HPLC法测定柴芍安神解郁颗粒中芍药苷的含量*
柴芍安神解郁颗粒是我院经多年临床实践研制而成的中药复方制剂,由醋柴胡、白芍、石菖蒲、酸枣仁、法半夏、郁金等10味药组成,具有疏肝理气、化痰祛瘀、安神定志的功效。方中白芍,苦、酸,微寒,是该处方中的君药。文献报道,白芍具有广泛的药理作用[1-3],如镇痛、镇静、抗惊厥;抗心肌缺血、抗凝、抑制血小板聚集、改善血液流变学; 调节免疫力及抗高血糖等作用。另外,其水煎剂及醇提物还具有抗抑郁作用,芍药苷是其主要活性成分之一[4-5]。本研究参考了白芍药材及制剂中芍药苷含量测定方法的相关研究[6-10],通过本实验研究建立HPLC法测定柴芍安神解郁颗粒中芍药苷的含量,为该制剂的质量控制提供方法依据。
基于2017年河北省矿产资源开发利用基本情况与特点,对比全国矿产资源开发利用情况[5-8],对2017年河北省矿产资源开发利用情况总结如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器 1200系列高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);XS205 型电子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)。
1.2 试药 柴芍安神解郁颗粒样品3 批(规格: 每袋装8 g,批号:20170401、20170402、20170403,广东省第二中医院制剂室提供);芍药苷(批号:110736 -201539,中国食品药品检定研究院);乙腈(色谱纯,德国默克公司);水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。
3.2.2 水位变动适应性策略研究。 在坡面地势较陡以及对于坡面地形比较复杂的地段,由于长期的涌浪冲刷,土壤流失严重,大量岩石裸露在外,普通固土护坡技术在此难以发挥作用,便可采取一定的水位变动适应性策略尽可能在消落区域蓄水,为植被提供稳定的水环境,使植被能够更好地适应水位变动,在高水位和低水位时均能够保持正常生长。
2 方法与结果
2.6 稳定性试验 取同一批号样品(20170401) ,按照2.1项下色谱条件,分别在0,2,4,8,12,18h 依次进样,测定芍药苷峰面积。结果峰面积RSD为1.44%(n=6) ,表明供试品溶液在18h内稳定性良好。
2.2 溶液的制备
灶房好阔,四个灶台,蒸饭,贴饼子,炒菜,大灶台上坐着肉骨头汤锅。蒸汽朦胧里,小勺往汤锅续水,将剔下的猪骨、牛骨、羊骨、鸡骨,扔进锅里。小勺直起腰,看见何良诸,一笑,说:“来了。”
(2)加快客运码头建设,建成与杭州市国家级旅游城市地位相协调的特色客运码头。推动实施运河水陆交通、富阳鹿山、桐庐滩头、建德姚坞和城东等五个水上集散中心的建设,以及桐庐旅游码头及停靠点,建德风月轩、梅城七廊庙、乾潭、黄饶、岭后,淳安界首、石林、东北湖区旅游码头,临安青山湖、柳溪江等旅游客运码头的建设。
2.5 精密度试验 取对照品溶液,按照2.1项下色谱条件,连续进样6 次。计算峰面积RSD为0.95%,表明该方法精密度良好。
2.7 重复性试验 取同一批号样品( 20170401) 6份,精密称定,按供试品溶液的制备方法制备样品溶液,测定峰面积。其RSD值为1.89%,表明该方法验重复性良好。
2.3 专属性试验 取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10 μL注入液相色谱仪,记录HPLC色谱图,芍药苷色谱峰的保留时间约为15.123min,阴性对照在芍药苷色谱峰的位置处无干扰峰,且分离度达到要求,见图1。
图1 各测定溶液的HPLC谱图
A.对照品;B.供试品;C.缺白芍阴性对照;1.芍药苷
2.8 加样回收率试验 取供试品粉末约0.25 g ( 批号:20170401,芍药苷含量为6.714mg/g) ,精密称定,共6份,分别置于具塞锥形瓶中,精密一定量的对照品溶液,按供试品溶液制备法制备供试液,即得。进样10μL,记录峰面积,结果表明回收试验结果良好。见表1。
2.2.2 供试品溶液 取本品内容物,研细成粉末,取约0.5g,精密称定,置100mL锥形瓶中,加入甲醇50mL,精密称重,超声(功率250 W,频率40 kHz)处理30 min,取出,放冷,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.1 色谱条件 色谱柱:Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相∶乙腈-0.1%磷酸水溶液( 14 ∶86), 流速: 1.0 mL/min,柱温: 25 ℃,检测波长: 230 nm,进样量: 10 μL。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000,芍药苷与其它组分分离度符合要求。
3)在所设所选磁钢性能、漆包线规格、气隙长度等其他相关参数相同的情况下,以传统作圆求交点法所制梯形槽电枢齿部磁密高于理想梯形槽带电枢齿部磁密;在额定点,以传统法所制梯形槽电机效率比理想梯形槽电机效率低0.24%。
2.2.1 对照品溶液 取芍药苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成120.96 μg/mL的对照品溶液(贮备液)。
2.2.3 阴性样品溶液 精密称取不含白芍的阴性样品,按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液,即得。
2.4 线性关系试验 分别精密吸取1,2,4,6,8,10 mL芍药苷对照品贮备液(120.96 μg/mL)至10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,分别进样10μL,记录色谱图;得到峰面积(Y)与进样量(X)的关系为Y=1.4294X-36.7473,r=0.9999,表明芍药苷在0.12690~1.20960 μg 进样量范围内线性关系良好。
表1 加样回收率试验结果
序号取样量/g已知量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%均值/%RSD/%10.25671.7231.6403.35699.5420.25801.7321.6403.414102.5530.25251.6951.6403.32599.3740.25921.7401.6403.418102.3050.25411.7061.6403.33299.1460.25061.6831.6403.31399.42100.391.58
2.9 样品含量测定 取3批次样品,按“2.2.2”项下方法制备供试液,依法进行测定,结果见表2。
表2 样品含量测定结果(n=3)
批号芍药苷含量/mg·g-1RSD/%201704016.7180.14201704026.7400.57201704036.7560.72
3 讨论
3.1 检测波长的选择 参考2015版《中国药典》一部白芍项下芍药苷的含量测定方法,选择本实验的检测波长为230 nm[7]。
3.2 色谱分离条件的选择 实验中比较了两个流动相组合条件下芍药苷的出峰情况,
即乙腈-水(14∶86)和流动相乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86),结果后者分离效果好,且色谱峰形良好。并考察了20 ℃、25 ℃、30 ℃柱温下测定芍药苷成分的方法适应性,结果芍药苷色谱峰在20 ℃、25 ℃柱温下的保留时间重现性基本一致,当柱温为30℃时色谱峰保留时间相应地缩短,且色谱峰形较差,故选择25 ℃为作为检测柱温。
3.3 提取方法的确定 本实验考察了回流法及超声提取法2种提取方法制备供试液,结果两种方法制备的供试品色谱峰面积值无明显差异,为方便操作,选用超声提取法。实验中还考察了甲醇、50%甲醇、乙醇、稀乙醇等提取溶剂对提取效果的影响,结果采用甲醇提取得到的供试品溶液中芍药苷含量测得值均高于其他方法,因此选择甲醇为提取溶剂。还比较了超声15min,30min及45min的提取效率,结果30 min 和45 min的提取效率明显高于15 min,而30 min 和45 min之间无明显差异,故确定超声时间为30 min。
本实验采用HPLC法测定该制剂中的芍药苷的含量。经方法学考察,该方法分离度良好,重复性好,准确度高,简单易行,可用于柴芍安神解郁颗粒中芍药苷的含量测定,为该制剂质量标准的制定提供了实验依据。
为了促进节能减排,满足《乘用车企业平均燃料消耗量与新能源汽车积分并行管理办法》(简称双积分)文件的政策要求,很多车厂陆续推出了非插电式混合动力轿车。本文选择2018款广汽丰田凯美瑞、2016款广汽本田雅阁、2017款上汽通用君威等三款售价相近且有代表性的中级轿车,对其安装的非插电式混合动系统用发动机、高压电池、电控变速器以及工作模式等进行详细的技术比较。
参考文献
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