遗传多态性一直是进化生物学研究的重要内容。而细胞遗传水平的多态性研究一般都使用C带、Ag带等带型技术和荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）。相对于条带技术，FISH可同时提供分子和细胞水平的信息，并提供了更高的精度和分辨率。根据探针及靶部位长度不同，FISH的探针可分为3种类型：（1）多拷贝基因探针，如核糖体 RNA基因、组蛋白基因探针等，这些探针属于功能基因，但在基因组上有较多的拷贝，所以仍然很容易得到杂交信号，如 18S rDNA，组蛋白基因等。（2）简单重复序列探针，如着丝粒、端粒序列探针，哺乳动物的Alu序列探针等，这类探针尽管其本身序列较短（如端粒序列探针只是5碱基或 6碱基重复），然而由于在基因组中有极多拷贝，靶序列很长，所以杂交信号非常明亮，定位难度相对较低。（3）独特序列探针，指由大片段克隆（Fosmid、BAC等）、染色体特异性文库、基因组DNA等制备的探针（Huan, 2009）。

ND-FISH（non-denaturing FISH）是近几年兴起的一种技术，使用的探针与过去常规的几种探针不同，主要是微卫星序列，又称为简单序列重复（SSRs）。探针是合成的15～20 bp的单碱基、二碱基、三碱基或四碱基的微卫星序列。微卫星位点广泛分布于真核生物的基因组中（Hamada et al, 1982）。因重复数目的不同而呈现高度多态性（Amos et al,1993）。目前几十到几百个碱基的微卫星序列由于其在个体间的多态性，作为分子标记广泛的应用于连锁图谱、基因标记、系统发育等多领域的研究。微卫星探针有着出乎意料的在非变性染色体上识别SSRs的能力，它们可以快速结合到SSR富集的染色体区域（Cuadrado & Jouve, 2010）。ND-FISH属于直接杂交法，15～20 bp的DNA探针上带有荧光基团，并且是合成的单链DNA，因而在荧光原位杂交中不需要对染色体和探针进行变性，也不需要添加抗体，这使得检测变得省时省力，简便高效。ND-FISH由于不需要对染色体进行变性，染色体的形态得到了很好的保持，这对于同一分裂相上的重复杂交有很大优势。另外ND-FISH合成的探针保证了荧光标记的质量。

6.5m～6.8m标高亲水平台受风浪侵蚀概率大，同时该平台作为亲水步道，要求护坡结构耐久性好，且平整度高。因此，采用耐久性好，强度高、美观性优、厚度大的砌条石护坡。

在前人的研究中，SSRs探针在大麦、玉米、蝗虫、果蝇和人类中得到了明显的杂交信号，而且特异性很强（Cuadrado & Jouve, 2010）。在大麦Hodeum vulgare和H.bulbosum的研究中，SSRs探针为染色体的识别提供了标记，其中（ACT）5 的信号在H.vulgare 的7对同源染色体之间最具多态性，可以清晰的辨别所有染色体。（AAG）5 和（ACT）5两个探针还为H. vulgare ssp. spontaneum中一个株系5号染色体与7号染色体相互易位提供了标记。前人在观察染色体形态和C带等经典细胞学研究后认为H.bulbosum是H. vulgare的近缘种，共享一套“H基因组”，而Hordeum 属其他物种则具备另三套“H基因组”（Carmona et al, 2012; Linde-Laursen et al, 1997）。但是（AG）10、（AAG）5、（ACT）5和（ATC）5的ND-FISH结果却显示H. vulgare 和H. bulbosum 染色体上SSRs的分布有着很大不同。这支持了另一种相反的假说，使得H.vulgare 和H.bulbosum的近缘关系仍然存在争议，也暗示着使用SSRs的ND-FISH可以为系统发育假说提供佐证（Carmona et al, 2012）。

在两栖动物中，独特序列探针的缺乏是很严重的问题。rDNA等常用的探针提供的多态性信息很少，只能辨识个别染色体，这使得分析两栖动物细胞水平遗传多态性的研究十分困难。在对雨蛙科Aplastodiscus属染色体进化的研究中，研究者使用了端粒作为分子标记，在 A. perviridis和 A.callipygius中，端粒探针杂交了所有染色体的端部，而在A. leucopygius的3号染色体的着丝粒区域发现了内端粒序列（ITS）。在A. arildae和A. eugenioi的杂交结果中，所有染色体的端粒和着丝粒都有信号（Gruber et al, 2012）。在棘腹蛙的荧光原位杂交的研究中，5S rDNA探针的信号只出现在1号染色体上，端粒序列探针出现在了所有染色体端部，在极个别个体中检测到ITS（Qing et al, 2013）。总之，这些常用探针在属下、种下呈现很低的多态性。

本研究尝试了 ND-FISH在两栖类中的应用：（1）我们将常用的SSRs在两栖类中进行筛选，得到一系列在染色体间有多态性的标记，可用于两栖类染色体识别和遗传多态性等研究。（2）较之其他类群，ND-FISH技术在两栖类中，染色体必须变性之后才可以得到杂交信号。（3）此外，本研究对双色杂交流程进行了较大的改进，尝试同时使用直接标记和间接标记的探针，避免了两次杂交所增加的洗脱及相关程序，直接获得双色信号，使杂交流程简化、提高效率。

1 材料和方法

1.1 有丝分裂染色体制备

选取来自于四川地区的棘腹蛙（Quasipaa boulengeri）个体制备染色体。棘腹蛙具有易位多态现象，分布区靠西的部分种群中检测到多种核型。Qing et al（2012）在研究中共发现了5种核型，因1号和6号两对染色体相互易位而成。Ⅰ型是常规核型，两对染色体均未发生重排，1号和6号染色体分别为一对大的和一对小的中着丝粒染色体，可表示为 MM/mm。Ⅱ-V 型（MM/mSt、MT/mm、MT/mSt、MT/StSt）中，或1号、或6号，或1和6号染色体均有涉及到易位后形成的异形染色体。由于易位发生仅局限于该种分布区西端部分种群，该物种大多数个体仍为没有发生易位的I型核型。而本研究旨在技术的运用，故实验标本均采用没有发生易位的I型核型个体。

5S探针带有DIG标记，由PCR法合成。5S正向引物 5 ′-GCCTACGGCCACACCAC-3′，反向引物5′-AAGCCTACGACACCTGGTATTC-3′（Qing et al,2012）。5S PCR扩增程序：94 ℃ 1 min，50 ℃ 3 0 s，72 ℃ 1 min，30个循环。得到的 P CR产物经过GenElute™ PCR Clean-Up Kit（SIGMA）纯化，–20℃保存。

把公路用自卸车改装为非公路用自卸车时 ，由于路况恶劣、超载严重和设计初期仿真分析欠缺等问题，国内厂家生产的矿用重型自卸车不同程度地发生因推杆失效而导致产品可靠性低的问题，是一个亟待研究的课题[1-2]。

采用单一探针杂交方法，将合成的21对探针分别对不同染色体标本进行杂交，检测得（AC）10、（AG）10、（AAC）5、（CAT）5、（GACA）5等5个较为稳定的标记。

1.2 SSRs和5S探针的合成

SSRs探针由上海英俊（invitrogen）合成，序列及修饰见表1。

有丝分裂相采用骨髓细胞制备（Schmid et al,2010）。制备好的染色体标本于室温干燥2～4天后，经 70%、90%、100%的酒精梯度脱水后, 于 100%的酒精中–20 ℃保存。

表1 ND-FISH使用的SSRs探针 Table 1 SSRs used as probes in ND-FISH experiments

探针Probe 序列Sequence 5′端修饰Modifications in 5′（A）20 AAAAAAAAAAAAAAAAAAAA TAMRA（C）20 CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC TAMRA（AC）10 ACACACACACACACACACAC TAMRA（AG）10 AGAGAGAGAGAGAGAGAGAG TAMRA（CT）10 CTCTCTCTCTCTCTCTCTCT TAMRA（AT）10 ATATATATATATATATATAT TAMRA（AAC）5 AACAACAACAACAAC TAMRA（AAG）5 AAGAAGAAGAAGAAG TAMRA（AAT）5 AATAATAATAATAAT TAMRA（ACG）5 ACGACGACGACGACG FITC（ACT）5 ACTACTACTACTACT TAMRA（CAT）5 CATCATCATCATCAT TAMRA（CCG）5 CCGCCGCCGCCGCCG FITC（ACC）5 ACCACCACCACCACC TAMRA（AGG）5 AGGAGGAGGAGGAGG TAMRA（AGC）5 AGCAGCAGCAGCAGC TAMRA（GACA）5 GACAGACAGACAGACAGACA TAMRA（GATA）5 GATAGATAGATAGATAGATA TAMRA（GACT）5 GACTGACTGACTGACTGACT TAMRA（GCAT）5 GCATGCATGCATGCATGCAT TAMRA（GAGT）5 GAGTGAGTGAGTGAGTGAGT TAMRA

1.3 SSRs的ND-FISH

染色体标本的处理与SSRs的FISH相同。2×SSC中配制杂交液40 μL：40% 去离子甲酰胺，10% 硫酸葡聚糖，0.3% SDS，SSRs探针100 ng，5S探针50 ng。杂交液于83℃变性8 min后立即置于冰上，放置10 min。杂交液滴在片子上，盖盖玻片。于37 ℃潮湿暗盒中杂交6 h后,载玻片在2×SSC中浸泡2～3 min，摇落盖玻片后轻轻涮洗几下。每张片子上加200 μL抗体溶液（2 μL Dig-FITC, 198 μL 1% BSA），37 ℃孵育1 h后在洗脱液中涮洗3次，每次5 min。甩干片子，最后加DAPI 30 μL，镜检。

2×SSC中配制杂交液40 μL：30% 去离子甲酰胺，10% 硫酸葡聚糖，0.3% SDS，SSR探针100 ng。杂交液滴在片子上，盖盖玻片。于37℃潮湿暗盒中杂交3 h。

将片子浸入室温的洗脱液（4×SSC, 0.2% Tween 20）中，待盖玻片自动脱落后涮洗10 min。再用洗脱液涮洗5 min。最后用ddH2O涮洗几遍。甩干片子，加DAPI 30 μL，用配备对应滤镜组合的 Leica DMRA2 荧光显微镜对杂交信号进行检测，并通过Leica DFC490 CCD与 Qwin V3和 Qgo软件进行图像拍摄和采集。

1.4 SSRs与5S的双色荧光原位杂交

染色体标本从–20 ℃取出后镜检，55 ℃放2 h。0.01 mol/L HCl中配制0.01% pepsin，每张片子500 μL，盖盖玻片37 ℃处理15 min。洗去pepsin后于70%甲酰胺，10% 20×SSC中72 ℃变性2 min。将片子迅速放在预冷的70%、90%、100%梯度酒精中，各处理10 min。完成后扇动晾干。

1.5 SSRs探针的重复实验与分析

同时使用直接标记与间接标记的探针，用（CAT）5探针（红色）与5S rDNA探针（绿色）的双色FISH，得到理想的双色杂交效果。（CAT）5 的杂交结果显示，信号稳定出现于1号染色体的长臂和短臂的近着丝粒处、2号染色体的着丝粒处。在某些个体中，（CAT）5的信号还出现在3号染色体的长臂上。有的个体一对3号染色体上都没有信号（图2A），有的个体一条3号染色体上有信号而同源染色体上没有（图2B），还有的个体一对3号染色体上都有信号（图2C）。5S的信号稳定出现于1号染色体长臂的近着丝粒处。

2 结 果

2.1 SSR探针筛选结果

岭南人重商务实，注重现世回报，看重生活体验和物质享乐。余荫山房功能性强，其设计构思与生活紧密联系[18]，折射出岭南人奉行世俗享乐的审美心理。余荫山房空间流线高效便捷而富有趣味，注重使用者的参与性，强调感官和身心的娱乐，注重人与建筑、建筑与环境、人与环境的关系，表现出艺术与实用的结合，满足了使用者多样化的审美需求。

（AC）10 的杂交结果显示，信号稳定出现于 2号、6号、13号染色体着丝粒附近，以及11号染色体的短臂上（图 1A）；（AG）10的信号主要位于 1号染色体着丝粒，2号、6号染色体的着丝粒与端部，3号、5号染色体的端部，以及12号染色体短臂上（图1B）；（AAC）5杂交信号主要位于1号染色体着丝粒与长臂上，3号染色体的端部，5号染色体短臂端部，以及6号染色体着丝粒处（图1C）；（GACA）5的信号主要位于2号染色体的着丝粒附近（图1D）。（CAT）5的信号位于 1号染色体的长臂和短臂的近着丝粒处、2号染色体的着丝粒处，在部分个体中还出现在3号染色体长臂上（图2）。

图1 （AC）10、（AG）10、（AAC）5、（GACA）5杂交信号在棘腹蛙染色体上的分布 Figure 1 Chromosomal distribution of signals of（AC）10,（AG）10,（AAC）5 and（GACA）5 in metaphases of Quasipaa boulengeri A：（AC）10 杂交信号呈红色，主要分布于于2号、6号、13号染色体着丝粒附近，以及11号染色体的短臂上；B：（AG）10杂交信号呈红色，主要分布于1号染色体着丝粒，2号、6号染色体的着丝粒与端部，3号、5号染色体的端部，以及12号染色体短臂上；C：（AAC）5杂交信号呈红色，主要分布于1号染色体着丝粒与长臂上，3号染色体的端部，5号染色体短臂端部，以及6号染色体着丝粒处；D：（GACA）5的信号呈绿色，位于2号染色体的着丝粒附近。 A The (AC) 10 signals appear red and locate near the centromeric region of chromosome no.2, no. 6, no.13, and on the short arm of chromosome no. 11; B: The(AG) 10 signals appear red and locate near the centromeric region of chromosome no.1, no. 2 and no. 6, and on the telomeric position of chromosome no. 2, no.3, no. 5, no. 6, and on the short arm of chromosome no. 12; C: The (AAC) 5 signals appear red and locate near the centromeric region of chromosome no.1, no.6, and on the long arm of chromosome no. 1, and on the telomeric position of chromosome no. 3, and the telomeric position of short arm of chromosome no. 5;D: The (GACA) 5 signals appear green and locate near the centromeric region of chromosome no.2.

图2（CAT）5探针（红色）与5S rDNA探针（绿色）的双色FISH Figure 2 Double-color FISH with (CAT)5 probe (red) and 5S rDNA probe (green) （CAT）5杂交信号位于1号染色体的长臂和短臂的近着丝粒处，2号染色体的着丝粒处，在部分个体中还出现在3号染色体长臂上；5S rDNA的信号位于1号染色体长臂近着丝粒处。A：3号染色体上没有（CAT）5信号的代表个体。B：（CAT）5信号出现在一条3号染色体上，而同源染色体上没有的代表个体。C：两条3号染色体上都有（CAT）5信号的代表个体。 The signals of locate on both short arm and long arm near the centromeric region of chromosome no. 1 and on the centromeric region of chromosome no. 2; The signals of 5S rDNA locate on the long arm of near the centromeric region of chromosome no. 1. A: The representative sample that has no signals on the chromosome no. 3. B: The representative sample that has signals on one chromosome no. 3 while the homologous chromosome has no signals. C: The representative sample that has signals on the chromosome no. 3.

2.2 双色杂交结果

（AC）10、（AG）10、（AAC）5分别在5个个体中重复实验，（CAT）5在14个个体中重复，（GACA）5在3个个体中进行重复，选择好的分裂相拍摄并进行分析，得到每个探针在染色体上稳定出现的位置。

3 讨 论

3.1 筛选两栖类SSRs探针

以往在荧光原位杂交中使用的探针，无论是重复序列、多拷贝基因还是单拷贝序列提供的带型都很单一，一般都定位在一对同源染色体上，只能对一对同源染色体起辨识作用，例如5S rDNA；或者是无差别的分布于所有染色体上，例如端粒序列。而SSRs由于在染色体上分布广泛，可提供多带型，一个标记或几个标记组合就可以辨别出很多对同源染色体，在Carmona et al（2012）的研究中，（ACT）5一个标记就可以辨别所有7对同源染色体。在鱼类性染色体的研究中，SSRs探针也成功的标记了 W染色体（de Bello Cioffi et al, 2012）。此外，不同的SSRs序列在不同的物种和类群中的富集性和多态性有所不同，在一个类群中得到清晰的多态性信号的标记在另一个类群中可能根本观测不到信号。例如在蟾鱼类（Batrachoididae family）的研究中，（GATA）n探针在蟾鱼类的 4个物种中都得到了大量强烈的信号（Úbeda-Manzanaro et al, 2010），而在本研究中（GATA）n探针与棘腹蛙染色体杂交却没有信号。

为了检测SSRs探针是否能在两栖类中运用，我们选择了棘腹蛙作为实验对象。参照已有研究类群的工作（Cuadrado & Jouve, 2010），设计了21条SSRs探针进行尝试（表1）。结果表明，SSRs探针可以在两栖类中有良好的运用效果。在棘腹蛙中，（AC）10、（AG）10、（AAC）5、（CAT）5、（GACA）5 等5个标记得到了染色体间明显差异的信号，这些标记在不同个体中较稳定出现，都能起到一定的辨识染色体的作用（图1, 2），如果将不同的标记偶联上不同颜色的荧光，多个标记组合可以在一次实验中更准确的辨别更多的染色体。其他标记则没有信号或在每条染色体上分布相同，在棘腹蛙中不能起到染色体识别作用。

其中，（CAT）5在一些个体3号染色体长臂长上出现信号，表现出多态性。有的个体的两条3号染色体上都没有出现（CAT）5的杂交信号，有的个体一条3号染色体上有信号而同源染色体上没有，有的个体两条同源3号染色体上都有信号。根据长臂上是否有信号，可认为3号染色体有两种，一种或许是由另一种变化而来。发生变化新产生的3号染色体在种群中通过杂交扩散，产生了现在看到的情况，即不同个体中的3号染色体对表现出3种类型：一对3号染色体都没有信号的纯合子，一对3号染色体都有信号的纯合子，以及一条3号染色体有信号而另一条却没有的杂合子。3号染色体所具备的多态性可应用于棘腹蛙种群关系的分析。

3.2 两栖类的ND-FISH染色体变性是必须条件

两栖动物染色体的高度螺旋化在很多带型研究中都有反映（Schmid, 1978a）。两栖动物每微米的染色体含有的DNA量要远远多于其他脊椎动物（如哺乳类、鸟类、爬行类）（Schmid, 1978b）。因此两栖类的染色体的明带和暗带间距很小，常常难以辨别（Schmid, 1978a, b）。例如前人对两栖类染色体的 R带研究中就发现带型缺乏多样性（Schempp & Schmid, 1981）。染色体的高度螺旋化或许是 ND-FISH在两栖动物中难以直接应用的原因。 经验证ND-FISH中，SSRs探针是与染色体上的DNA相杂交，而不是RNA，也就是说ND-FISH的原理是依赖于 SSRs探针对双链 DNA的插入性（Carmona et al, 2012）。在染色体螺旋化程度很高的情况下，SSRs探针很难接触到靶序列，入侵双链DNA并与之结合就更困难了。ND-FISH中使用的探针为人工合成的单链DNA，不需变性，但在两栖动物的应用中，需要添加对两栖类染色体标本变性的步骤，否则杂交难以成功。

荧光原位杂交技术使用的探针有两种。第一种是与荧光物直接偶联标记探针，即碱基与荧光素直接偶联的探针；第二种是和半抗原（如生物素、地高辛等）偶联的间接标记探针，探针的制备通常使用缺口平移、PCR、随机引物法等方法。使用的探针不同使得杂交实验中的步骤有很大区别。其中最重要的就是间接标记的探针在与染色体杂交之后还要与连有荧光素的抗体反应，之后还需要进行洗脱，而直接标记的探针则不需要。而且由于间接法中的抗原抗体反应有级联放大的作用，容易出现大量杂信号，洗脱条件一般较严格，而直接法的洗脱较温和。

3.3 双色荧光原位杂交的改进

本研究尝试在一次杂交中同时使用直接标记探针与间接标记探针，通过这种方式，可更为快捷地获得双色信号的杂交结果。

ND-FISH由于不需要对探针和染色体变性，使得实验操作方便快捷，虽然在两栖类的应用中发现染色体标本必须进行变性，然而由于SSRs探针的特性，杂交时间相比于常规FISH还是有了很大缩短，由9～15 h缩短到3～4 h，工作效率可显著提高。

之前也有学者同时使用SSRs和rDNA标记染色体，进行双色荧光原位杂交，其中SSRs序列的获得是使用（GATA）7和（TATC）7作为引物在无模板的情况下进行PCR，然后再用缺口平移法标记探针（Úbeda-Manzanaro et al, 2010）。这种方法相比于直接合成单链探针要繁琐的多。

当我们试图使用带有荧光素标记的SSRs探针和DIG标记的5S rDNA探针一起标记染色体时，就遇到了直接标记和间接标记探针杂交后洗脱条件不同的问题。按照常规步骤，要想在同一个分裂相上看到两个标记的信号需要将片子上第一个标记洗脱，再将第二个标记重新杂交。而重新杂交会影响第二次杂交的效果，而且很费时费力。于是我们尝试一次完成两种探针的杂交。双色FISH中，在配制杂交液时我们将两种探针一起加入，按照双链DNA探针的要求提高去离子甲酰胺的浓度并进行变性，在探针与染色体杂交结束后不对多余探针进行洗脱，而是直接加抗体。抗体反应结束后则是按照前人SSRs探针杂交的经验（Cuadrado & Jouve,2010），洗脱得较温和。我们在实验研究中发现探针的变性、杂交液配比的改变和地高辛的抗体反应对于SSRs的杂交结果几乎没有影响，而直接标记探针所使用的温和的洗脱虽然会增加一些5S rDNA的杂信号，但主信号也更明显了，拍摄调整曝光就可以得到很好的结果。

第一步，首先关注是实际参加反应的金属质量相等，还是实际参加反应的酸的质量相等。若实际参加反应的金属质量相等，则最终产生H2质量由多到少的顺序——Al、Mg、Na、Fe、Zn；若实际参加反应的酸的质量相等，则最终产生的H2质量相等。第二步，关注横坐标，必要时作垂线，关注垂线与图像相交点的含义。

工程场地位于浊漳河南源的漳河大桥上游，工程涉及范围为浊漳河及浊漳河两岸的未利用区域。主要内容为湿地设计、河道壅水建筑物设计及堤防加固等。

致谢：感谢电子科技大学杨足君教授、四川大学王亚军教授、武汉大学刘江东教授、湖北中医药大学赵刚教授提供的文献和指导，感谢四川大学彭锐、中国科学院成都生物研究所卿立燕的建议和帮助。

码组同步模块的主要功能是监测链路是否找到正确的字节边界,也就是从串行的比特流中正确的对字节进行定界。根据码组同步原理,当接收端连续收到4个正确的/K/字节后,认为达到码组同步。

在高脂饮食大鼠中，血管功能受损与O-GlcNAc水平升高有关，在正常喂养的动物中增加O-GlcNAc水平的同时也促进了基底动脉的收缩[40]。糖尿病显著增加了血管钙化的风险，并且增加的O-GlcNAc修饰通过增加成骨转录因子Runx2的表达以及Akt的活化促进血管钙化[41]。

参考文献：

Amos B, Schlotterer C, Tautz D. 1993. Social Structure of pilot whales revealed by analytical DNA profiling. Science, 260(5108):670-672.

Carmona A, Friero E, de Bustos A, Jouve N, Cuadrado Á. 2012.Cytogenetic diversity of SSR motifs within and between Hordeum species carrying the H genome: H. vulgare L. and H. bulbosum L. Theoretical and Applied Genetics, 2013, 126(4):949-961.

Cuadrado Á, Jouve N. 2010. Chromosomal detection of simple sequence repeats(SSRs）using nondenaturing FISH(ND-FISH). Chromosoma,119(5):495-503.

de Bello Cioffi M, Kejnovský E, Marquioni V, Poltronieri J, Molina WF,Diniz D, Bertollo LAC. 2012. The key role of repeated DNAs in sex chromosome evolution in two fish species with ZW sex chromosome system.Molecular Cytogenetics, 5(1):28.

Gruber SL, Zina J, Narimatsu H, Haddad CFB, Kasahara S. 2012.Comparative karyotype analysis and chromosome evolution in the genus Aplastodiscus(Cophomantini, Hylinae, Hylidae). BMC Genetics, 13: 28.

Hamada H, Petrino MG, Kakunaga T. 1982. A novel repeated element with Z-DNA-forming potential is widely found in evolutionarily diverse eukaryotic genomes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 79(21):6465-6469.

Huan P. 2009. Application of Fluorescence in situ Hybridization(FISH）in Chinese Shrimp, Fenneropenaeus chinensis and Zhikong Scallop, Chlamys farreri: Gene Mapping and Map Integration. Doctor thesis, Institute of Oceanography, Chinese Academy of Sciences. University of Chinese Academy of Sciences.128.[郇聘. 2009. 利用荧光原位杂交技术(FISH）对中国明对虾和栉孔扇贝若干重要基因定位的研究. 博士论文, 中国科学院海洋研究所. 中国科学院研究生院. 128.]

Linde-Laursen I, Heslop-Harrison JS, Shepherd KW, Taketa S. 1997. The barley genome and its relationship with the wheat genomes. A survey with an internationally agreed recommendation for barley chromosome nomenclature. Hereditas, 126(1):1-16.

Qing LY, Xia Y, Zheng YC, Zeng XM. 2012. A de novo case of floating chromosomal polymorphisms by translocation in Quasipaa boulengeri(Anura, Dicroglossidae). PLoS ONE, 7(10):e46163.

Qing LY, Xia Y, Zheng YC, Zeng XM. 2013. FISH of 5S rDNA and telomeric(TTAGGG）n repeats in normal and translocated populations of the frog Quasipaa boulengeri(Anura, Ranidae). Chinese Science Bulletin,58(18):2168-2173.

Schempp W, Schmid M. 1981. Chromosome Banding in Amphibia. VI.BrdU-replication patterns in Anura and demonstration of XX/XY sex chromosomes in Rana esculenta. Chromosoma, 83(5):697-710.

Schmid M. 1978a. Chromosome banding in Amphibia. I. Constitutive heterochromatin and nucleolus regions in Bufo and Hyla. Chromosoma,66(4):361-388.

Schmid M. 1978b. Chromosome banding in Amphibia. II. Constitutive heterochromatin and nucleolus regions in Ranidae, Microhylidae and Rhacophoridae. Chromosoma, 68(2):131-148.

Schmid M, Steinlein C, Bogart JP, Feichtinger W, León P, La Marca E, Diaz LM, Sanz A, Chen SH, Hedges SB. 2010. The Chromosomes of terraranan frogs. Insights into vertebrate cytogenetics. Cytogenetic and Genome Research, 130-131(1-8):1-568.

Úbeda-Manzanaro M, Merlo MA, Palazón JL, Cross I, Sarasquete C,Rebordinos L. 2010. Chromosomal mapping of the major and minor ribosomal genes,(GATA)n and U2 snRNA gene by double-colour FISH in species of the Batrachoididae family. Genetica, 138(7):787-794.