建昌帮不仅是中国南方地区的古药帮之一，而且也是全国中药炮制的主要流派之一，发祥于江西南城，因擅长中药饮片加工而闻名。建昌帮具有“工具辅料独特，工艺取法烹饪，讲究形色气味，毒性低疗效高”的炮制风格，其精湛的制药技术在赣闽地区广为流传[1]。炆法是建昌帮炮制十三法(炒、炙、煨、煅、蒸、煮、炆、熬、淬、霜、曲、芽、复制)中独特的一种炮制方法[2]。远志为临床常用安神药，常用治失眠、健忘等。生远志因能“戟人咽喉”，故临床常用其炮制品，历代远志的炮制方法主要有去心、甘草汁煮、蜜炙、酒蒸等[3]。建昌帮远志的炮制方法是将甘草与远志共同放入药罐中加水炆制，远志经炆制后不仅可消除“戟人咽喉”的副作用，而且可增强其益智安神之功[4]。传统远志炆制法仅依靠老药工的经验操作，凭性状控制质量，没有实现质量指标的量化，难以有效控制质量。故本文以醇浸出物、细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ、3，6’-二芥子酰基蔗糖含量作为评价指标，采用正交试验法对炆远志的炮制工艺进行优选，为规范建昌帮炆远志炮制工艺提供技术参数。

1 仪器及试药

1.1 仪器 ULtimate 3000型高效液相色谱仪(赛默飞世尔科技有限公司)；KQ-500E 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；SZ-93型自动双重纯水蒸馏器(上海雅荣生化仪器设备有限公司)；HH-6型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)；SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)；YFL-1112型二两装高速中药粉碎机(浙江瑞安市永历制药机械有限公司)；GZX-9070 MBE型数显鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；SQP型万分级电子分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)。

当下，我国电视媒体与新媒体的融合路径还处于初级的探索阶段，其中的探索仍然停留在单一的传统媒体传播平台上，融合发展还存在很多问题。

1.2 试药 对照品细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ和3，6’-二芥子酰基蔗糖均购自四川省维克奇生物科技有限公司，纯度均大于98%，批号依次为140312、140421、140522，纯度均大于98%。远志药材购自樟树市药材市场，经江西中医药大学中药资源学科组赖学文教授鉴定为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd.的干燥根皮。甲醇(西陇化工股份有限公司，色谱纯)，磷酸、甲醇、正丁醇(西陇化工股份有限公司，分析纯)，双蒸水为实验室自制。

地西泮(Diazepam纯度99.4%)、甲硝唑(Metronidazole，MNZ纯度99.9%)、地美硝唑(Dimetridazole，DMZ纯度99.9%)、洛硝哒唑(Ronidazole纯度99%)、羟甲基甲硝咪唑(HMMNI纯度99%)和羟基甲硝唑(MNZOH纯度99.4%)。

2 方法与结果

2.2.6 稳定性试验 按照“2.2.3项”方法，取炆远志样品1g，制备供试品溶液。精密吸取上述密封、室温保存的供试品溶液，分别于0, 2, 4, 8, 16, 24h进样，每次20μL，依法进行HPLC分析，测定其峰面积，并计算细叶远志皂苷的RSD值为1.80%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.2 细叶远志皂苷含量测定

2.2.1 色谱条件[5] 采用Platisil ODS(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱，以甲醇-0.05%磷酸溶液(70∶30)作为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长210nm，柱温30℃，进样量20μL。理论塔板数按细叶远志皂苷峰计算不低于3000。色谱图见图1，含量结果见表1。

2.2.2 对照品溶液的制备 取适量细叶远志皂苷对照品，精密称定，加入甲醇制成1.6180mg/mL的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取炆远志粉末(过三号筛)约1g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入70%的甲醇50mL，称定重量，超声1h，冷却后，再次称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25mL，蒸干，残渣加入10%的氢氧化钠溶液50mL，水浴回流2h，冷却后，用盐酸调节pH值4～5，再用水饱和的正丁醇萃取3次(每次50mL)，合并正丁醇溶液，回收溶剂至干，残渣加入甲醇适量使溶解，转移至25mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得。

“老林，今天的会议怎么没看到你？会务通知你参加——什么？你爱人去世了？哎呀，这事你怎么不早说啊？——怪我，现在才给你电话——别这么说，我们是什么关系？老林，你节哀啊，我马上过来——对了，老人家千万不要告诉，九十多岁了，恐怕承受不住打击。对对，行行，我马上过来，等我来再说。你挺住啊。”

  

1.细叶远志皂苷

图1 对照品(A)及样品(炆远志)(B)色谱图

2.2.7 重复性试验 取炆远志样品粉末6份，每份各约1g，按“2.2.3项”方法制备供试品溶液，精密吸取各供试品溶液20μL，进行HPLC分析，测定按细叶远志皂苷含量计算RSD值为1.93%，结果表明本方法重现性良好。

2.3.1 色谱条件[5] 采用Platisil ODS(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，以乙腈-0.05%磷酸溶液(19∶81)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长320nm，柱温30℃，进样量20μL。HPLC图见图2，含量结果见表1。理论塔板数按3，6’二芥子酰基蔗糖峰计算不低于3000，分离度大于1.5。

张满春自然是不会再留在沈家了，小小嫁人了，那里只有一段伤心的往事。夜里，他睡在床上想着小小，忆念起那广袤的田野来，他就想，自己要是有田有地你沈老七还能这样对我么？张满春从走出沈家大院的那一天起，就下决心，一定要设法把沈老七整垮，让他也尝尝当穷人的滋味。

2.2.5 精密度试验 按“2.2.3项”的方法，取炆远志样品制备1份供试品溶液，连续精密进样6次，每次20μL，依法进行HPLC分析，测定峰面积，计算RSD值为1.54%。结果表明，精密度良好。

2.1 炆远志的制备 取远志肉切制成1.5cm的远志段。取定量的生甘草，切制成斜片。将300g远志段和相应量的甘草拌匀，放入炆药坛内，加入相应量的清水，盖好坛盖，放置围灶内，坛底两边以砖架起，用足量的干糠堆满坛四周，点火后炆制相应的时间，起坛倒出，拣去甘草段，晒至全干[1]。

2.2.4 线性关系考察 精密量取2.2.2项下的细叶远志皂苷对照品溶液，稀释配制浓度为0.0809，0.1618，0.2427，0.4045，0.5663，0.8090 mg/mL的标准溶液。分别进样3次，各进样20μL，按“2.2.1项”条件测定。以峰面积(Y)作为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，得细叶远志皂苷的回归方程为：Y=89.285X+0.3269，r=0.9999，结果表明，细叶远志皂苷进药量与峰面积平均值的线性关系良好，线性范围为1.618～16.18μg。

Penfolds白葡萄酒家族在全球市场所受关注度逐年提升，Penfolds酿酒团队的匠心独具更是使新年份的白葡萄酒焕出新生。精选BINA霞多丽已发展成为一款独具特色的单一产区葡萄酒，富有现代风格与阿德莱德山区霞多丽的特征。

2.2.8 加样回收试验 取已知含量的炆远志样品粉末6份，每份各0.5g，精密加一定量的细叶远志皂苷对照品，按“2.2.3项”方法制得供试品溶液，测定细叶远志皂苷含量，计算回收率为99.19%，RSD值为0.99%。

2.3.3 供试品溶液的制备 取炆远志粉末(过三号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，称定重量，加热回流1.5h，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。

由表12可以看出随着浴比的减小，棉条表观深度K/S值增加，在浴比1：10棉条得色最深，但是染色不匀。这是由于浴比减小，上染率越大，棉条得色越深，但浴比过小，容易染色不匀。所以宜选择浴比1：15，以获得良好的染色深度。

  

1.远志酮Ⅲ ;2. 3，6’-二芥子酰基蔗糖

图2 对照品(A)及炆远志(B)色谱图

2.3.2 对照品溶液的制备 取远志酮Ⅲ对照品、3，6’二芥子酰基蔗糖对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含远志酮Ⅲ 0.88mg、含3，6’二芥子酰基蔗糖1.08mg的混合溶液，即得。

2.3 远志酮Ⅲ、3，6’二芥子酰基蔗糖含量测定

2.3.4 线性关系考察 精密吸取2.3.2项下混合溶液0.5，1.0，1.5，2.5，3.5，5.0 mL，用甲醇定容于10 mL量瓶中，分别进样3次，每次20μL，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得远志酮Ⅲ的回归方程Y=555.3X+0.413，R=0.9998；3，6’二芥子酰基蔗糖的回归方程Y=717.77X+2.1487 ，r=0.9999，且远志酮Ⅲ进样量在0.88～8.80μg、3，6’二芥子酰基蔗糖进样浓度在1.08～10.80μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.5 精密度试验 精密吸取远志酮Ⅲ、3，6’二芥子酰基蔗糖对照品溶液20μL，连续进样6次，测定峰面积，得远志酮Ⅲ的RSD值为2.57%(n=6)，3，6’二芥子酰基蔗糖的RSD值为1.96%(n=6)。结果表明仪器精密度良好。

2.3.6 稳定性试验 按照“2.3.3”方法，取炆远志1g，制备供试品溶液，密封、室温保存，并分别于0，2，4，8，16，24h进样，测定其峰面积，并计算远志酮Ⅲ 、 3，6’二芥子酰基蔗糖的RSD值分别为2.12%、2.05%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.3.7 重复性试验 取炆远志粉末6份，每份各约1g，按“2.3.3”方法制备供试品溶液，按“2.3.1”测定含量，并计算远志酮Ⅲ的RSD值为1.99%(n=6)，3，6’二芥子酰基蔗糖的RSD值为1.74%(n=6)，结果表明本方法重复性良好。

2.3.8 加样回收试验 取已知远志酮Ⅲ 、 3，6’二芥子酰基蔗糖含量的炆远志样品粉末6份，每份各0.5g，精密加一定量的远志酮Ⅲ和3，6’二芥子酰基蔗糖混合对照品，按“2.3.3”方法制得供试品溶液，按照“2.3.1”方法测定含量，计算平均回收率分别为99.63%、99.81%，RSD分别为1.92%、1.12%。

2.4 炆远志的正交试验及方差分析 根据炆远志工艺流程，按照L9(34)的正交设计表进行试验，得炆远志饮片。按表1试验安排，测定细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ 、 3，6’二芥子酰基蔗糖含量，采用2015年版《中国药典》第四部通则2201项下浸出物测定方法中醇溶性浸出物测定方法测定醇浸膏得率，并进行综合加权评分。由于细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ、3，6’-二芥子酰基蔗糖是2015版《中国药典》评价远志质量的指标，故在正交试验结果的总体评价中，均给予权重系数0.3；醇浸膏得率为辅，给予权重系数0.1，以综合值进行统计分析，综合评分值M=(0.1a/36.48+0.3b/3.97+0.3c/0.51+0.3d/0.54)×100。实验操作安排及结果见表1，方差分析见表2。

直观分析表明，根据极差R的大小，可以判断各因素对试验结果的影响主次，由表1可以看出R2>R1> R3，所以因素对试验指标影响的主次顺序为B >A>C，即加水量影响最大，其次为加生甘草量和炆制时间。表2方差分析结果表明，B(加水量)对试验结果存在显著性影响(P<0.05)，A(加甘草量)、C(炆制时间)对试验结果无显著性影响(P>0.05)。同时比较F值大小可以得出因素对试验结果影响的主次顺序为B>A>C，与直观分析结果相同。综合以上分析，确定以A1B1C1为最适宜的提取工艺，即每炆制300g远志加甘草量15g，3倍量水，炆制5h。

一致性理论是基于局部信息交换的分布式模式,利用一致性算法,通过更新信息状态,各微电源的等效虚拟阻抗值会逐渐收敛于相同值。该算法不但能够提高控制效果,还能提高收敛速度,其流程如图4所示。

2.5 验证实验 为保证工艺的重复性和可行性，对优选的方案A1B1C1进行验证试验，结果见表3。结果显示，该工艺稳定可行，重现性好。

在同一个属性条件下，第k个方案和第i个方案之间的排序关系可由决策矩阵中元素的大小关系来表示。ak等价于ai⟺rkj=rij;ak优于ai⟺rkj>rij;ak劣于ai⟺rkj

3 讨论

(1)炆远志为江西建昌帮的特色炮制品种[6]，2015版《中国药典》未收载，在2008版《江西中药饮片炮制规范》虽有炆远志的炮制品种，但没有记载细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖的含量测定方法及浸出物等质量控制指标[3]。本文以采用HPLC法对炆远志中细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖等远志中重要的药效成分进行了方法学考察及含量测定，在远志酮Ⅲ、3，6’二芥子酰基蔗糖含量测定试验中发现乙腈-0.05%磷酸溶液(18∶82)为流动相[5]时效果不及乙腈-0.05%磷酸溶液(19∶81)，故选用乙腈-0.05%磷酸溶液(19∶81)为流动相。

 

表1 炆远志工艺正交试验安排及结果分析表(n=3)

  

编号因素A生甘草量/gB加水量/倍C炆制时间/h醇浸出物/%细叶远志皂苷/%远志酮Ⅲ/%3，6’-二芥子酰基蔗糖/%总评分/M11(15)1(3)1(5)35．643．530．510．5497．3121(15)2(4)2(6)34．941．130．290．5062．7931(15)3(5)3(7)33．520．740．270．4857．5342(19)1(3)2(6)35．363．970．260．5384．5552(19)2(4)3(7)34．761．500．160．5158．7262(19)3(5)1(5)33．301．230．150．4954．5873(23)1(3)3(7)34．603．570．270．5381．4983(23)2(4)1(5)30．251．330．180．5257．3693(23)3(5)2(6)36．481．710．150．5159．68K172．5487．7869．75K265．9559．6269．01K366．1757．2665．91R6．5930．523．84

 

表2 方差分析

  

方差来源离均差平方和自由度均方F值PA84．058242．0291．378>0．05B1730．0262865．01328．363<0．05C24．841212．4210．407>0．05误差60．997230．498

F0.05(2，2)=19。

 

表3 验证试验

  

编号醇浸物得率/%细叶远志皂苷含量/%远志酮含量/%3，6’-而芥子酰基蔗糖含量/%评分RSD/%135．553．560．500．5497．75235．643．670．480．5396．971．48336．233．650．520．5499．84

(2)本试验运用多指标综合加权法，以醇浸物量，细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖含量为考察指标，质量控制指标选定注重与《中国药典》2015版的一致性。最终确定的炮制工艺为炆制300g远志加甘草15g，3倍量水，炆制5个h，经3批验证试验，表明此工艺可行，为建昌帮传统炮制技术炆法的规范化研究奠定了基础，同时为地方炮制特色品种炆远志的质量控制提供参考。

(3)远志化学成分主要包括皂苷类、酮类和糖酯类成分。其中细叶远志皂苷是远志总皂苷类碱水解的共同产物[7]，是远志的主要活性成分之一，具有改善雌性小鼠抑郁的作用[8]；远志酮Ⅲ具有抗抑郁及对CYP2E1酶有显著抑制作用[9]，3，6’-二芥子酰基蔗糖具有抗抑郁活性及增强5-羟色胺和去甲肾上腺素的作用[13]，这三种成分为2015年版《中国药典》中远志含量测定的指标成分，以此为考察指标在一定的程度上可反映其内在质量，故本文采用以上三种成分及醇浸物为工艺的考察指标对炆远志炮制工艺进行优选，所优选工艺的炆远志与其他炮制品的差异，本课题组将进一步从药效及指纹图谱等方面进行研究。

参考文献

[1]易炳学,钟凌云,龚千锋.江西建昌帮炆法特色炮制及其现代研究思路[J].时珍国医国药,2012,23(7):1 755-1 756.

[2]张金莲,曾昭君,潘旭兰,等.砻糠在建昌帮中药炮制中的应用[J].中草药,2013,44(21):3 092-3 094.

[3]梁晓,张学兰,李慧芬,等.甘草汁蒸制远志对远志皂苷B和细叶远志皂苷含有量的影响[J].中成药,2015,37(4):824-827.

[4]江西省食品药品监督管理局.江西省中药饮片炮制规范[S].上海:上海科学技术出版社,2008.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部[S].北京：中国医药科技出版社,2015.

[6]颜冬梅,李娜,张金莲,等. 江西传统炮制技术的研究进展[J].中药材,2016,39(2):447-450.

[7]孙于杰,王莹,侯林,等.超声法提取远志中细叶远志皂苷的工艺优选[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(2):53-55.

[8]林虓.制远志中细叶远志皂苷的提取分离及其对雌性小鼠抑郁症的作用研究[D].哈尔滨：黑龙江中医药大学,2015.

[9]李照亮,董宪喆,王东晓,等.远志寡糖酯类化合物及远志酮Ⅲ对CYP450酶的活性影响研究[J].中国中药杂志, 2014,39(22):4 459-4 463.