 18.90 23.93 C木瓜蛋白酶酶添加量/%0.2 0.4 0.6 0.4 0.6 0.2 0.6 0.2 0.4 18.51 21.06 19.36

  

图1 9个处理对多肽得率的影响

试验依据中华人民共和国国家标准《食品安全国家标准经口急性毒性试验》 （GB 15193.3—2014），采用限量法对每只小鼠按20 mL/kg·bw体积于12 h内经口灌胃2次上述汉麻籽多肽粉的混悬液，2次总剂量达20 000 mg/kg·bw，末次灌胃1～2 h后喂饲饲料和水。对受试小鼠行为、体重、死亡情况进行连续14 d观察，14 d后对受试小鼠进行大体病理学观察。

3.2 多肽的分离纯化及冷冻干燥

在木瓜蛋白酶、中性蛋白酶酶解条件单因素试验的基础上，采用2种酶复配酶解汉麻籽蛋白的方法，以水解度为指标，采用L9（34）正交试验对pH值、酶解温度、酶添加量进行优化，料液比1∶5，酶解时间3 h，筛选中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复配的最佳酶解条件。

3.3.3 小鼠死亡情况

3.3 汉麻籽多肽粉急性毒性试验

由表1和图1可知，以处理3的水解度、多肽得率较高，分别为22.63%，82.64%。从极差的分析结果可以看出，影响汉麻蛋白水解度的因素主次关系为B＞A＞C＞D，温度对水解度的影响最大，其次是pH值。双酶复配酶解的最佳条件组合为A1B3C2D3，即酶解温度70℃，pH值5.0，木瓜蛋白酶添加量0.4%，中性蛋白酶添加量3.0%。经试验验证，该工艺条件下的DH为27.23%，多肽得率85.64%。

3.3.1 小鼠的行为

在14 d的观察期内，小鼠活动、反应正常，进食、大小便正常，未见腹泻、呼吸困难、流血、流鼻涕等异常现象。

3.3.2 小鼠体重变化

实验室温度24±2℃，湿度50%±5%。每只塑料小鼠笼放养5只小鼠，提供符合要求的基础饲料和清洁水供动物自由摄食、饮用。

 

表2 汉麻籽多肽粉小鼠经口急性毒性试验体重变化结果

  

14 d体重/g小鼠（♂）小鼠（♀）种鼠性别 动物数/只染毒剂量/mg·（kg·bw）-1初始体重/g 7 d体重/g 10 10 20 000 20 000 20.18±1.27 20.27±0.87 30.05±2.12 26.51±1.06 38.31±2.02 30.56±1.68

由表2的试验结果可以看出，在灌胃剂量为20 000 mg/kg·bw，通过对小鼠的初始体重、7 d时体重、14 d时体重的记录。结果表明，灌胃雌、雄小鼠均未出现拒食现象，体重均正常增长。

教师在日常的教学过程中应时时关注小学生学习的动态，并适时地予以引导，使其感受到教师的关心，进而让其更加努力地学习。除此之外，教师要对差生要多一点耐心，从而让其从内心深处转变对数学的看法，进而喜欢数学，从而提高整体教学的有效性。

马铃薯封垄后，植株生长稳定期开始，每隔10d喷施1次保护性杀菌剂——百菌清75%可湿性粉剂600～800倍液。在田间发现早疫病症状时及时喷施治疗性杀菌剂80%代森锰锌可湿性粉剂800倍液或64%杀毒矾可湿性粉剂500倍液，每7d喷1次，共喷3次。

结合客家人在历史上迁移后多定居山区的情况和梅县区具体地形地貌，坡度划分采用城市建设划分标准，将土地类型分为地平地、平地、平坡地、缓坡地、中坡地、陡坡地，坡度范围为≤0.3°、0.3°～2°、2°～5°、5°～10°、10°～25°、>25°(上含下不含)[8]。结合灯光指数数据(图2)和梅县区各镇的客家人口密度数据，采集样本点对人口分布与坡度二者的关系进行分析。灯光指数DN值小于6的区域为人口密度小或者是无人居住的区域，不符合样本采集的标准。我们选取DN值大于或等于6的区域确定为样本采集区域。选取的样本点蕴含着客家人口密度和坡度信息。

对给予灌胃剂量20 000 mg/kg·bw的雌、雄各10只小鼠，进行14 d的观察，20只小鼠全部存活，未发现死亡小鼠。

汉麻籽多肽粉小鼠经口急性毒性试验结果见表3。

1）进行参数化设计，新型技术需要满足设计师对建筑信息的需求，BIM技术中应用到的软件可以将观察到的对象信息设计成整体的结构状态；

3.3.4 病理学检查

 

表3 汉麻籽多肽粉小鼠经口急性毒性试验结果

  

LD50/mg·（kg·bw）-1小鼠（♂）小鼠（♀）种鼠性别 动物数/只染毒剂量/mg·（kg·bw）-1死亡动物数/只10 10 20 000 20 000 0 0＞20 000＞20 000

试验结束后，对受试小鼠的主要器官进行大体病理学检查，主要对小鼠的心脏、肝脏、脾、肾、胃等器官进行病理学检查，未见脏器异常改变。解剖小鼠的心脏、肝脏、肾脏、脾、胃等器官的形状、大小、表面黏膜附着情况均正常，无病理病变。

综上，小鼠经口灌胃受试物后，连续观察14 d未见任何中毒症状和表现，亦无死亡发生；对所有存活动物进行大体病理学观察，未见脏器异常改变。

4 结论

结果表明，对受试小鼠进行连续14d的观察，未见任何中毒症状和表现，亦无死亡发生；对小鼠进行大体病理学观察，未见脏器异常改变。根据中华人民共和国国家标准《食品安全国家标准经口急性毒性试验》 （GB 15193.3—2014） 附录G急性毒性（LD50）剂量分级表及试验结果，受试样品汉麻籽多肽粉对雌、雄小鼠经口LD50均大于20 000 mg/kg·bw，属实际无毒物质，证明酶法制备的汉麻籽多肽具有良好的食用安全性。研究为汉麻籽多肽在食品、医药等领域的开发应用提供了依据。

参考文献：

[1]关凤芝.大麻遗传育种与栽培技术 [M].哈尔滨：黑龙江人民出版社，2010：153-160.

[2]许树文，刘华．工业大麻的开发利用及其市场前景 [J].纺织导报，2005，27（7）：62-64．

[3]何锦凤，张琨，陈天鹏.汉麻籽的营养成分和功能 [J].食品科技，2007（6）：258-259.

[4]孔令明，李芳，陶永霞，等.多肽的功能活性与研究进展 [J].中国食品添加剂，2009（3）：71-72.

[5]宋淑敏，魏连会，董艳，等.复合酶法制备汉麻籽多肽的工艺研究 [J].农产品加工，2016（10）：22-24.◇