罗非鱼是我国主要养殖品种，目前总产量位居全国淡水鱼产量第五位[1]。吉富罗非鱼是遗传性状改良的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)[2]，具有生长速度快、出肉率高的特点[3]。随着罗非鱼养殖业的快速发展，其病害问题时有发生。饲料中使用中草药提取物[4-6]、胆汁酸[7-8]、微生态制剂[9-11]可以提高鱼体生长性能，改善鱼体健康，增加鱼体免疫力。但这3种添加剂对吉富罗非鱼生长性能和健康的影响还鲜见报道。因此，本试验探讨饲料中添加中草药提取物、胆汁酸和微生态制剂对吉富罗非鱼生长性能、肠道消化酶活性、肝脏和肠道组织结构的影响，以期为罗非鱼高效环保配合饲料的配制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验饲料

以鱼粉、豆粕、菜粕等常规原料配制成基础饲料(见表1)。在每千克基础饲料中分别添加1、2 g的中草药提取物(福建大北农水产科技有限公司生产，由菌陈、大黄、郁金香等按一定比例复配后，经过超微粉碎制成)；0.1、0.2 g的胆汁酸(山东龙昌动物科技有限公司生产)；1、2 g的微生态制剂(福建大北农水产科技有限公司生产，由枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌通过闪蒸工艺制成的菌粉混合制剂)。共计配制7组饲料。试验饲料原料均经超微粉碎，保证有80%过80目筛，混合均匀后用MY120X2双螺杆膨化机(江苏牧羊机械装备有限公司)制粒，调质温度102 ℃制粒，50～70 ℃烘干后，置于-20 ℃冰箱中储藏备用。

1.2 试验用鱼与饲养管理

试验用吉富罗非鱼购自漳州市龙海市，运回实验室后，用基础饲料驯化2周，饥饿1 d后挑选大小均匀的483尾实验鱼(32.75±5.75) g，放养于21个养殖桶(有效容积500 L)中，每桶放鱼23尾。试验在循环流水养殖系统中进行，水源为曝气自来水。日投喂率为体重的3%，每天等量投喂2次(9∶00和17∶00)，试验周期为45 d。试验过程中每周称重，以此为依据调整投喂量。试验期间水温23～27 ℃，pH 6～8，溶氧6～8 mg/L，氨氮含量<0.2 mg/L，亚硝酸盐含量<0.1 mg/L。

表1 基础饲料配方与饲料营养成分含量 Tab.1 Feed formulation and nutrient contents of the experimental diets %

项目比例原料鱼粉5豆粕42菜粕13DDGS3米糠10小麦20豆油2大豆磷脂油1膨润土2预混料∗2营养成分粗蛋白30 2粗脂肪6 5灰分8 8粗纤维5 0

注：*由大北农水产科技集团生产。

1.3 样品采集与制备

饲养试验结束后，饥饿24 h，分别称量每桶鱼的质量。随后，每处理组随机捞取6尾，将鱼体于冰盘中解剖，分离前肠、中肠和肝脏；肝脏、肠道(前肠、中肠)各切取0.5 cm置于Bouin氏固定液中固定；其余肝脏、肠道用液氮速冻后，放于-70 ℃冰箱保存。

1.4 指标计算、测定方法与切片观察

饲养期间，每周测定鱼体体重，每天记录鱼体摄食、死亡情况，试验开始和结束测定鱼体体重和体长。计算特定生长率、增重率、成活率、肥满度等。

特定生长率(SGR)=(lnW2-lnW1)×100%/t

之后则是在项目启动文件中设置Spring及Spring MVC的入口文件，从而在系统启动时，框架功能也随之准备就绪，即在web.xml中设置Spring配置文件applicationContext.xml路径以及Spring MVC的请求控制分发器DispatcherServlet和Spring-mvc.xml的路径，并在web.xml中配置好请求拦截HTTP请求的基础路径[9]。

在本试验中，与对照组相比，饲料中添加适量中草药提取物、胆汁酸和微生态制剂均有改善试验鱼的生长性能的趋势，尤其是投喂添加0.2 g/kg胆汁酸的饲料显著提高了试验鱼的增重率和特定生长率。这与对杂交罗非鱼[12](O.niloticus×O.aureus)、加州鲈[13](Micropterus salmodies)、牛蛙[14]Rana catesbeiana)的研究发现一致，分析原因可能是胆汁酸能促进脂肪乳化，扩大脂肪与脂肪酶的接触面积，加速脂肪的消化吸收，提高脂肪利用率，而脂肪利用率的提高可以减少蛋白质作为能量被消耗，从而使更多的蛋白质用于肌体生长。

肥满度(CF，g/cm3)=(W/L3)×100

成活率(SR)= (N1-N2)÷N1×100%

However, PANCREOX, which randomized 108 patients to oxaliplatin and 5-FU, the FOLFOX6m schedule, or 5-FU plus leucovorin, demonstrated a detrimental effect of FOLFOX6m on both OS and quality of life (median OS 6.1 mo vs 9.9 mo, P = 0.02), although the high OS in the 5-FU arm appears disputable[21].

式中:W1为试验鱼初始体重(g)；W2为试验结束时鱼的终末体重(g)；t为饲养天数；N1为试验鱼初始尾数；N2为试验鱼终末尾数；W为试验结鱼的体重(g)；L为体长(cm)。

1.4.2 消化酶活性的测定方法

任何理论的形成都要遵循一定的客观逻辑规律，具有一定的理论与现实基础，习近平生态文明建设重要论述的形成亦是如此。马克思主义生态思想是其形成的坚实理论基础，新中国成立以来中国共产党的生态保护理念是其形成的丰富理论来源，中华优秀传统生态文化是其形成的深厚文化渊源，对国内外生态实践经验教训的思索和探究是其形成的充分实践基础。深入分析习近平生态文明建设重要论述的形成逻辑，有助于我们更加深刻地理解和把握它的科学内涵和时代价值。

1.4.3 肠道和肝脏切片制备与分析

取合适大小的肝脏组织置于Bouin氏固定液中4 ℃过夜，梯度酒精脱水，二甲苯透明，透蜡，包埋，切片，37 ℃过夜烘干；苏木精-伊红染色法(HE)，中性树胶封片，显微镜下拍照。

在农民用水户协会组建初期，宁夏引黄灌区8个水管单位发挥自身优势，首先在灌区内抓典型、树牌子。2004年春，首批成立10个选举规范、职责明确、具有广泛代表性的协会。之后，在各市县的行政推动和水管单位的全力配合下，大多数协会都按照程序依法组建。经不断探索创新，互相学习借鉴，逐步形成了以“乡级农民用水协会+村级农民用水者协会+一把锹淌水”模式为主的管理体制。乡级协会的主要职责是负责村级协会之间、协会与水管单位之间的工作协调，以及监管返还协会经费使用等。村级协会由村民选举产生，具体负责支斗渠的管理维护和水费收缴。“一把锹淌水”由村委会或村级协会组织农民按照一事一议程序实施。

肠道切片的测定指标：肠道绒毛数量；肌肉层厚度(每张图片随机取10个点测定后取平均值)。

1.5 数据处理与分析

实验所得数据采用SPASS 18.0进行单因素方差分析，用Duncan氏多重比较分析组间差异显著性。描述性统计值使用平均值±标准差表示，P< 0.05表示具有显著性差异。

2 结果

2.1 3种饲料添加剂对吉富罗非鱼幼鱼生长性能的影响

饲料中添加3种添加剂对吉富罗非鱼幼鱼肠道蛋白酶活性的影响见表3。由表3可见，各组之间肠道蛋白酶活性差异不显著。在投喂添加剂的试验组中，微生态制剂组幼鱼肠道蛋白酶活性最高为1 130 U/g prot，中草药组幼鱼肠道蛋白酶活性最低为890 U/g prot。从表3可以看出，虽然各处理组之间幼鱼肠道淀粉酶活性差异不显著，但摄食3种添加剂后的试验鱼肠道淀粉酶活性有升高的趋势，且低剂量的添加剂组肠道淀粉酶活性高于高剂量添加剂组。摄食添加剂的试验鱼中，Z1和D1组的幼鱼肠道淀粉酶活性最高为70 U/g prot，N2组幼鱼肠道淀粉酶活性最低为40 U/g prot。在添加中草药提取物组和添加胆汁酸组中，低剂量添加剂组幼鱼肠道脂肪酶活性高于高剂量组的，胆汁酸组幼鱼肠道脂肪酶活性最高为6.83 U/g prot，中草药组幼鱼肠道脂肪酶活性最低为2.59 U/g prot。饲料中添加2 g中草药提取物使得试验鱼的肠道脂肪酶活性显著低于微生态制剂组和饲料中添加0.1 g胆汁酸组。

表2 饲料中添加3种添加剂对吉富罗非鱼生长性能的影响 Tab.2 Effect of three additives on growth performance of O.niloticus

指标CKZ1Z2D1D2W1W2平均末重/g47 70±3 7749 66±2 7950 73±2 2150 08±3 8154 60±3 3952 44±0 9646 46±1 26增重率/%45 66±11 50bc51 63±8 45abc54 89±6 76abc52 93±11 62abc66 71±10 36a60 13±2 92ab41 86±3 85c特定生长率/(%/d)0 84±0 08b0 93±0 14b0 92±0 18ab0 94±0 20ab1 14±0 21a1 05±0 14ab0 79±0 13b饲料系数1 96±0 09a1 78±0 08a1 61±0 01ab1 66±0 35ab1 32±0 26b1 73±0 14ab1 73±0 04ab肥满度3 38±0 153 59±0 193 57±0 223 51±0 063 52±0 143 62±0 313 33±0 02

注：CK为对照组；Z1和Z2分别为中草药1、2g/kg组；D1和D2分别为胆汁酸0.1、0.2 g/kg组；W1和W2分别为微生态制剂1、2 g/kg组，下同。

2.2 3种饲料添加剂对吉富罗非鱼幼鱼肠道消化酶活性的影响

试验期间，试验鱼摄食情况良好，未发现试验鱼死亡。饲料中添加3种添加剂对吉富罗非鱼幼鱼生长性能和饲料利用效率的影响见表2。投喂饲料中添加0.2 g/kg胆汁酸的试验鱼增重率和特定生长率显著高于投喂饲料中添加2 g微生态制剂，其余各组之间差异不显著。各组间肥满度差异不显著。对照组饲料系数显著高于0.2 g/kg胆汁酸组，与其他各组间差异不显著。肥满度在各组间差异不显著。

表3 饲料添加3种添加剂对吉富罗非鱼肠道消化酶活性的影响 Tab.3 Effect of three additives on the digestive enzyme activity of O.niloticus U/g prot

指标CKZ1Z2D1D2W1W2蛋白酶910±120890±80970±2901120±4501050±360980±2701130±520淀粉酶50±4070±4060±1070±10640±4060±1040±10脂肪酶3 65±1 03ab3 95±1 45ab2 59±1 06a6 83±1 09b5 43±1 02ab6 53±0 49b6 81±0 21b

2.3 3种饲料添加剂对吉富罗非鱼幼鱼肠道和肝脏形态的影响

2.3.1 3种饲料添加剂对吉富罗非鱼幼鱼肝脏形态的影响

对照组的试验鱼肝细胞排列整齐，大小均一，细胞膜分界明显，肝细胞索明显，肝脏细胞健康。中草药组试验鱼肝细胞核偏移，细胞内存在大量脂肪液滴等现象；胆汁酸组试验鱼的肝细胞形态正常，两组肝细胞形态相近；微生态制剂组的试验鱼肝细胞排列紧密，细胞核居中，细胞膜分界明显(图1)。

2.3.2 3种饲料添加剂对吉富罗非鱼幼鱼肠道形态的影响

由表4可知，在前肠组织中，摄食微生态制剂组的厚度最大，摄食饲料添加0.1 mg/kg微生态组次之，但各组间实验鱼的前肠肠道肌层厚度差异不显著。在中肠组织中，摄食饲料中添加1 g/kg中草药，添加0.2 g/kg胆汁酸组，而各组间也差异不显著。前肠绒毛长度在各组间无显著差异；1 g/kg微生态制剂组的中肠绒毛长度显著高于中草药组，但与其他组之间无显著差异。

首先，数据分析主要是在数据统计的基础上，分析数据中的价值，更好地位教学服务。大数据时代，高职教师也要重视从网络平台中获取资源和信息，更好地契合时代发展的需求，并根据学生的学习特点和进度，提供个性化的学习方案和计划，并对学生的学习状况进行分析，从而更好地改进教学策略。

3 讨论

增重率(WGR)=(W2-W1)÷W1×100%

图1 饲料中添加3种添加剂对吉富罗非鱼幼鱼肝脏形态的影响 Fig.1 Effect of three additives on the liver morphology of juvenile O.niloticus

在本试验中，添加1 g/kg的微生态制剂组特定生长率(SGR)有高于对照组的趋势，但添加2 g/kg的微生态制剂的试验鱼SGR显著低于对照组，这与锦鲤(Cyprinus carpio L.)[15]的研究结果相似，在其饲料中添加过高的微生态制剂，降低了锦鲤的生长性能，表明过量添加微生态制剂似乎对鱼的生长存在负面效应。

肠道和肝脏剪碎称重后，以预冷的9倍体积的0.85%的生理盐水匀浆组织。将组织液于4 ℃下3 000 r /min离心10 min，取上清液用于测定消化酶活性。采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，按试剂盒说明书操作。蛋白酶的活性采用福林-酚试剂法测定；淀粉酶的活性采用碘-比色法测定；脂肪酶的活性采用聚乙烯醇橄榄油乳化液水解法测定。以37 ℃条件下，每分钟水解干酪素生成1 μg 酪氨酸作为1 个活性单位；脂肪酶以37 ℃条件下，每毫克组织在反应体系中与底物反应1 min 消耗1 μmol 底物为1 个活性单位；淀粉酶以37 ℃条件下，每mg组织与底物作用30 min，水解1 mg淀粉为1个活性单位。

表4 3种饲料添加剂对吉富罗非鱼幼鱼肠道形态的影响 Tab.4 Effect of three additives on the intestinal morphology of juvenile O.niloticus

指标CKZ1Z2D1D2W1W2前肠肌层厚度/μm16 10±4 7213 07±1 2117 43±2 1817 95±3 5811 68±1 8320 72±1 8320 72±2 90中肠肌层厚度/μm12 59±0 1817 96±2 9415 40±7 0910 90±0 4217 48±0 4714 01±2 3015 77±3 52前肠绒毛长/μm113 56±37 25119 60±13 39100 00±1 26174 97±21 94107 44±41 62130 15±24 07155 59±21 63中肠绒毛长/μm88 97±3 08ab68 73±3 26a66 67±3 80a80 63±13 36ab94 45±14 91ab109 50±5 50b89 61±11 05ab前肠绒毛数/个23 00±4 0420 33±2 1820 33±2 0225 00±1 5230 33±6 6527 00±3 0527 33±4 33

在本研究中，与对照组相比，饲料中添加中草药提取物、胆汁酸和微生态制剂未对肠道的淀粉酶和蛋白酶活性产生显著影响。但发现饲料中添加0.2 g/kg胆汁酸的试验鱼肠道脂肪酶活性显著高于添加0.1 g/kg的。在对牛蛙[14]的研究中也有类似的发现，饲料中添加0.1 g/kg的胆汁酸可以显著提高其肠道脂肪酶活性，随着胆汁酸添加量的增加，肠道脂肪酶活力逐渐降低。

在本试验中饲料添加胆汁酸及微生态制剂均未对肝细胞的结构产生影响。但是投喂添加中草药提取物组的试验鱼，均发现肝细胞核位于细胞一侧，细胞空泡化等现象。这可能是中草药添加量过高或含有某种损伤肝细胞的因子所致[16]。

已经79岁高龄的东莞市交通运输局原副局长卢锐平对当年经历记忆犹新：“广深高速公路的集资模式，成为后来省内其他高速公路建设纷纷效仿的样板，当年参与广深项目的交通人才，被全国各地高速公路建设工程抢夺，广深高速公路被称为中国高速公路的‘黄埔军校’。”

肠道是机体消化、吸收营养物质、免疫等的重要场所，其肠绒毛数量和肠道厚度直接影响营养物质的消化吸收[17]。本试验中，与对照组相比，饲料中添加一定量的添加剂均有增加试验鱼的绒毛数量和肌层厚度的趋势，这表明此3种添加剂可改善营养物质的消化吸收和肠道健康。研究发现多种添加剂都能提高肠道绒毛长度和肌层厚度，如添加10～20 mg/kg大豆黄酮可显著促进大菱鲆(Scophthalmus maximus )肠道组织结构的发育和成熟，提高其后肠肠绒毛的长度[18]；饲料中添加0.2 g/kg胆汁酸使得齐口裂腹鱼( Schizothorax prenanti )的肠道绒毛数增加[19]。而添加50 mg/kg糖萜素(山茶科植物籽中提取的三萜皂苷类与糖类的混合物)则显著提高大菱鲆肠道黏膜厚度[20]。

综上所述，饲料中添加适量的中草药提取物(1 g/kg) 、胆汁酸(0.2 g/kg) 、微生态制剂(1 g/kg)可以改善吉富罗非鱼幼鱼的生长性能，提高消化酶活性。

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