栗蚕(Dictypoea japonica)是珍贵的野生泌丝昆虫资源[1]，广泛分布于日本及我国的东北、华北、西北和中南等地区。我们在研究栗蚕生物学特性及栗蚕种繁育时发现，栗蚕蛹在自然条件下发育历期40～90 d(个别年份更长),成虫羽化期长达40～60 d，羽化不集中，自然交尾率低[2-5]。日本专家(1991年)研究认为，阶梯温度下栗蚕蛹发育快于平温[6]，国内尚没有这方面的报道。本文采用黑暗、不同温度梯度和低温冷藏等技术手段对栗蚕蛹进行处理，以期为栗蚕种繁育提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

将测序所得到的16S rDNA全序列利用CExpress完成拼接，提交到Gene Bank数据库，并应用Blast软件进行同源性搜索，序列结果用NCBI在线工具Blast在Gene Bank内与标准菌株比对，并用MEGA5.0软件构建系统发育树，如图2所示，确定ZP-28是枯草芽孢杆菌。

选用当年人工放养所获得的栗蚕茧1 110粒，药用冷藏箱1台、LRHS-150F-Ⅲ恒温恒湿培养箱3台、恒温室1间。

1.2 试验方法

1.2.1 低温处理

选化蛹后3～5 d的栗蚕茧，置于7 ℃药用冷藏箱分别低温处理5 d、10 d、15 d，取出置于30 ℃恒温下感温，以置于30 ℃恒温中感温为对照区。每种处理和对照区分别设3个重复区，每区30粒栗蚕茧，各区分别穿挂后装入30cm×40cm尼龙网袋，每天适当补湿，记录每天栗蚕羽化蛾数。

与对照组比较，观察组护理后各临床症状评分均较低，组间比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

采用加权平均统计法，计算栗蚕蛹的发育历期。

1.2.4 计算方法

1.2.3 不同温度梯度处理

现代农业伴随着农药和化肥的发展而发展，当人们越来越关注健康时，果蔬上的农药残留也就越来越引起人们的忧虑。其实，“农药”是一个很宽泛的概念，有的人把肥料之外的所有农用物质都当做“农药”，而有的人只把“化学合成”的用于抗虫杀菌的药物叫做“农药”。

选择化蛹后3～5 d栗蚕茧，装入黑方便袋中置26 ℃恒温恒湿培养箱中黑暗处理7 d和15 d，处理后置30 ℃恒温室内感温，以30 ℃恒温室感温为对照区。每种处理设3个重复区，每区30粒栗蚕茧，各区分别穿挂后装入30cm×40cm尼龙网袋。每天适当补湿，记录每天栗蚕羽化蛾数。

3）针对存在特殊状况的老年人，可以设置专门一对一照顾治疗的护士和护理人员。可以给患病老人配有个案护士，他们在病人面前代表医院，与患者及家属沟通诊疗计划；在医生面前代表患者和家属，把患者的情况，如是否有家庭纠纷、心理问题等可能影响治疗的信息传递给医生。个案护士还应当负责患者的出院计划，对患者出院后回家还是去康复院的意向给予指导和建议。

x为栗蚕蛹发育历期，f为当天羽化蛾数，n为羽化蛾数，1～k羽化开始到结束的天数。

选化蛹后3～5 d的栗蚕茧，置于18 ℃、22 ℃、26 ℃恒温恒湿箱和30 ℃恒温室暖茧。以自然环境下栗蚕蛹羽化为对照区。每种处理设3个重复区，每区30粒栗蚕茧，各区分别穿挂后装入30×40 cm尼龙网袋。每天适当补湿，记录每天栗蚕羽化蛾数。

2 结果与分析

2.1 低温处理对栗蚕蛹羽化的影响

栗蚕蛹经过低温处理(7 ℃)5 d、10 d、15 d处理后，再将其置于30 ℃下感温，栗蚕蛹发育历期分别为65.12 d、66.84 d和71.74 d，成虫羽化期分别是52 d、55 d和50 d。对照区的栗蚕蛹发育历期为65.92 d，成虫羽化期为53 d。可见，经过冷藏处理的栗蚕蛹发育历期和成虫的羽化期与对照区相比无明显差别(图1、图2)，冷藏处理对缩短栗蚕蛹发育历期和成虫羽化期没有明显作用。

图1 冷藏日期与羽化的关系

图2 冷藏条件下栗蚕成虫羽化累计百分率

黑暗处理栗蚕蛹15 d和7 d，其发育历期分别为40.29 d和45.99 d,分别比对照区缩短25.63 d和19.93 d,即缩短了38.88%和30.23%；成虫羽化期分别为15 d和38 d，成虫羽化期比对照区分别缩短38 d和15 d，即缩短了71.7%和28.3%。黑暗处理15 d和7 d的栗蚕蛹成虫羽化1—9天内羽化率达84.44%和67.78%，黑暗15 d处理栗蚕蛹成虫羽化高峰期在第2—6天，羽化率占总羽化率的63.33%；黑暗处理栗蚕蛹15 d比7 d的发育历期缩短5.7 d；成虫羽化期缩短23 d，即缩短了153.33%，黑暗处理15 d对栗蚕蛹的羽化效果明显好于黑暗处理7 d的效果 (图3、图4)。可见，黑暗是影响栗蚕羽化期的重要因子之一。

2.2 黑暗处理对栗蚕蛹发育及羽化的影响

图3 黑暗处理与栗蚕成虫羽化的关系

图4 黑暗条件下栗蚕成虫羽化累计百分率

2.3 不同温度梯度处理对栗蚕蛾羽化的影响

1.2.2 黑暗处理

栗蚕蛹在18 ℃、22 ℃、26 ℃、30 ℃恒温下其发育厉期分别为48.78 d、48.83 d、46.06 d、66.33 d，成虫羽化期分别为17 d、18 d、21 d和45 d，对照区(自然环境)栗蚕蛹发育历期59.11 d，成虫羽化期为41 d。栗蚕蛹在18 ℃、22 ℃、26 ℃恒温下发育历期比对照区分别缩短了10.33 d、10.28 d、13.02 d，成虫羽化期分别比对照区缩短了24 d、23 d、20 d；而30 ℃恒温处理栗蚕蛹发育历期比对照区延长了7.22 d，成虫羽化期延长了4 d。18 ℃、22 ℃、26 ℃和30 ℃恒温处理的栗蚕蛹其成虫羽化高峰期分别是第7—9天、第8—11天、第7—9 天和第28—30天，即占总羽化率的43.33%、45.56%、27.78%和24.44%羽化率；对照区羽化高峰在第14—17天,占总羽化率的25.56%(图5、图6)。可见，18～26 ℃有利于栗蚕蛹发育及羽化，26 ℃最适合栗蚕蛹发育，而30 ℃高温抑制栗蚕蛾羽化。说明温度也是影响栗蚕羽化期的主要因子之一，适时恒温保管栗蚕蛹可以缩短栗蚕蛹的发育历期和成虫羽化期。

图5 恒温处理与栗蚕成虫羽化的关系

图6 不同温度条件下栗蚕成虫羽化的累计百分率

3 讨 论

3.1 自然条件下栗蚕成虫的羽化历期较长，羽化不集中，影响栗蚕蛾交配、制种等，给栗蚕种生产及管理带来困难。本研究表明，栗蚕蛹发育最适温度为26 ℃，栗蚕成虫羽化最适合温度18～22 ℃，表明高温条件下会减缓栗蚕蛹发育速度，并影响栗蚕蛾的羽化。

公路工程全过程造价管理中，通过TOT（Transfer—Operate—Transfer）即转让、运营、移交的方式或ROT（Renovate—Operate—Transfer）重建、运营、移交的方式，运用PPP模式中的社会资本进行项目的改造与运营，债权人同意的基础上，将地方政府债务成功转化为非政府债务，以减轻政府财政负担（见图1）。PPP模式下的公路工程有助于提升施工质量和效率，缓解地方政府财政压力，使地方政府能够有资金投入地方经济发展和民生建设。总之，公路工程施工单位要结合PPP项目信息加强工程造价评估，提高在建工程造价管理的准确性。

3.2 通过黑暗处理和适宜温度处理栗蚕蛹，可以缩短蛹发育历期和成虫的羽化期，有利于栗蚕种生产。栗蚕羽化期缩短，羽化集中，不仅能省工省时，还能提高自然交尾率，同时选体色相同的雌雄成虫进行交尾的机率就会增加，对推进栗蚕品种选育工作意义重大。

舒曼现在已经有几千万元的资产了，是一个名副其实的乡镇企业家了。他在这个城市里开了一个豪华的美食中心，生意非常火。

3.3 当栗蚕化蛹后将其移至22～26 ℃的环境中并进行黑暗15 d左右处理可缩短栗蚕蛹发育历期，当栗蚕开始羽化时应当将其移至18～22 ℃环境中，缩短成虫羽化期，使其羽化更集中，便于管理。

参考文献

[1] 北京农业大学.昆虫学通论[M].北京:农业出版社,1982:680-695.

[2] 戚俐,刘风云.栗蚕交配时间长短与不受精率、孵化率关系的调查分析[J].北方蚕业,2006,27(4):21-24.

[3] 戚俐,刘风云.栗蚕自然交配与人工助交对产卵数量的影响[J].北方蚕业,2008,29(1):35-36.

[4] 张彩华,刘凤云,齐荣和,等.栗蚕的生物学特性[J].中国蚕业,2005,26(2):50-51.

[5] 李树英,杜占军,戚俐,等.野蚕系列之二—栗蚕[J].中国蚕业,2014,35(2):85-87.

[6] NAGASE A.MaSAKI S.Thermal and photoperiodic responses in aestivasting pupae of Dictyoploca japonica (Lepidoptera:Saturniidae)[J].Applied entomology and zoology,1991,26(3):387-396.