0 引言

牛肉是我们餐桌上最常见的畜肉之一，步入21世纪以来，随着人民生活品质的改善，食品安全意识的提高，对牛肉品质的要求更高。冷鲜肉在安全系数、营养价值、感官品质等方面都优于冷冻肉和热鲜肉，在世界范围内冷鲜肉得到了更多消费者的青睐，冷鲜牛肉逐渐占据肉类消费市场的主导地位[1-2]。由于冷鲜牛肉未经过杀菌处理，不能完全抑制微生物繁殖[3]，极易遭到微生物污染而变质，导致冷鲜牛肉货架期很短[4]，所以，合理使用保鲜技术可以有效地延长冷鲜牛肉的货架期。

利用保鲜剂保鲜是现阶段食品保鲜比较热门的一项技术。生物保鲜剂是以天然的物质代替化学合成物，具有低毒性、低能耗、低成本的特点，降低了化学物质对人体的危害，逐渐成为研究人员的研究热点 [5-7]。现阶段，应用于食品保鲜的生物保鲜剂的种类比较繁多，且抑菌机理各有不同。壳聚糖（chitosan）又称脱乙酰甲壳素，是甲壳素脱N-乙酰基的产物，是目前应用比较广泛的抑菌剂之一，具有很强的抑菌效果[9-10]；茶多酚（tea polyphenols），又称抗氧灵，是茶叶中多酚类物质的总称，具有很强的抗氧化性，可以抑制微生物的生长繁殖[11-13]；溶菌酶（lysozyme）可以有效地抑制革兰氏阳性菌，被广泛应用于食品保鲜、医药等领域 [14]；乳酸链球菌素（nisin），能抑制多种革兰氏阳性菌，尤其对产生芽孢的革兰氏阳性菌（如枯草芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌等）有很强的抑制作用[15]；肉桂精油是一种香辛料，具有较强的抑菌作用，已广泛应用于肉品保鲜领域[16]。

目前，生物保鲜剂保鲜技术的应用主要集中在对水产品的保鲜，对冷鲜肉的保鲜效果研究相对较少，将这种先进的技术引入冷鲜肉保鲜研究领域，可以为冷鲜肉的冷链物流技术提供一定的技术支持，同时可以有效地延长冷鲜肉的货架期[8]。

1 生物保鲜剂对冷鲜牛肉抑菌效果实验研究

1.1 实验材料与设备

1）实验材料

新鲜牛肉，3 500 g，购于黑龙江省哈尔滨市松北区前进综合大市场；食品级的壳聚糖、茶多酚、溶菌酶、nisin、肉桂精油均购于河南巧手食品添加剂有限公司；聚乙烯（polyethylene，PE）保鲜袋，购于北京胜宝包装制品有限公司。

2）实验设备

4)扭梢。从5月上旬开始，当新稍长到20厘米左右时，可以在其基部5厘米左右半木质化处进行扭梢处理。富士品种扭梢后可促进形成花芽。

1.2 实验方法

1.2.1 生物保鲜液配制

1）溶菌酶保鲜液

准确称取0.05,0.50,1.00 g溶菌酶，分别用无菌蒸馏水溶解并定容至50 mL，配制成质量分数为0.1%,1.0%,2.0%的溶菌酶保鲜液。

2）nisin保鲜液

准确称取0.002 5,0.025 0,0.250 0 g nisin，分别用无菌蒸馏水溶解并定容至50 mL，配制成质量分数为0.005%,0.050%,0.500%的nisin保鲜液。

3）壳聚糖保鲜液

准确称取0.50,1.50,2.50 g壳聚糖，分别用无菌蒸馏水溶解并定容至50 mL，配制成质量分数为1%,3%,5%的壳聚糖保鲜液[17-19]。

4）茶多酚保鲜液

准确称取0.05,0.50,1.00 g茶多酚，分别用无菌蒸馏水溶解并定容至50 mL，配制成质量分数为0.1%,1.0%,2.0%的茶多酚保鲜液[20-22]。

5）肉桂精油保鲜液

总之，在市场经济条件下，我国的国有企业面临着较大的机遇和挑战，国有企业要根据自身的经济管理特点，实施有效的财务预算管理制度，只有这样才能够有效的提升其市场竞争力，降低其经营风险，从而使得其能够实现可持续发展。相信国有企业如果能充分结合实际情况，制定出适合本企业发展的财务预算管理制度，严格落实规定，就能最大限度地规避企业风险。

准确量取0.25,0.75,1.25 mL肉桂精油，分别用无菌蒸馏水定容至50 mL，配制体积分数为0.5%,1.5%,2.5%的肉桂精油保鲜液[23-24]。

在“将博物馆带回家”的理念大为流行的今天，我们留意到，受众群体对文化附加值的审美需求异常旺盛。“文创”产品的推陈出新，在吸引公众眼球的同时，日益成为各大景点相得益彰的文化名片。比如故宫博物院，不以老大自居，在文创产品上下大功夫，目前已经开发出几千种文创纪念品，还建立了文化创意体验馆，一时间成为时尚旅游地，使故宫这座百年宫廷建筑群落充满了新时代的魅力。

1.2.2 新鲜牛肉处理

新鲜牛肉→分割至20 g/块→添加等量已配置的生物保鲜液→浸泡3 min→沥干→装入PE保鲜袋→封口→常温贮藏→待检测。

1.2.3 菌落总数测定

冷鲜牛肉在储藏过程中，微生物的分解作用对其品质产生极其重要的影响，通过菌落总数的测定可以判定生物保鲜剂对冷鲜牛肉的抑菌作用。

例如在“基因”的课时的教学中，教师可选择利用“大肠杆菌的拟核上分布着大约4 400个基因，每个基因的平均长度为1 000个碱基对”和“人类基因的碱基数占碱基总数的比例不超过20%”两项样例从“原核生物”和“真核生物”两个角度归纳出基因是DNA上特定的碱基对序列。同时，通过“将海蜇的绿色荧光基因转入小鼠体内，小鼠也会发荧光”与“小鼠体内的HMGIC基因与肥胖直接相关”两项样例从“自身基因”和“外来基因”两个角度，归纳出基因均可控制生物性状，促进学生理解“基因”概念的内涵。

参照国家标准GB/T 4789.2—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》规定的菌落总数测定方法[25]，将32 g营养琼脂溶于1 000 mL蒸馏水中，调节pH值后，煮沸溶解，100 ℃高温下灭菌15 min，配制成平板计数琼脂培养基；将8.5 g NaCl溶于1 000 mL蒸馏水中，100 ℃高温下灭菌15 min，配制成生理盐水，再进行菌落培养及计数，并对菌落总数进行测定。

1）菌落总数的计算

如果有2个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，计算公式为

冷鲜牛肉在储存过程中，菌落总数变化均呈上升趋势；经质量分数为0.1%,1.0%,2.0%的茶多酚处理的冷鲜牛肉菌落总数变化均比未处理的小；在第12 d时，经质量分数为0.1%,1.0%,2.0%的茶多酚处理的冷鲜牛肉lg（N/（CFU·g-1））分别为5.62,5.40,5.26，均在国家规定范围内，当储存时间达到15 d时，各试样的lg（N/（CFU·g-1））出现了不同程度的增加，分别达到6.67,6.38,6.11，均已变质。可见，茶多酚保鲜剂对冷鲜牛肉的保鲜效果随其用量的增加而增加。

[15]李昊阳，孔繁东，刘兆芳.不同天然保鲜剂及包装材料对牛肉品质的影响[J].食品工业，2017，38(6)：170-174.LI Haoyang，KONG Fandong，LIU Zhaofang.Effects of Different Natural Preservatives and Packaging Materials on the Beef Quality[J].The Food Industry， 2017，38(6)：170-174.

实验使用E-Plate16板一共16个孔，以下描述的是单个细胞系的单次实验，每个孔加入含10%血清高糖DMEM培养基50 μl取得背景读数，随后按照150 μl/孔加入对数期细胞悬液。设细胞浓度5000个/孔。接种细胞后将E-Plate16室温放置20 min后置入xCELLigence RTCA DP仪器开始记录数据，连续观察120 h。本实验中细胞约在24 h增长加速，48 h达到对数期，100 h达到平台期。因此选择第24 h按100nM siRNA转染浓度进行转染。4个孔转染lncRNA ASB16-AS1 silence，4个孔转染NC。

为平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；

n1为第一稀释度平板个数；

皮肤中的黑色素分为优黑素（真黑素）和褐黑素，优黑素为黑色或暗棕色不溶聚合物，褐黑素为红、黄色含硫可溶性聚合物。褐黑素在黑色素细胞内合成，形成成熟的黑素小体，沿微管、微丝运动被运输到黑素细胞的树突上，通过胞吞作用至周边的角质形成细胞中[10]。在角质形成细胞分化过程中，黑素小体被酸性水解酶降解，最终随角质层脱落而排出体外[11]。陆洪光等[12]研究不同肤色人种皮肤角质层细胞黑素颗粒颜色区别，结果表明白种人角质层细胞中黑色素外观呈淡红、黄红或红棕色，而黄种人和黑种人角质层细胞中黑色素外观呈棕色、棕黑或黑色，该研究也表明了不同人种皮肤优黑素和褐黑素含量水平的 差异。

n2为第二稀释度平板个数；

d为稀释因子。

《轻工机械》杂志(刊号：CN 33-1180/TH , ISSN 1005-2895)，创刊于1983年，由中国轻工机械协会、中国联合装备集团有限公司与轻工业杭州机电设计研究院联合主办，是一份在国内有较高影响力、历史悠久的轻工机械领域的专业性科技期刊。以报道轻工机械、自动化技术、机电一体化、工艺设计及其应用为特色。

2）肉样新鲜度判定标准

lg（N/（CFU·g-1））小于4.00， 属于一级鲜肉；

lg（N/（CFU·g-1））为4.00～6.00，属于次级鲜肉；

lg（N/（CFU·g-1））大于6.00 属于变质肉[26-27]。

1.2.4 实验方案

冷鲜牛肉经质量分数为0.1%,1.0%,2.0%的溶菌酶，0.005%,0.050%,0.500%的nisin，1%,3%,5%的壳聚糖，0.1%,1.0%,2.0%的茶多酚，体积分数为0.5%,1.5%,2.5%的肉桂精油共15种保鲜液处理后在常温下贮藏 [28]，分别在第3,6,9,12,15,18 d进行菌落总数测定，并记录数据，分析菌落总数变化趋势，比较各种生物保鲜剂对冷鲜牛肉的保鲜效果。

[3]张玉琴，齐小晶，梁 敏，等.冷鲜肉贮藏前处理及保鲜包装技术进展[J].肉类研究，2016，30(9)：35-39.ZHANG Yuqi，QI Xiaojing，LIANG Min，et al.Advance in Pre-Storage Treatment,Preservation and Packaging Technologies for Chilled Meat[J].Meat Research，2016，30 (9)：35-39.

1.3 实验结果与分析

1.3.1 实验初始值测定

对所购买的冷鲜牛肉的挥发性盐基氮（total volatile basic nitrogen，TVB-N）质量分数、pH值、水分质量分数及菌落总数等初始值进行测定，以检验实验试样的新鲜程度，测定结果如表1所示。

由表1数据可知，实验试样的初始值均达到一级冷鲜肉的国家标准，可以作为试样进行实验。

汤翠准备离开，她不忍亲眼目睹铲掘机的魔爪伸向无花果。有人拉住她，手指着她家的废墟，嘴里呜里哇啦的。是哑巴。哑巴拉着她朝里面钻。谁不恋旧？连不会说话的哑巴都这样。

表1 试样初始数据 Table 1 Initial data of samples

TVB-N质量分数 /%0.005 pH值5.81水分质量分数/%70.67 lg（N/（CFU·g-1））3.00

1.3.2 生物保鲜剂对冷鲜牛肉抑菌效果试验结果与分析

随着储存时间的延长，牛肉本身及环境中的微生物大量繁殖，冷鲜牛肉的菌落总数不断变化，不同生物保鲜剂对冷鲜牛肉菌落总数的影响如表2所示。

1.2方法 对照组:取50mg米非司酮,清晨空腹服用,每日给药2次,连续用药3天,用药3日后,取用100mg乳酸依沙丫啶,经腹壁注射入羊膜腔内。观察组:在对照组方案中,额外增加结合雌激素片,每日给药3片,分3次口服,连续给药直至胎儿娩出后3日,服药3日注射乳酸依沙丫啶,方法与对照组相同。引产时间计算均为乳酸依沙丫注射后,引产后取弯盘、产垫等,收集阴道出血,计算2小时出血量,引产后3日行B超复查,若发现有产妇存在胎膜、胎盘残留,应当采取清宫术治疗。产后随访观察产妇经期恢复时间。

表2 不同生物保鲜剂对冷鲜牛肉菌落总数的影响 Table 2 Effects of different biological preservatives on total bacterial count in chilleg（N（/CFU·g-1））

时间/d质量分数/%0.1 1.0 2.0 0.005 0.050 0.500 1 3 5 0.1 1.0 2.0 0.5 1.5 2.5保鲜剂种类未处理溶菌酶nisin壳聚糖茶多酚肉桂精油3 3.98 3.83 3.79 3.74 4.00 3.95 3.72 3.83 3.07 3.00 3.69 3.58 3.49 3.73 3.78 3.79 6 4.00 3.90 3.85 3.76 4.04 4.00 3.90 3.85 3.26 3.11 3.70 3.65 3.60 3.77 3.90 3.96 9 6.00 4.26 4.23 4.00 4.53 4.66 4.36 4.15 4.08 4.04 4.30 4.18 4.11 4.69 4.56 4.51 12 7.71 5.75 5.76 5.38 5.41 5.74 5.56 5.60 5.40 4.36 5.62 5.40 5.26 5.73 5.68 5.70 15 8.00 6.39 6.23 5.91 6.95 6.90 6.80 6.18 5.89 5.56 6.67 6.38 6.11 6.41 6.53 6.72 18 9.13 7.90 7.85 6.74 7.95 7.94 7.81 6.85 6.31 6.18 7.69 7.48 7.30 7.88 6.90 7.95

1）溶菌酶对冷鲜牛肉菌落总数的影响

衡诸二者，将绿色发展理念经由“绿色原则”在《民法典》中实现并引至“物权编”过程中，宜遵循“基本原则—具体规范—个案适用”的逻辑思路。

冷鲜牛肉经过3种不同质量分数的溶菌酶保鲜剂处理，菌落总数随储存时间的变化情况如图1所示。

图1 溶菌酶对冷鲜牛肉菌落总数的影响 Fig.1 Effect of lysozyme on total bacterial count of chilled beef

由图1可知，冷鲜牛肉菌落总数随存储时间的增加而上升，但经过溶菌酶处理的试样的菌落总数均低于未处理的试样。未经处理的冷鲜牛肉在第9 d时lg（N/（CFU·g-1））超过6.00，已变质。经质量分数为0.1%,1.0%,2.0%的溶菌酶保鲜剂处理的冷鲜牛肉在第12 d时，lg（N/（CFU·g-1））分别为5.75,5.76,5.38，均未变质，并且变化趋势缓慢。但在第15 d时，经质量分数为0.1%,1.0%的溶菌酶保鲜剂处理的冷鲜牛肉lg（N/（CFU·g-1））分别达到6.39,6.23，均已变质；而经质量分数为2.0%的溶菌酶保鲜剂处理的冷鲜牛肉在第18 d时，lg（N/（CFU·g-1））达到6.74，牛肉变质。综上所述，随着溶菌酶保鲜剂质量分数的增加，对冷鲜牛肉的抑菌效果越好，其货架期越长。

2）nisin对冷鲜牛肉菌落总数的影响

冷鲜牛肉经过3种不同质量分数的nisin保鲜剂处理，菌落总数随储存时间的变化情况如图2所示。

图2 nisin对冷鲜牛肉菌落总数的影响 Fig.2 The effect of nisin on total bacterial count of chilled beef

经不同质量分数的nisin保鲜剂处理后的冷鲜牛肉，菌落总数随着储存时间的延长呈上升趋势；经质量分数为0.005%,0.050%,0.500%的nisin保鲜剂处理的冷鲜牛肉在第12 d时lg（N/（CFU·g-1））分别为5.74,5.41,5.56，均未变质，且变化趋势明显较未处理的缓慢；但在第15 d时lg（N/（CFU·g-1））分别为6.95,6.90和6.80，均超过国家允许的临界值。可见，nisin保鲜剂对冷鲜牛肉的保鲜效果与其使用量成正比。

5）肉桂精油对冷鲜牛肉菌落总数的影响

情景因素包括消费者可支配的时间和金钱、销售氛围、触摸、服务互动。研究表明当购物时间足够长时，消费者会花更长时间浏览店内商品，进而影响冲动性购买欲望及购买行为。销售氛围如产品的陈列方式、店内芳香的气味、情感音乐等都会提高消费者对商场和产品的感知。影响消费者冲动性购买的另一个重要影响因素是物理接近性，消费者触摸会提高产品的物理接近性，从而刺激消费者的体验。服务互动贯穿于消费者购买前对商品的了解和购买后对售后服务的评价。

冷鲜牛肉经过3种不同质量分数的壳聚糖保鲜剂处理后，菌落总数随储存时间的变化情况如图3所示。

图3 壳聚糖对冷鲜牛肉菌落总数的影响 Fig.3 Effect of Chitosan on total bacterial count of chilled beef

经壳聚糖保鲜剂处理过的冷鲜牛肉，菌落总数在储存时呈缓慢上升趋势；其中，经过质量分数为1%,3%,5%的壳聚糖保鲜剂处理的冷鲜牛肉在第12 d时lg（N/（CFU·g-1））分别为5.60,5.40,4.36，均保持新鲜；但在第15 d时，经质量分数为1%的壳聚糖保鲜剂处理的冷鲜牛肉，lg（N/（CFU·g-1））为6.18，已变质；而另外两组为5.89和5.56，尚未变质。可见，经不同质量分数的壳聚糖保鲜剂处理的冷鲜牛肉，其菌落总数的变化趋势随保鲜剂用量的增加而减缓。

4）茶多酚对冷鲜牛肉菌落总数的影响

冷鲜牛肉经过3种不同质量分数的茶多酚保鲜剂处理后，菌落总数随储存时间的变化情况如图4所示。

图4 茶多酚对冷鲜牛肉菌落总数的影响 Fig.4 Effect of tea polyphenols on total bacterial count of chilled beef

式中：N为样品中菌落数；

3）壳聚糖对冷鲜牛肉菌落总数的影响

冷鲜牛肉经过3种不同体积分数的肉桂精油保鲜剂处理，菌落总数随储存时间的变化情况如图5所示。

图5 肉桂精油对冷鲜牛肉菌落总数的影响 Fig.5 Effect of cinnamon oil on total bacterial count of chilled beef

由图5可以看出，经肉桂精油保鲜剂处理过的冷鲜牛肉，菌落总数变化呈上升趋势，且保鲜效果均优于未处理的。其中，经体积分数为0.5%,1.5%,2.5%的肉桂精油保鲜剂处理的冷鲜牛肉在第12 d时lg（N/（CFU·g-1））分别为5.98,5.90,5.86，均未变质；经体积分数为0.5%、1.5%、2.5%的肉桂精油保鲜剂处理过的冷鲜牛肉在第15 d时，菌落总数超过了国家标准，牛肉变质。经不同浓度的肉桂精油保鲜剂处理过的冷鲜牛肉，其菌落总数在第15 d以内变化趋势基本相同，15 d以后，体积分数为1.5%的一组变化略低于另两组。

2 复合生物保鲜剂参数优化

根据单因素实验结果进行方差分析，分析结果如表3所示。

表3 生物保鲜剂对菌落总数影响的方差分析结果 Table 3 Variance Analysis of the effect of biological preservative on total bacterial count

注：**为非常显著。

自由度溶菌酶nisin壳聚糖茶多酚肉桂精油偏差平方和1.156 0.095 6.443 2.312 0.142 2 2 2 2 2方差0.068 0.048 0.379 0.136 0.071 F值4.220 0.018 6.250 5.050 0.030临界值Fα 3.68 3.68 3.68 3.68 3.68显著性******

根据方差分析结果并结合生物保鲜剂成本及特性，得出壳聚糖、茶多酚、溶菌酶对冷鲜牛肉的菌落总数影响比较显著，利用中心组合理论对试验进行设计，并进行参数优化，以得到复合保鲜剂的最佳复合比例 [29]。

2.1 实验安排与结果

2.1.1 实验因素边界值

根据单因素实验结果，确定符合保鲜剂的种类及质量分数边界值如表4所示。

表4 复合生物保鲜剂实验因素及边界值 Table 4 Experimental factors and boundary value of compound biological antistaling agent

因素A：壳聚糖质量分数B：茶多酚质量分数C：溶菌酶质量分数最小值/%最大值/%3 1 2 5 2 3

2.1.2 实验安排与结果

利用 Design Expert 8.0.6软件，运用响应面方法（response surface method，RSM）的中心组合设计（central combination design，CCD）理论，自变量为壳聚糖、茶多酚、溶菌酶3个因素，以菌落总数为响应值进行实验设计[29]，实验安排与结果见表5。

表5 实验安排与结果 Table 5 Arrangement and result of experiment

实验号01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 A/%B/%C/%3 5 3 5 3 5 3 5 1 1 2 2 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 2.32 5.68 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 1.5 1.5 0.66 2.34 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 2.5 2.5 2.5 2.5 1.66 3.34 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 lg（N/（CFU·g-1））5.09 4.91 4.99 4.96 5.28 5.46 5.48 5.53 5.40 5.32 5.57 5.43 5.59 5.80 5.34 5.64 5.82 5.42 5.67 5.81

2.2 复合保鲜剂对冷鲜牛肉菌落总数影响的回归方程及响应面优化

2.2.1 回归分析及回归模型的建立

根据实验方案对冷鲜肉进行处理，贮存18 d后分别对20组试样的菌落总数值进行测定。采用Design Expert 8.0.6软件对表5数据进行回归分析，其中A,B,C分别表示壳聚糖、茶多酚、溶菌酶保鲜液的质量分数，经过分析，得到了多元二次回归方程为：

为了检验方程的显著性，对所建立的回归方程进行了方差分析，分析结果如表6所示。分析结果表明，回归模型的P值为0.004 2＜0.01，表明所建立的回归方程具有显著性，能够很好地反映实验结果，r=0.945 5＞r0.01(3,9)=0.800，说明实验误差较小，实验数据可靠。分析结果表明方程拟合效果较好，方程可以比较准确地预测保鲜剂作用下冷鲜牛肉的菌落总数变化规律。同时，3种保鲜剂对菌落总数的影响均具有显著性，且存在这一定的交互作用[30-32]。

表6 方差分析结果 Table 6 Results of variance analysis

注：**为非常显著。

方差来源模型P值A B C A B显著性********AC BC A2 B2 C2残差失拟项纯误差总和总和0.84 9.60×10-4 1.748×10-5 0.34 5.00×10-5 2.40×10-2 1.30×10-2 0.34 0.16 1.80×10-2 0.60 0.40 0.20 1.44自由度9 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 5 5 1 9均方9.33×10-2 9.60×10-4 1.748×10-5 0.34 5.00×10-5 2.40×10-2 1.30×10-2 0.34 0.16 1.80×10-2 0.06 0.08 0.04—F值1.55 1.60×10-2 2.913×10-4 3.66×10-2 8.30×10-2 0.40 0.13 3.82×10-2 2.62×10-1 0.30—2.40 0.004 2 0.009 6 0.003 5 0.001 1 0.382 4 0.247 8 0.210 0 0.570 0 0.136 3 0.593 4—2.620 0— —— —

2.2.2 响应曲面分析与优化

采用Design Expert 8.0.6软件分析，多元回归拟合得出3个因素壳聚糖、茶多酚、溶菌酶对冷鲜牛肉的菌落总数的响应面分析优化结果如图7所示。

图7 实验因素的交互作用对冷鲜牛肉的菌落总数的响应面曲线及等高线图 Fig.7 Response surface curve and contour map of the interaction of experimental factors on total bacterial count of chilled beef

优化结果表明溶菌酶与壳聚糖的交互作用对菌落总数的影响最为显著，响应面曲面较陡，菌落总数的数值随着保鲜剂浓度的增加而发生不同程度的降低，与方差分析结果一致；各因素间的交互作用的强弱可通过等高线图的形状反映出来，当交互作用较弱时，等高线呈现为圆形；当交互作用较强时，等高线呈椭圆形[33]。由图7可知，茶多酚与溶菌酶、壳聚糖与溶菌酶的交互作用对冷鲜肉菌落总数的影响较强，壳聚糖与茶多酚的交互作用较弱。对所建立的回归方程进行求导，并令其一阶导数为0，求得A=0.75%，B=1.29%，C=2.91%，即3种生物保鲜剂最佳配比是质量分数为0.75%的壳聚糖、 1.29%的茶多酚、2.91%溶菌酶。此时回归方程具有极大值，lg（N/（CFU·g-1））为5.61，与实验值比较接近，说明所建立的回归方程能够很好地反映实验规律。

3 结论

研究了在实验室条件下，利用溶菌酶、nisin、壳聚糖、茶多酚、肉桂精油5种生物保鲜剂对冷鲜牛肉进行处理，分别在贮存的第3,6,9,12,15,18 d对试样的菌落总数进行测定。经过测定，在第12 d时，保鲜剂处理过的冷鲜牛肉在常温下仍较新鲜；到第15 d时，出现了不同程度的变质；到第18 d时全部腐败变质。通过单因素实验结果分析，在室温下进行了复合保鲜剂保鲜实验，并在第18 d测定冷鲜牛肉的菌落总数，根据实验结果，经保鲜剂处理过的冷鲜肉基本保持新鲜，说明复合保鲜剂加强了单一保鲜剂的保鲜效果，有效地延长了冷鲜牛肉的货架期。通过回归方程和响应面分析，得出了复合保鲜剂的最佳比例为质量分数是0.75%的壳聚糖、1.29%的茶多酚、2.91%的溶菌酶。

参考文献：

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里帕对阿尔恰托的借鉴多数会坦诚地写明出处。比如在1611年版《图像学》中，明确标示出自《徽志集》的拟人形象就有：第308页的“Lascivia”（纵欲）方案 A，出自《徽志集》LXXIX（79,1-6）；第 443页的“Prudenza”（谨慎）方案B，摘引《徽志集》CCX（210,1-2）与 XX（20,1-4）共两处；页 526的“Vendetta”（复仇）方案 B，引《徽志集》CLXXIII（173,1-6）；第540页的“Virtùnella medaglia di Lucio Vero”（卢西斯皇帝像章上的美德），引用《徽志集》XIV（14,1-4）；等等。

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“行动元模式”将一个文本中出现的所有角色都归结为六种行动元，这六种行动元属于三对相互对立的范畴，即客体与主体、接受者与发送者、障碍者与帮助者。其关系图示如下：

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