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葛根水煎剂和配方颗粒HPLC指纹图谱相关性研究

更新时间:2009-03-28

葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根,习称野根,具有解肌退热、生津止渴、透疹、升阳止泻、通经活络、解酒毒之功效,临床用于治疗泄泻等病症[1-4]。现代研究表明,葛根的主要活性成分为葛根素、大豆苷、大豆苷元等异黄酮类化合物,其中葛根素含量最高,大豆苷及大豆苷元含量很低[5],因此葛根素是评价葛根药材及其制剂质量的重要指标[6-9]

配方颗粒具有携带服用方便、疗效确切、起效迅速等优点,受到诸多医院及药店的青睐。葛根配方颗粒是以水为提取溶媒,用其饮片作为原料,经过2次提取(与传统汤剂的煎煮相似,煎煮2次)、药液浓缩、使用喷雾干燥技术(喷雾干燥是药液通过雾化器雾化后与热空气接触,瞬间将水分汽化蒸发除去而形成干粉)、干法制粒(通过挤压将粉末压成所需硬度的薄片,破碎后过筛得到合格颗粒的方法)等工序加工而成。这些工序中提取浓缩过程与传统汤剂煎煮相似,喷雾干燥过程中因只是瞬间的高温,因而对产品的影响较小,干法制粒对产品成分更无影响,且葛根素热稳定性较好,因此葛根配方颗粒与传统汤剂理论上具有一致性。葛根饮片经加工制成配方颗粒后,仅依据《中华人民共和国药典》对其指标成分进行含量测定是难以全面客观地进行评价的。以往的研究只是单独针对葛根药材或饮片或者其制剂,未能研究所制备的产品在其各成分上与传统汤剂的关联性。为了能更全面准确地反映传统汤剂与配方颗粒之间的关联性,本研究采用高效液相色谱法,分别建立葛根配方颗粒和葛根水煎剂的特征图谱,比较二者之间的差异,为临床应用提供有力的数据支撑。

1 主要仪器与材料

Agilent高效液相色谱仪,AE 240 电子分析天平(瑞士Mettler-Toledo 有限公司提供)。

葛根素对照品,批号为110752-201313,购自中国食品药品检定研究院;10批葛根饮片来源见表1(编号为A1—A10),均经河北省食品药品检验所孙宝惠老师鉴定为豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根;由编号为A1—A10葛根饮片制备的10 批葛根配方颗粒(编号为B1—B10)批号见表2;甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。

 

表1 10批葛根饮片来源表Tab.1 Summary of 10 batchs of radix puerariae decoction pieces

  

编号产地基源A1陕西丹凤Puerarialobata(Willd.)OhwiA2陕西丹凤Puerarialobata(Willd.)OhwiA3陕西商镇Puerarialobata(Willd.)OhwiA4陕西商镇Puerarialobata(Willd.)OhwiA5陕西商州Puerarialobata(Willd.)OhwiA6陕西商州Puerarialobata(Willd.)OhwiA7陕西商州Puerarialobata(Willd.)OhwiA8陕西柞水Puerarialobata(Willd.)OhwiA9陕西柞水Puerarialobata(Willd.)OhwiA10陕西柞水Puerarialobata(Willd.)Ohwi

 

表2 10批葛根配方颗粒汇总表Tab.2 Summary of 10 batchs of radix puerariae formula granules

  

编号批号B116061011B216061211B316062811B416062911B516063011B616080411B716080511B816080911B916081011B1016081111

2 实验方法

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液的配制

取葛根素对照品适量,精确称定,加甲醇制成1 mL含葛根素0.25 mg的溶液,即得对照品溶液。

2.1.2 葛根配方颗粒供试品的制备

LI Guohui, ZHANG Qingwen, WANG Yitao. Chemical constituents from roots of pueraria lobata[J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2010,35(23): 3156-3160.

台肇地区受储层渗透率低影响,注水井注入压力较高,普遍高于15 MPa,22 MPa以上的井占比40%以上,各个注配间柱塞泵的泵压为22.52~22.9 MPa,较高的泵压意味着较高的耗电量。

取10批葛根饮片100 g,一煎加入9倍水浸泡30 min煎煮20 min,二煎加入7倍水煎煮15 min。将提取液过滤浓缩干燥为膏粉,精密称取0.1 g,置于带塞的锥形瓶中,精确加入甲醇50 mL,称重,超声30 min,放冷,再称重,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,即得。

精确称取糊精0.1 g,置于带塞的锥形瓶中,精确加入甲醇50 mL,称重,超声(频率40 kHz,功率300 W)处理30 min,放冷,再称重,用甲醇补足减失的质量,摇匀,过滤,即得。

2.1.4 阴性对照溶液的制备

2.2 色谱条件[8-9]

色谱柱:华谱 XAqua C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相:以甲醇(A)和0.1%(体积分数,下同)的冰醋酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱条件见表3,流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm,柱温为25 ℃。

 

表3 梯度洗脱条件Tab.3 Elution conditions

  

时间/min流动相Aφ(甲醇)/%流动相Bφ(0.1%冰醋酸水溶液)/%01387133858174258306832311387411387

2.3 方法学考察[10-15]

2.3.1 系统适用性及专属性试验

分别取配制的对照品、配方颗粒供试品、水煎剂供试品和阴性样品进行检测,考察此方法的适用性及专属性。结果如图1所示。由图1可以看出,样品中各个峰分离情况及峰型都较好,并且阴性无干扰,表明该方法的专属性良好。

  

S1—阴性样品;S2—对照品;S3—水煎剂;S4—配方颗粒。图1 颗粒色谱图Fig.1 Characteristic of formula granules

2.3.2 精密度试验

The Review of BIM Technology in Tunnel&Underground’s Engineering Application and

按照2.1所述方法制备葛根配方颗粒供试品溶液,重复进样6次。结果发现,各主要特征峰的相对保留时间及相对峰面积的RSD值(n=6)为0.13%~0.96%,表明仪器的精密度良好。

2.3.3 稳定性试验

按照2.1所述方法制备葛根配方颗粒供试品溶液,分别于0,2,4,6,8,10 h时进样检测。结果发现,各主要指纹峰相对保留时间及相对峰面积的RSD值(n=6)为0.41%~1.23%,表明供试品溶液在10 h以内稳定。

1.重视导读的内容。我们的每个单元都有大单元的导读,学生可以了解整个单元的主题和学习要求。比如人教版小学语文六年级上册第五单元的导读,学生读了之后就很清楚地了解到这一单元主题是“走近鲁迅”,学习的是鲁迅先生写的文章或者是描写鲁迅先生的文章。

2.3.4 重复性试验

基于镁对于作物的重要作用以及镁肥市场需求,2016年9月,德国钾盐集团(K+S Group)与福建农林大学联合成立IMI国际镁营养研究所,由张福锁院士领导的国际镁营养研究所,以科技小院、全国镁协作网和全国养分管理协作网为依托进行镁肥的效果示范及其传播连接农业需求和肥料供应。同时,与国际上其他植物营养研究及化肥组织(如IAPN、IFA等)进行长期合作,致力于镁的科学研究和产业发展研究。

2.1.3 葛根水煎剂供试品溶液制备

3 结果与讨论

3.1 葛根水煎剂与配方颗粒指纹图谱测定

按照2.1所述方法制备对照品溶液、葛根配方颗粒、水煎剂及阴性供试品溶液,进样10 μL,以2.2所述的色谱条件进行测定,记录41 min以内的色谱图。参照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》建立HPLC指纹图谱,结果如图2、图3所示。可以看出,葛根水煎剂与配方颗粒的成分基本一致。

  

图2 10批葛根水煎剂的HPLC指纹图谱Fig.2 Fingerprint of 10 batches of radix puerariae water decoction

  

图3 10批葛根配方颗粒的HPLC指纹图谱Fig.3 Fingerprint of 10 batches of radix puerariae formula granules

3.2 参照峰的选择与共有指纹峰的标定

设定积分参数如下:斜率灵敏度为5,峰宽为0.02,积分起止时间8~41 min,最小峰的峰面积占总峰面积的比例大于1%。通过对比葛根配方颗粒和水煎剂的指纹图谱,选定共有的8个指纹峰作为共有峰。采用2008版指纹图谱相似度评价系统软件进行自动匹配,共有峰面积均大于色谱峰总面积的90%。通过与对照品图谱比较可知,在指纹图谱的8个共有峰中,峰3为葛根素。结果如表4所示。

会上,为了表彰老一辈科学家对我国农药行业所作出的卓越贡献,中国化工学会农药专业委员会特设立“农药学科特殊贡献奖”。原化工部沈阳化工研究院副总工程师、副院长及院党委委员李宗成,浙江工业大学教授、博士生导师徐振元荣获第一届“农药学科特殊贡献奖”。

 

表4 葛根水煎剂-配方颗粒HPLC指纹图谱分析结果Tab.4 Analysis results of HPLC fingerprint of water decoction-formula granules

  

峰号煎剂平均相对保留时间煎剂相对峰面积(均值±SD)颗粒平均相对保留时间颗粒相对峰面积(均值±SD)10.7160.062±0.0240.7170.058±0.00320.8290.124±0.0310.8290.157±0.0213(S)1.0001.0001.0001.00041.0430.272±0.0411.0430.272±0.00551.0710.221±0.0351.0700.223±0.01061.1680.161±0.0071.1680.199±0.01971.3700.028±0.0041.3690.042±0.00381.7110.044±0.0081.7110.053±0.003

3.3 葛根指纹图谱相似度计算

采用2008版指纹图谱相似度评价系统软件计算相似度,计算时以对照图谱为参照,计算各批产品的指纹图谱与对照图谱的相似度。结果见表5。10批配方颗粒和葛根水煎剂的相似度分别为0.994~0.999和0.984~0.998,表明葛根水煎剂及配方颗粒的质量控制较为稳定。所标定的葛根配方颗粒8个共有指纹峰均可在水煎剂指纹图谱中得到追踪,表明葛根配方颗粒与水煎剂在化学成分上具有一致性,为中药配方颗粒替代传统饮片的可行性以及临床研究提供了重要依据。本研究所建立的指纹图谱方法重复性、稳定性好,可用于生产过程的质量控制。

 

表5 葛根水煎剂及配方颗粒的相似度数据Tab.5 Similarity data of radix puerariae water decoction and formula granules

  

水煎剂编号相似度A10.998A20.992A30.988A40.993A50.991A60.988A70.995A80.984A90.997A100.987配方颗粒编号相似度B10.997B20.997B30.995B40.996B50.994B60.998B70.997B80.994B90.996B100.999

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LIANG Wenlin,XIE Dawen,DING Gang,et al. Quantitative and qualitative evaluation on tablets of ginkgo biloba leaves using fingerprint and LC-MS analysis[J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2015,40(9):1738-1743.

中药材体系复杂,通过HPLC法检测葛根不同极性成分,能更全面地反映葛根中的主要成分,准确反映传统汤剂与配方颗粒之间的关联性。本文共标示了葛根水煎剂、配方颗粒的8个主要特征峰,相似度均在0.98以上,说明葛根水煎剂、配方颗粒较稳定,且葛根水煎剂、葛根配方颗粒在化学成分上具有一致性,为配方颗粒临床替代传统饮片提供了数据支撑。

2)学生的英语水平能到了提升。音乐治疗专业学生的英语基础普遍较薄弱。教师在开课前经与学生访谈得知,大部分学生的英语高考分数较低,多数学生对大学英语课程有压力感,甚至对能否顺利通过期末考试存在担忧。在实施任务型教学模式后,学生接触和使用英语的时间增加了,信心也增强了,其英语基本技能得到了明显的提升。

本次研究建立的葛根配方颗粒高效液相指纹图谱分析方法的重复性好,分析全面,方法简便,能比较全面地反映葛根配方颗粒的质量,可作为内控质量标准。

本次研究从葛根配方颗粒与传统汤剂各成分的关联性为出发点,说明了葛根配方颗粒与传统汤剂在成分上具有一致性,但单独的方剂与经典的方剂合煎其疗效是否有等效性,需要做进一步的研究。

大坝上游坡于2011年6月随着库水降落出现纵向裂缝,裂缝距坝顶高差 2.3 m,长 68 m,至死水位时,滑坡体最大水平位移2.1 m,最大垂直位移1.05 m。

参考文献/References:

按照2.1所述方法制备葛根配方颗粒供试品溶液6份,依法测定。结果发现,各主要指纹峰相对保留时间及相对峰面积的RSD值(n=6)为0.41%~1.15%,表明该方法的重复性良好。

路桥施工技术与其质量控制是非常重要的,为减少公路桥梁维修成本打下坚实而有力的基础,对于行人的安全提供了重要保障,减少了桥梁断裂和路面崩塌这样的小概率危险性事件的发生,社会对于桥梁质量的高度认可,还可以增加其施工企业在这一行业的名气与信誉度[1]。

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其中≅表示为水文参数的概率分布在i和j流域是等效的。f(Ai,Aj)表示为尺度转换方程。在单元尺度中,尺度转换方程可以表述为式(2):

取葛根配方颗粒10批,研细,精确称取0.1 g,置于带塞的锥形瓶中,精确加入甲醇50 mL,称重,超声(频率40 kHz,功率300 W)处理30 min,放冷,再称重,用甲醇补足减失的质量,摇匀,过滤,即得。

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RUAN Yiming.Determination of puerarin content in Gegen formula particles by HPLC[J].Heilongjiang Medicine Journal, 2008, 21(5): 19-21.

目前,成本核算没有统一的方法,而且医院的成本核算工作相较于其他工作而言,本质就弱化了许多。医院不同于其他企业,在成本核算过程中,需对各科室实际的在岗人员数量进行校验、核定,从而确定财务物资的计价方法,准确划定财务物资的价值。同时,还要完善医院购进各项物资的原始记录,应制定清晰的物资分配标准,重点突出费用审批的过程和费用审批的权限。但从医院的实际工作情况来看,医院只是对成本进行了粗略的核算,其核算并没有针对性,且计算简单,不适用,没有有效反应出成本及需要解决的问题。

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本研究比较了甲醇-0.03%冰醋酸水溶液、甲醇-0.1%冰醋酸水溶液、甲醇-0.2%冰醋酸水溶液3种流动相的梯度洗脱效果。结果表明,以甲醇-0.1%冰醋酸水溶液进行梯度洗脱,峰形及分离度都较好。全波长扫描显示,在250 nm处有吸收峰,色谱图色谱峰数量较多,且峰形及分离度均较好。柱温分别选用25,30,35 ℃进行进样分析,结果显示,25 ℃的峰形及分离度较好。分别选用甲醇、30%甲醇、95%乙醇、水对葛根配方颗粒进行超声提取,结果显示,甲醇提取效率最高,色谱峰数量较多且面积较大。

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据报道,已有成都、青岛、大连和西安等城市确定了人口规模控制数量。北京和上海驱赶外地居民的行为,也扩散到了一些地区,据说太原也在以整治“背街小巷和老旧社区”为名,在强制关闭小商辅。因而上述分析所估计的损失,还只是局部损失,放在全国会大得多。

WANG Feifei,LI Yunjiang,YANG Wenchao,et al. Effects of compound puerarin tablet on the regeneration and apoptosis of liver cells in aged rats[J]. China Pharmac,2016,27(28):3942-3944.

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突出危险发展趋势是根据监测指标的变化情况,判断随着时间或空间的延续,工作面突出危险程度趋于升高还是趋于降低,比如随着工作面与地质构造距离的缩小,突出危险性逐步趋于严重、随着工作面进入保护层有效卸压区,突出危险性趋于降低或消除。由于发展趋势一般是属于宏观判识,参考其他领域的警度表示方式,将突出趋势预警等级划分为3级,分别用绿色、橙色和红色表示。

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张肖建,霍保军,李军山,姜国志,刘铁军,李振江
《河北工业科技》 2018年第03期
《河北工业科技》2018年第03期文献

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