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胶红酵母的成分及其对刺参免疫力和抗氧化能力的影响

更新时间:2016-07-05

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刺参是我国沿海海域主要的养殖品种之一。随着海参养殖的快速发展,不规范问题的影响逐渐增大,海参的病害问题日益突出,严重制约了该产业的快速发展[1]。目前,预防刺参疾病最有效的方法是使用抗生素,但是这会带来一系列严重的问题,例如耐药性、食品安全和环境污染等[2]。而益生菌可以通过改善刺参体内肠道菌群和刺激免疫系统而达到预防疾病的目的。

红酵母因其含有丰富的营养物质,已经作为一种新型的功能饵料添加剂添加在饲料中,在水产养殖领域得到了初步的应用[3]。研究表明,饵料中添加海洋红酵母不仅能提高幼参肠道消化酶活力,而且能刺激幼参的非特异性免疫反应[4]。徐琴等[5]研究表明,粘红酵母可以促进中国对虾的生长和提高非特异性免疫。目前应用较为广泛的是海洋红酵母,胶红酵母属于海洋红酵母属,胶红酵母是一种单细胞真核生物,属于抗逆性较强的腐生菌,可以促进有益菌生长而抑制有害菌生长,具有较高的营养价值,能够增强机体的免疫力和提高抗氧化能力[6]。但是对其研究比较少,尤其是在刺参养殖方面。

本实验对胶红酵母的营养成分进行分析,研究了其对刺参免疫力及抗氧化能力的影响,以期为胶红酵母在刺参养殖中的应用提供理论基础。

通过查阅国内主要学术类网站,收集到有关退役运动员的相关文献资料。在中国知网以“退役运动员安置”为主题进行搜索,共检索文献209篇,其中期刊文章179篇,硕士论文28篇,博士论文2篇。为了解退役运动员安置现状,对有关举国体制、竞技体育发展现状、退役运动员安置政策及再就业的相关文献进行整理归纳,为本文的分析提供了丰富的理论依据。

1 实 验

1.1 胶红酵母的营养成分分析

胶红酵母为实验室保存菌株,于YPD培养基中180 r/min、28 ℃发酵培养至稳定前期。发酵液中菌体的浓度约为4×108 CFU/mL。

1.1.1 粗营养成分

水分含量采用冷冻干燥法测定;粗蛋白含量采用凯氏定氮法(GB 5009. 5—2010)测定;粗脂肪含量采用索氏抽提法(GB/T 5009.6—2003)测定;灰分含量采用550 ℃灼烧重量法(GB 5009.4—2010)测定;总糖含量采用DNS法测定。

1.1.2 氨基酸

饵料中添加胶红酵母对刺参免疫活性的影响如表3所示。结果表明,在饵料中添加浓度为107 CFU/g 的胶红酵母,刺参体腔液中的ACP、AKP、LZM和T-SOD的活性与空白对照组相比显著提高,且较空白组提高了33.08%、50.00%、107.14%、17.11%。刺参体腔液中的NOS活性与空白对照组相比有所提高,但没有显著性差异。

1.1.3 脂肪酸

样品用氯仿-甲醇提取脂肪酸,脂肪酸提取物在碱性条件下进行皂化和甲酯化。采用气相色谱测定脂肪酸甲酯的含量。结果用归一化法计算。

1.1.4 葡聚糖

[1] 王印庚,荣小军,张春云,等.养殖海参主要疾病及防治技术[J].海洋科学,2005,29(3):1-7.

采用碱-酶法提取葡聚糖[7],用高效液相色谱法测定葡萄糖质量分数,经计算得出胶红酵母中葡聚糖的含量。

1.1.5 β-胡萝卜素

综上所述,在土地整治项目中强化农田防护与生态环境保持工程对于可利用土地面积的增长、耕地环境的可持续发展等方面具有重要的促进作用。

β-胡萝卜素质量分数的测定参照GB/T 5009.83— 2003第一法,利用高效液相色谱测定。

1.1.6 VE

新鲜菌泥经过皂化、提取、洗涤和浓缩后得到提取物。根据GB/T 5009.82—2003第一法,利用高效液相色谱法测定VE质量分数。

1.2 饲养实验

1.2.1 饵料制备

用灭菌海水调整菌液浓度为108 CFU/mL。将菌液与饵料以107 CFU/g混合均匀。饵料每天配制以保证胶红酵母的活性。

1.2.2 实验动物

实验用幼刺参规格一致,均为(4.08±0.42) g,所有刺参经过7 d的基础喂养以适应环境。分到6个23.5 cm×23.5 cm×29 cm水缸中,每个水缸大约有200 g刺参。

1.2.3 实验设计

实验设一个空白对照组和一个实验组。空白对照组用基础饵料喂养,实验组在基础饵料的基础上添加胶红酵母的浓度为107 CFU/mL。每个处理组设3个平行,整个养殖实验周期为60 d。

在整个养殖实验进行过程中,每天17:00投喂饵料,饵料的投喂量为刺参体重的1.5%。实验期间每周换一次全水,中间换一次半水,水温保持在17~20 ℃,pH 7.7~7.9,盐度3.0%~3.3%。用增氧泵间隔充氧,使溶氧量不低于6 mg/L。

基于物联网的智能楼宇综合管理系统技术架构如图1所示。系统总共分为感知层、接入层、传输层、平台层和应用层五个部分。感知层主要指接受智能楼宇系统统一管理的各种终端设施,包括动力设备(空调、新风、排风、排水、电梯等)、信息感知及采集设备(环境传感器、音视频设备)和控制设备等。传输层主要指由楼宇驻地网、互联网(或专线)及移动通信网组成的智能楼宇数据传输和通信管理网络。

1.2.4 样品采集

取样前48 h停止投喂饵料,并清理残饵,使肠道内容物排空。解剖时取刺参体腔液与等量抗凝剂混合,得到抗凝体腔液。所有的样品液氮速冻后置于-80 ℃冰箱中储存。实验前,样品解冻后于3 000g、4 ℃离心10 min,用移液枪取上清液,分装在1.5 mL离心管中,-20 ℃储存,用于后续实验。

1.2.5 免疫酶活性的测定

通过对船舶进出港风险的分析可知:交通因素即船舶密度、交通秩序是首要影响因素。次要影响因素为自然(潮流潮高、横流)、地理(人工航道宽度与水深、转向点)。船员(当事驾驶台人员对控制的响应效率)和船舶(当事船舶对控制的响应效率)影响相对较小。

酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性测定、溶菌酶(LZM)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和一氧化氮合酶(NOS)的活性测定均采用南京建成生物工程研究所的检测试剂盒进行测定。

1.2.6 抗氧化能力的测定

过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总抗氧化能力(T-AOC)活性和丙二醛的含量均采用南京建成生物工程研究所的检测试剂盒进行测定。

1.3 数据分析

实验数据用(平均值±标准差)表示,并采用统计软件SPSS 20.0进行单因素方差分析,不同处理之间采用 Ducan’s多重比较,以P<0.05表示显著差异。

胶红酵母菌体中营养物质丰富,营养价值较高,胶红酵母菌体中粗蛋白质量分数为57.37%,不饱和脂肪酸占总脂肪酸的82.03%。胶红酵母含有丰富的活性物质,包括葡聚糖、β-胡萝卜素和VE,质量分数分别为3.41%、17.05 mg/kg、535.54 mg/kg,是较好的饵料添加剂。添加107 CFU/g 胶红酵母可以显著提高刺参酸性磷酸酶、溶菌酶、碱性磷酸酶、总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性,降低丙二醛的浓度。表明在饵料中添加胶红酵母可以在一定程度上提高刺参的免疫力和抗氧化能力。

2 结果与讨论

2.1 胶红酵母的营养成分分析

2.1.1 粗营养成分

胶红酵母菌粉中粗蛋白、粗脂肪、灰分和总糖质量分数分别为57.37%、2.79%、5.08%和19.44%。蛋白质是胶红酵母菌体细胞的主要组成成分,在饵料中添加酵母可以满足水产养殖动物对生物饵料的蛋白质需求[8]。总糖可以为生物体提供能量,胶红酵母中的总糖主要来源于酵母细胞壁中的葡聚糖,而葡聚糖可以刺激生物体的免疫反应[9]

[3] 汪洋,孔维宝,韩锐,等.红酵母简介[J].生物学通报,2015(4):15-17.

重要性;认真落实交接班制度,做到床旁交接,护士长不定时晨会提问在班护士高风险患者;每周进行2次安全检查,包括门窗设施、保护性用具、患者用物等[5]。

如表1所示,胶红酵母菌体中共检测出18种游离氨基酸。Rhishipal等[10]对海洋酵母的研究表明,鱼类和甲壳类动物生长需要精氨酸、缬氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、色氨酸10种氨基酸,本研究结果表明胶红酵母中这10种氨基酸,可以促进刺参的生长。此外,胶红酵母菌体中还含有丰富的鲜味氨基酸(谷氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸、酪氨酸),占总氨基酸的质量分数为2.43%。

表1 胶红酵母菌体的氨基酸组成 Tab.1 Composition of amino acids in Rhodotorulamucilaginosa

氨基酸w/%氨基酸w/%天冬氨酸0.51±0.02异亮氨酸0.18±0.13苏氨酸0.27±0.02亮氨酸0.44±0.03丝氨酸0.31±0.01酪氨酸0.17±0.02谷氨酸0.65±0.03苯丙氨酸0.29脯氨酸0.28±0.01赖氨酸0.41±0.02甘氨酸0.32±0.01组氨酸0.13±0.01丙氨酸0.49±0.04精氨酸0.45±0.03缬氨酸0.32±0.02胱氨酸0.03±0.01蛋氨酸0.11±0.01色氨酸0.13

研究表明,氨基酸对鱼类的诱食及嗅觉都有极强的刺激作用,尤其是L-氨基酸,已被公认为是引诱鱼、甲壳类、昆虫和其他水产动物最有效的化合物之一[11],在一定程度上具有诱食作用,可以更好地促进海参进食。以上结果表明,此胶红酵母菌体中氨基酸种类丰富,适合于作为饵料添加剂应用于刺参养殖。

2.1.3 脂肪酸组成

张总说,工作应该是愉快的,这样的设计也是一次尝试,希望能够提升仓储物流企业员工在工作时的愉悦感,进而加深员工工作积极性,为企业创造活力;同样,这也是提升中国产品在世界舞台独特性的一次积极尝试,未来随着中鼎集成在全球范围内的布局,这样的独特性也有助于提升中鼎集成在世界舞台的品牌价值,让中鼎集成在智能装备的道路上走的更加广阔和深远,向着世界级的物流设备制造商进发。

如表2所示,胶红酵母菌体中不饱和脂肪酸占总脂肪酸的82.02%,其中C18:1的含量最高,占总脂肪酸的76.40%。不饱和脂肪酸是鱼类生长所必需的能量和营养物质,在机体内具有广泛的生理功能和生物学效应,可以调节免疫系统[12]。但是酵母菌体中缺少EPA和DHA,可以在饵料中添加富含这两种多不饱和脂肪酸的藻类作为补充。此胶红酵母菌体不饱和脂肪酸的含量丰富,可以改善饵料的结构,提高机体的功能。

表2 胶红酵母菌体的脂肪酸组成 Tab.2 Composition of fatty acids in Rhodotorulamucilaginosa

脂肪酸w/%脂肪酸w/%C14:00.85±0.16C18:04.78±0.22C15:00.16C18:176.40±0.66C16:011.28±0.36C18:23.76±0.08C16:10.35±0.01C18:31.27±0.01C17:10.24C24:00.90±0.03

2.1.4 葡聚糖、β-胡萝卜素和VE质量分数

葡聚糖是一种免疫多糖,可以增强巨噬细胞和嗜中性粒细胞的迁移和吞噬,减少肠道炎症反应和增强机体抵抗病原体的能力。葡聚糖是酵母细胞壁的主要成分,胶红酵母中葡聚糖的质量分数为3.41%,约占酵母细胞壁干质量的26%~30%[13]。β-胡萝卜素是VA的前体物质,具有促进机体生长、增强机体免疫力和提高抗氧化能力的作用,胶红酵母中β-胡萝卜素的质量分数为17.05 μg/g。有研究表明,饵料中添加β-胡萝卜素可以促进刺参生长和提高抗氧化能力[14]。目前已经广泛应用于食品工业、保健品及饵料添加剂等方面。VE是一种非酶抗氧化物质,可以保护细胞膜和亚细胞膜不被氧化,胶红酵母中VE的质量分数为535.54 μg/g。研究表明,饵料中添加60.5~98.8 mg/kg的VE能促进花鲈的生长和提高其免疫力[15]。近年来研究还发现,在饵料中添加VE可以提高机体的抗应激能力[16]

图中Rk和Xk分别表示等值内电阻及内电抗;PakQak和Pdk分别表示交流有功、交流无功和直流有功;Vak和θak分别表示交流侧的电压幅值和相位;Vck和θck分别表示等值内电势的幅值和相位;Vdk表示直流侧电压幅值。潮流方程如下:

2.2 免疫活性

游离氨基酸含量根据GB/T 5009.124—2003进行测定。

表3 饵料中添加胶红酵母对刺参免疫活性的影响

Tab.3 Effects of dietary addition of Rhodotorula mucilaginosa on immunity of Apostichopus U/mL

免疫相关酶空白组实验组ACP1.30±0.11a1.73±0.08bAKP0.38±0.09a0.57±0.04bLZM0.28±0.06a0.58±0.02bT-SOD77.16±1.55a90.36±2.85bNOS0.93±0.43a1.66±0.75a注:同一行数据不同字母者表示差异显著(P<0.05),相同字母表示差异不显著(P>0.05),下同。

在刺参的免疫体系中,体液免疫是刺参抵抗外来微生物入侵的主要防御体系。本实验的研究表明,胶红酵母中含有丰富的免疫活性物质,包括葡聚糖、β-胡萝卜素和VE。ACP是机体内巨噬细胞溶菌体的标志酶,AKP是动物体内一种重要的调控酶[17],它们是机体内两种重要的水解酶,参与磷酸基团的转移以及蛋白质的合成代谢。宫魁等[18]研究表明,破壁酵母可以提高ACP活性和AKP活性。本实验的研究结果表明,饵料中添加胶红酵母可以显著提高ACP活性和AKP活性,与其研究结果一致。LZM存在于海参的各个组织中,它的活性是免疫学的重要指标,主要通过作用于被吞噬物质的细胞壁起到杀菌的作用[19]

本实验研究表明,饵料中添加胶红酵母能显著提高LZM活性。SOD通过把转化为H2O2,H2O2再被过氧化氢酶和氧化物酶转化为无害的水,从而达到清除细胞内氧自由基,保护细胞的目的。有研究表明,SOD活性与机体内的免疫水平有着密切的联系。饵料中添加胶红酵母可以在一定程度上提高NOS的活性,但是提高不显著。研究表明,一氧化氮合酶(NOS)位于免疫细胞中,在免疫刺激物等的诱导下大量表达,生成诱导型一氧化氮合酶(iNOS)能催化产生一氧化氮。一氧化氮的生物合成依赖于NOS。在此实验中,可能是由于胶红酵母这种刺激物对于诱导一氧化氮合酶的效果不明显。

2.3 抗氧化活性

如表4所示,饵料中添加胶红酵母能显著提高CAT活性、GSH-PX活性和降低MDA浓度,且CAT活性和GSH-PX活性与空白组相比提高了17.46%和142.86%,MDA浓度较空白组降低了70.00%。但对于T-AOC的提高不显著。生物体内抗氧化防御系统包括抗氧化酶类和抗氧化剂类,其中抗氧化酶类包括CAT和GSH-PX等,它们可以消除体内过量的NOS,将其控制在安全范围内,避免生物体遭到氧化损伤[20]

表4 饵料中添加胶红酵母对刺参抗氧化活性的影响

Tab.4 Effects of dietary addition of Rhodotorula mucilaginosa on antioxidant activity of Apostichopus japonicus

抗氧化参量空白组实验组CAT活性/(U·mL-1)0.63±0.01a0.74±0.03bGSH-PX活性/(U·mL-1)18.36±4.95a44.59±3.00bc(MDA)/(nmol·mL-1)0.70±0.19a0.21±0.09bT-AOC活性/(U·mL-1)9.87±2.43a12.91±1.36a

饵料中添加胶红酵母可以提高CAT活性和GSH-PX活性,可能与胶红酵母中含有大量的β-胡萝卜素和 VE两种具有抗氧化能力的物质有关。MDA是生物体在逆境条件下发生脂质过氧化作用的产物之一,其浓度代表膜脂过氧化作用的强弱[21]。研究表明,MDA浓度越低,说明机体内过氧化产物越少。本实验的结果表明,实验组刺参的MDA含量明显低于空白对照组,说明实验组的海参能够更好地适应环境的变化,提高机体的应激能力。T-AOC是用于衡量机体抗氧化体系的综合性指标,其大小可代表和反应机体对外来刺激的抵抗能力以及机体自由基的代谢状态,主要作用是分解和清除代谢过程中产生的活性氧自由基[22]。饵料中添加胶红酵母对于T-AOC 的提高不显著,说明实验组整个抗氧化系统的抗氧化能力有所提高,但是提高不显著。

3 结 论

可再生能源供电无线通信的最优链路传输策略………………………………………………杜林松,黄川 24-5-06

参考文献:

2、制作讲课文字底稿。语言应当口语化、专业化,描述问题准、让授课对象听得懂,尽量避免书面语言,并对稿件熟读记忆。在授课中,教师讲到理论性的内容时,以及使用过于理论化的语言讲授课程时,课程内容变得枯燥,学员听课难度加大。尽量使用口语化的表述、接地气的表述,学员听课的障碍就会小很多。但是,这不意味着词语的滥用,机具的专业术语仍应该规范地使用,体现严谨的态度。特别是PPT课件,在突出图片、减少文字的背景下,更要注意语言的精炼。

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2.1.2 氨基酸组成

数字货币是一种以电子形式存在的货币,不再像虚拟货币一样局限于网络游戏,而是能够像法币一样购买真实的物品。密码货币是数字货币的重要组成之一,利用严谨的密码学原理进行货币的产生、记账和交易。自从第一个密码货币即比特币诞生后,诸如以太坊、门罗币和零币等一系列密码货币相继面世,密码货币市场呈现井喷式发展;但是密码货币在具有价值的同时,也伴随着一定的风险。分析密码货币的生成和运行原理能够让人们对数字货币有更深的理解,从而做到理性投资。

研究采用的地形资料主要为1964年、1997年河道地形图,少量河道采用1989年、1990年航道图,其中实测河道地形长度约481 km,占模型计算河道总长的92%。其中东江下游及三角洲河道1997年地形资料是目前为止较为系统的成套地形资料(见图1)。

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随着经济的快速发展,我国逐步加大了对城市道路等基础设施的建设力度,对城市经济的发展和居民生活条件的改善起到了重要作用。但是,在道路工程建设过程中不可避免地会对周边的环境造成不利影响,尤其是噪声和扬尘污染。随着上海市对施工噪声和扬尘的管控愈加严格,在采取传统的噪声和扬尘污染防治措施的基础上,应进一步采取更为有效的降噪抑尘措施,保护施工现场周围环境,最大程度地减少城市道路施工噪声和扬尘污染,为公众提供安静、舒适的生活环境,促进国民经济与社会环境协调发展。

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饮马河是汉语的称谓,女真语称之为“伊尔们河”或“伊勒们河”,翻译过来就是“阎王河”。如今,两岸河堤间近千米的宽阔河道,足可证明当年浊流翻滚,咆哮不羁,洪荒之威势如阎王呼啸而来。

张春晓,董琦,张天任,肖珊,王际辉
《大连工业大学学报》2018年第02期文献

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