姜，属姜科薯芋类多年生宿根草本植物，是传统的食用和药用植物，也是古老的香料和化妆工业的天然原料［1-3］.作为中药材之一，中医认为姜性属味辛，微热［4］，有解表散寒，温中止痛，化痰止咳，助消化，利分泌，解毒之功效［5-7］.现代药理研究显示，生姜具有促进消化液分泌、保肝利胆、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎、抗微生物、抗辐射、保护心血管等作用［8-11］.生姜中主要含有的功能性物质中，姜辣素类物质含量较高［12-13］，本实验对不同产地的生姜及相关部位的姜辣素含量进行测定，并对其方法学进行验证，以建立能反映生姜质量的含量控制方法.

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津AUW 220D十万分之一电子分析天平；梅特勒ME204万分之一电子分析天平；Agilent 1260 InfinityⅡ高效液相色谱仪（包括在线脱气机，二元泵，紫外检测器，自动进样器、柱温箱，Chem.Station色谱工作站）；常州智博瑞HH-6数显恒温水浴锅；昆山KQ-500E超声清洗仪.

1.2 试药

乙腈为色谱纯；甲醇、甲酸均为分析纯；水为娃哈哈纯净水；6-姜辣素对照品（批号111833-201102）；8-姜酚对照品（批号111993-201601）和10-姜酚对照品（批号111994-201501），均购自中国食品药品检定研究院；生姜药材购自安徽、山东、河南、云南等7个不同产地.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈（B）-0.1%甲酸水溶液（A），按表1进行梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长282 nm，柱温35℃；进样量10 μL.

使用Primer 5程序（https://frodo.wi.mit.edu/）设计PCR引物，对基因组DNA进行PCR扩增，在ABI 3130 DNA分析仪上进行双向DNA Sanger测序验证所有发现的突变。

 

表1 流动相梯度洗脱程序Tab.1 Gradient elution program

  

时间/min 0 10 15流动相A/%55 55 52流动相B/%45 45 48时间/min 17 38流动相A/%40 40流动相B/%60 60

2.2 对照品溶液的配制

2.4.5 溶液稳定性试验 取同一供试品（山东沂水老姜）溶液，分别于0、1、2、4、8、12、24 h（20℃）时，按色谱条件测定.试验结果表明，6份供试品中6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚含量基本无变化，RSD分别为0.9%、1.7%和1.3%，说明样品溶液于20℃放置24 h稳定性良好.

2.3 供试品溶液的制备

由于MRI的引进，中心相关科室由此带来的病源流失会减少，收容病种的数量和质量会增加，特别是对骨科和心脑血管技术水平的提升起到了积极作用，中心品牌效应得到提升。虽然经济效益对中心的发展至关重要，但追求经济效益不是中心的唯一目标，提高患者认可度，为社会减轻压力是中心应尽的社会责任，也是中心一贯坚持的目标。

2.4 方法学考察

影响一国国债规模的因素是多方面的，其中最重要的是国家的经济发展水平，更高水平的经济总量意味着需要更多的资金进行基础设施项目建设及其他财政支出，同时也就对应着更大规模的国债发行量。此外，一国采取的财政政策也在一定程度上影响着国债的发行量，在紧缩货币政策时期，国家的财政赤字随着缩减，从而也就导致了国债规模的缩减；在宽松财政政策时期，国家拉动内需必然需要增加财政支出，因此财政赤字缺口的增大会扩大该时期国债发行的规模。

2.4.2 精密度试验 准确量取线性溶液④10 μL，连续进样6次，记录色谱图.结果表明6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚峰面积RSD分别为0.26%、0.14%和0.45%，表明该仪器的精密度良好，方法满足检测要求.

 

精准量取各线性溶液，按色谱条件测定（色谱图见图1）.结果表明，6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚分别在1.005～100.5 μg/mL（r=1）、1.001～100.1 μg/mL（r=0.999 9）和0.996 5～99.65 μg/mL（r=0.999 9）范围内线性关系良好.标准曲线方程分别为：

  

图1 混合对照品的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of mixed reference substances

2.4.3 重复性试验 取生姜样品（山东沂水老姜）共6份，每份约1 g，按供试品溶液制备方法操作制备供试品溶液6份，分别按色谱条件测定（色谱图见图2）.结果表明，6份供试品中，6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚含量RSD分别为1.0%、1.2%和1.6%，说明该方法重复性良好.

  

图2 供试品的HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of samples

重晶石取自贵州镇宁，含BaSO4 86.88%，BaCO3 0.22%，SrSO4 0.23%，SrCO3 0.022%，SiO2 11.26%，Fe2O3 0.014%，Al2O3 0.13%；无烟煤由贵州某厂提供，含C 74.02%，SiO2 6.17%，Fe2O3 5.35%，Al2O3 2.16%。制得的重晶石熟料成分分析结果见表1。

2.4.1 线性关系试验 精密量取配好的混合对照品溶液5、5、1、1 mL，分别置10、20、10、100 mL量瓶中，加甲醇稀释至最大刻度，摇匀，作为线性溶液①、②、③和④；再取配好的混合对照品溶液作为线性溶液⑤.

2.4.4 加样回收率试验 准确称定已知含量的生姜（1～2 mm的小块）6份，每份0.5 g，置100 mL圆底烧瓶中，分别准确加入相应量的6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚对照品，按供试品溶液制备方法操作制备供试品溶液，分别按色谱条件测定，记录各色谱峰峰面积，计算平均回收率，结果见表2～表4.结果表明，6-姜辣素的平均回收率（n=6）为99.31%，RSD为1.26%；8-姜酚的平均回收率（n=6）为98.69%，RSD为1.48%；10-姜酚的平均回收率（n=6）为98.55%，RSD为1.44%，方法准确度良好.

 

表2 6-姜辣素加样回收率试验结果Tab.2 Recovery results of 6-gingerol

  

样品含量/μg 475.6 476.2 473.4 477.1 477.3 473.0加入量/μg 452.4 452.4 452.4 452.4 452.4 452.4测得量/μg 932.5 924.7 928.3 923.6 919.0 920.2回收率/%100.99 99.14 100.55 98.70 97.63 98.85平均回收率/%RSD/%99.311.26

 

表3 8-姜酚加样回收率试验结果Tab.3 Recovery results of 8-gingerol

  

样品含量/μg 86.0 86.7 83.9 85.7 84.6 84.9加入量/μg 90.1 90.1 90.1 90.1 90.1 90.1测得量/μg 177.0 176.5 171.5 174.1 172.3 173.9回收率/%101.00 99.67 97.23 98.11 97.34 98.78平均回收率/%RSD/%98.691.48

 

表4 10-姜酚加样回收率试验结果Tab.4 Recovery results of 10-gingerol

  

样品含量/μg 131.0 128.3 130.3 128.3 130.7 129.4加入量/μg 129.5 129.5 129.5 129.5 129.5 129.5测得量/μg 258.4 255.2 256.7 257.6 261.0 254.8回收率/%98.38 97.99 97.61 99.85 100.62 96.83平均回收率/%RSD/%98.551.44

分别精密称定6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚对照品，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品储备液；再分别取对照品储备液2.0 mL，置于同一20 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，得100.54、100.1、99.65 μg/mL的6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚的混合对照品溶液.

将取供试品切成1～2 mm的小块，取约1 g，精准称定，置100 mL圆底烧瓶中，精准加入甲醇50 mL，密塞，称定分量，加热回流30 min，放冷，再称定分量，用甲醇补足减失的分量，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得.

2.5 样品测定

按供试品溶液制备的方法操作制备供试品溶液，分别按色谱条件测定，用回归方程计算各供试品中3种姜酚类成分的含量，结果见表5.

纵观六里屯、阿苏卫、苏家坨的建设垃圾焚烧厂的建设决策过程，民众总是有意无意的被忽视。六里屯垃圾焚烧厂建设过程中居民并没有得到参与得到相关的决策中，只是从规划中得知 要修建一座垃圾焚烧厂；阿苏卫居民则是在去政府办事，在小汤山政府公告栏黑暗角落发现的公示，这些都加剧了群众的不满，因此决策过程公开化、民主化、透明化是一个重要举措。

 

表5 不同产地生姜中姜酚类成分的含量测定结果Tab.5 Content determination results of gingerols in fresh ginger from the different regions

  

产地河南博爱新姜河南博爱老姜河南信阳老姜河南鲁山新姜河南鲁山老姜山东安丘新姜山东安丘老姜山东沂水新姜山东沂水老姜安徽铜陵老姜云南罗平老姜河南博爱新姜姜皮河南博爱新姜姜须河南博爱新姜姜叶6-姜辣素/%0.092 0.101 0.099 0.068 0.077 0.089 0.095 0.085 0.093 0.085 0.094 0.068 0.017 0.009 8-姜酚/%0.019 0.022 0.021 0.016 0.020 0.016 0.022 0.017 0.021 0.019 0.022 0.012 0.002 0 10-姜酚/%0.025 0.030 0.028 0.025 0.028 0.029 0.035 0.026 0.032 0.023 0.040 0.019 0.003 0 8、10-姜酚总量/%0.044 0.052 0.049 0.041 0.048 0.045 0.057 0.043 0.053 0.042 0.062 0.031 0.005 0

3 讨论

3.1 色谱条件及测定方法的选择

2015年版《中国药典》规定了生姜中6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚的含量测定方法［14］，其中流速为0.5 mL/min，出峰时间较长，本实验采用1.0 mL/min的流速，分离度较高，同时出峰较快，受干扰较少；另外，2015年版《中国药典》中8-姜酚、10-姜酚的含量测定以6-姜辣素为对照品，相对保留时间定性，用校正因子法进行定量计算，含量测定受仪器设备、环境等因素影响较大［15-16］.本试验中3个指标均以标准曲线法进行定量，结果更加准确和可靠.

3.2 影响生姜成分的因素

测定不同产地的14批生姜及相关部位中6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚的含量，结果表明，不同产地生姜的含量存在一定的差异，说明产地对药材的成分量有一定影响，这可能与产地、生产年限［17］、采收等因素都有一定的关系［18］.分别对4个产地生姜的新姜、老姜中的6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚的含量进行测定，结果表明老姜中的这些成分含量均高于新姜.对河南博爱产地生姜的不同部位进行分析，其中，姜皮中6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚的含量高于姜须和姜叶，而姜须和姜叶中姜酚类成分含量很低.

通过以上系列的含量测定方法学验证及样品测定结果，表明该方法准确、可靠、重现性好，能快速有效地测定生姜及不同部位中姜酚类的含量，为评价生姜的质量提供参考.

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