乙型肝炎病毒(HBV)不仅能引起急慢性感染，亦是肝硬化和肝癌的重要致病因子。HBsAg是病毒HBV在肝细胞内首先表达的产物，也是人体感染病毒HBV后首先出现的血清标志物，因此对HBsAg高效、准确的检测对乙肝的诊断、治疗和预后具有重要的意义[1]。临床上，ELISA在检测HBsAg时因其敏感度高、特异性强及适合定性试验的大样本筛查等优点而被广泛应用，但是实际上在用此方法检测HBsAg时常常会出现假阳性、假阴性及重复性不好的现象[2]。标本溶血、脂血以及黄疸等外源性因素均会对ELISA实验结果产生干扰，其中最常见的是标本溶血，抽血不当或者某些生理病理性因素导致溶血标本的形成属于分析前质量控制的环节，是检验实验室难以控制的[3]，故明确溶血对ELISA检测HBsAg的影响是非常迫切的。有很多学者对此进行了大量研究，但在以溶血液为自变量时未考虑到人为地稀释了HBsAg浓度和非彻底溶血时血细胞对ELISA测定HBsAg的影响[1]，未遵循单变量原则。基于此，现对阴性标本(0 IU/mL)和弱阳性“灰区”标本(0.2～1.0 IU/mL)及强阳性标本(>250 IU/mL)做如下探究。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集川北医学院附属医院检验科免疫室血液标本(无黄疸、脂血、溶血)65例:由CMIA测得HBsAg为(0 IU/mL)的阴性标本和(0.2～1.0 IU/mL)的弱阳性“灰区”标本及(>250 IU/mL)的强阳性标本各20例,另收HBsAg阴性血液标本5例。

1.2 仪器与试剂

全自动模块式血液体液分析系统(希森美康株式会社)，安图酶标仪(郑州安图实验仪器有限公司)，EGATE 2310全自动微孔洗板涤机，北京万泰提供的HBsAg诊断试剂盒，Haier超低温保存箱，XH-B型漩涡混合器，雅培i2000 SR。

（二）提升教师素养。“师者，所以传道授业解惑也”是为人熟知的，教书育人、答疑解惑是教师的天职。为了更好的发挥教师在传统文化素养培育中的重要作用，就为教师提出了跟高的要求。高中生的大部分时间是在学校与老师共同度过的，由于高中生本身的特点因素，他们是很容易受到教师言行举止、行为习惯影响的。

1.3 方法

(1)将5例阴性血液标本放入-80 ℃冰箱中2 h后放在37 ℃恒温箱中孵育30 min，并于低速离心机离心后用震荡仪摇匀，反复以上冻融离心震荡操作直至完全溶血即在全自动模块式血液体液分析系统上测得红细胞数、白细胞数都为0/L。(2)取每例强阳性、弱阳性及阴性标本各100 L 分别加入干燥试管中，再分别加100 L溶血液混匀，此为溶血组。(3)另取每例标本100 L，分别加入100 L生理盐水制成稀释对照组。(4)将原未溶血标本组、溶血组及稀释对照组进行配对依次分组检测，每步操作均严格按照试剂说明书的要求。

1.4 统计学分析

在所有阴性、弱阳性“灰区”和强阳性标本中，溶血对ELISA检测HBsAg的Sen、Spe、PPV、NPV及诊断效率等指标均为负干扰，如表2。具体地：溶血使ELISA检测阴性标本的Spe及诊断效率下降，如表3；ELISA对弱阳性“灰区”标本的诊断效率下降，且溶血使ELISA检测弱阳性“灰区”标本的Sen下降，如表4；溶血对ELISA检测强阳性标本的诊断指标无明显影响，如表5。

2 结果

2.1 标本溶血前后的结果分析

总之，在临床工作中应该避免溶血标本进入实验室，且应按照《全国临床检验操作规程》规范日常操作，但若有不可避免因素须接收溶血标本时则应明确溶血对ELISA检测HBsAg的影响，可通过做校正实验，具体为：在溶血样本实验过程中，对其设置两个孔，一个孔为溶血样本孔，在这个孔中加入终止液、显色剂、底物液以及溶血血清和酶结合物；另一个孔为实验孔，在这个孔中加入终止液、显色剂、底物液以及溶血血清，不加入酶结合物[10]，结果显示校正后的的诊断指标均得到提高，故可对溶血标本设置校正孔以提高临床检验报告的准确率。总的来说，ELISA法对HBsAg的检测在非溶血的状态下各项诊断指标都很好，可在临床上大批量使用，但若为溶血标本应具体情况具体分析，探索出适合自己实验室对溶血标本的校正方法，才能让所出的检验报告具备正确性和说服力。

2.2 溶血前后的ELISA检测HBsAg的诊断指标分析

采用SPSS 20.0统计软件包分析，运用配对设计t检验。

分析实验数据可知：20例阴性标本中加溶血液后出现40%假阳性率的现象，分析原因可能是溶血后红细胞破裂释放出血红蛋白(Hb)，Hb有与辣根过氧化物酶类似的活性[4]，Hb的非特异性吸附及与包被物非特异性结合可以使产物颜色加深影响结果判断[5]，另外细胞内的血红素对酶显色比浊有正干扰。而弱阳性“灰区”标本溶血后ELISA检测HBsAg的诊断效率为55%，检出假阴性率为45%，且在该次研究中当弱阳性标本的HBsAg浓度≤0.38 IU/mL时均出现假阴性，可能是因为在固相免疫测定ELISA中，特异性吸附在固相表面的抗原或抗体的空间构象可能由于折叠或功能性结合部位朝向固相等因素而发生改变，导致抗原或抗体的活性受影响，抗原和抗体的利用效率因此变低，而且由于弱阳性标本本身HBsAg含量低并且不稳定的性质就可造成弱阳性标本组因溶血干扰后测定为阴性。

表1 溶血组与稀释组的配对t检验结果

组别n溶血组与稀释组OD值差值均数(d-)差值标准差(Sd-)t值P值阴性组200.0810.018.10<0.05弱阳性组20-0.0680.028-2.43<0.05强阳性组200.2050.0673.06<0.05

表2 ELISA实验检测所有标本溶血组前后诊断效能结果对比

指标SenSpePPVNPV诊断效率溶血前100%100%100%100%100%溶血后76%60%79%57%72%

表3 ELISA实验检测阴性组溶血前后诊断效能结果对比

指标SenSpePPVNPV诊断效率溶血前0100%0100%100%溶血后060%0100%60%

表4 ELISA实验检测弱阳性“灰区”组溶血前后诊断效能结果对比

指标SenSpePPVNPV诊断效率溶血前100%0100%0100%溶血后55%0100%055%

表5 ELISA实验检测强阳性“灰区”组溶血前后诊断效能结果对比

指标SenSpePPVNPV诊断效率溶血前100%0100%0100%溶血后100%0100%0100%

3 讨论

在临床检验测定中常遇到溶血的标本，而溶血会对检验结果产生假阳性或假阴性的影响。为明确溶血对ELISA检测HBsAg的影响，在本次试验中以与溶血液同等量的生理盐水模拟其所造成的对HBsAg的稀释干扰，且对血液完全溶血以排除血细胞的干扰，则溶血前后结果不同全由细胞释放的内容物造成。在ELISA定性实验中，“阴性”和“阳性”间有一个明确分界点，即“阳性判断值(cut-off值)”。而在本次实验所用的北京万泰试剂盒的结果判断中的临界值(CUTOFF，简称CO)计算：临界值=阴性对照孔A均值NC×2.1(阴性对照孔低于0.05者按0.05计算)。而cut-off值是在一定的可信度上建立的，只能尽量减少假阳性和假阴性的发生，不能完全避免。

机器人辅助的腹腔镜前列腺癌根治手术因采用极端的头低脚高体位，肺顺应性明显降低[27]。此时采用压力控制模式替代容量控制模式，或在容量控制模式下延长吸呼比(如采用1∶1的吸呼比)，可降低气道峰压、改善肺顺应性，但未改善氧合，对其他结局的影响尚不清楚[31-32]。

据上得出，溶血对ELISA检测HBsAg有一定影响，其程度大小还与试剂盒、检测人员和采集的标本、加样过程、药物等有关[6]。因此分析前质量保证是临床实验室质量保证体系中最重要、最关键的环节之一，是确保检验信息正确、有效的先决条件[7]。在日常体检、血液中心和血站对供血者健康检查中HBsAg的结果是否准确有至关重要的意义:若真阴性HBsAg标本被测为假阳性而丢弃，造成血液资源的浪费；再者，若真阳性HBsAg未准确检出，HBV可通过血液和体液传播感染医护人员(HCW),尽管乙肝是可用疫苗预防性疾病，但在HCW日常操作中也应引起重视和广泛防范[8]，故对溶血标本应做特殊处理避免假阴性标本对人群的伤害。由于弱反应性标本自身特异性及免疫检测方法的某些缺陷，造成免疫检测HBsAg的复杂性，故应选择敏感性高的检测方法以提高检出率，如用ELISA的双抗体夹心法定量测定HBsAg：可用系列浓度抗体或抗原的标准品制备标准曲线(即剂量反应曲线，以抗原标准溶液为横坐标，OD值为纵坐标)，根据待测标本的OD值可通过标准曲线获得其浓度或单位，还有方法如TRFIA[9]、分子生物学方法检测HBV DNA核酸如实时荧光定量分析法等。

史书记载，高以永勤于政事，宽以待人，生活上严于律己、清苦过人。一生任州县官十一年，从未携家人至任所。离任时，随身携带的也只有几件衣服和几本书。在任户部江西司员外郎时，他深知“江南财赋半天下”，工作繁重、责任重大，为防止奸吏作弊，高以永夜以继日地查核文书簿籍，以至积劳成疾，病逝于任所。死后没有留下任何属于他自己的财产，连灵柩也无力运回，靠亲戚朋友资助才得以归葬。

在HBsAg阴性、弱阳性“灰区”、强阳性各20例标本中，溶血组与稀释组的OD值结果相比均有统计学意义(P<0.05)，即溶血对HBsAg三组标本都有影响，如表1。在20例阴性标本中溶血后出现假阳性率为40%(8∶20)；20例弱阳性“灰区”标本溶血后检出假阴性率为45%(9∶20)，且在该次研究中当弱阳性标本HBsAg的浓度≤0.38 IU/mL时均出现假阴性。

参考文献

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[2] 许斌,朱虎定.ELISA检测HBsAg影响因素的探讨[J].临床检验杂志,2000,18(4):232.

[3] 黄芳,王碧玉.ELISA试验结果抗溶血干扰的临床应用研究[J].国际检验医学杂志,2013,34(20):2725-2727.

[4] 陆仁飞.溶血标本对乙型肝炎病毒表面抗原检测结果的影响[J].检验医学与临床,2008,5(17):1065.

[5] 夏丽娜.溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原影响的分析[J].中国伤残医学,2013,(11):307-308.

[6] 王芳.临床检验标本采集输送验收规范操作体系的建立[J].检验医学与临床,2012,9(6):763-764.

[7] 陈金图.ELISA检测乙肝两对半的影响因素[J].大家健康(学术版),2014,(21):64.

[8] Alese OO,Alese MO,Ohunakin A,et al.Seroprevalence of Hepatitis B Surface Antigen and Occupational Risk Factors Among Health Care Workers in Ekiti State,Nigeria[J].Journal of Clinical and Diagnostic Research JCDR,2016,10(2):LC16.

[9] 胥国强,蒲泽宴,康清秀，等.TRFIA法和ELISA法在HBsAg检测中的方法学评价[J].医学检验与临床,2013,24(1):31-32,71.

[10] 赵艺杰.溶血对ELISA检测HBsAg的实验诊断效能指标的影响及对策[J].中国药物经济学,2015,10(S2):60-62.