簇生椒(Capsicum anmuum var . fasciculatum)为茄科辣椒属辣椒的变种，因椒果均较小，又称为小辣椒，是一种世界性蔬菜或调味品[1]。簇生椒在中国的种植面积逐渐扩大，在辣椒产业中占据重要地位。目前，山东鲁西南地区簇生朝天椒栽培面积日益扩大，农业产业结构中占有重要地位，辣椒栽培品种混乱、定名混乱、杂交种同物异名、异物同名现象也逐渐显现，严重干扰了辣椒种业的健康发展。加强种质资源主要农艺性状评价及保护新育品种知识产权是改良和推广辣椒品种的关键，罗本钒[2]利用分子标记法与农艺性状评价法进行了小白菜遗传多样性分析及优良性状鉴定；秦倩等[3]利用SSR标记进行了油橄榄品种表型和品种多样性的聚类分析；朱姝等[4]进行8个水稻抗条纹叶枯病分子标记有效性的验证及评价。插入/缺失多态性(Insertion/deletion，InDel)标记是由于同一位点处的DNA序列在不同个体间发生了核苷酸片段的插入/缺失，根据目标位点两侧的序列设计特异引物进行PCR扩增，扩增片段的长度多态性即是InDel标记[5]，具有带型简单、密度高、变异稳定、多态性强、检测容易等特点。目前，InDel标记技术在番茄、水稻、玉米等作物的种质资源遗传多样性和亲缘关系方面的研究领域已有报道[6-8]，但对于利用InDel标记进行辣椒品种相似度评价的研究尚未见报道。

兴起于20世纪40年代的传播政治经济学是由加拿大学者达拉斯·斯迈斯创立并逐渐发展起来的一支重要思想流派。它关注传播作为一种经济力量对社会的影响以及社会政治、经济权力机构对传播活动的作用。不同于其他类型的传播学研究，传播政治经济学始终强调以一种历史的、制度的方式来批判性地研究传播现象。其理论是以马克思主义政治经济学以及西方马克思主义为起点，提供了一套与西方主流传播学完全不同的理论和概念框架。

本研究利用InDel分子标记对供试的8份商品名不同的簇生朝天椒进行农艺性状构建指纹图谱来评价鲁西南地区簇生朝天椒的品种相似度，对一些地方特有辣椒品种的保护及种子市场的规范具有重要意义。

1 材料和方法

1.1 试验材料

试验材料来自济宁地区商品名不同的簇生朝天椒品种，共计8份，于2016年6月分别到各乡镇进行采样编号(表1)，样品-80 ℃保存，用于基因组DNA的提取。

 

表1 试验材料Tab.1 Experimental materials

  

品种编号SampleNo．品种类别Nameofcategory品种来源NameofsourcesSYJ⁃1簇生朝天椒山东济宁鸡黍镇SYJ⁃2簇生朝天椒山东济宁鸡黍镇SYJ⁃3簇生朝天椒山东济宁鸡黍镇SYJ⁃4簇生朝天椒山东金乡卜集镇SYJ⁃5簇生朝天椒山东金乡卜集镇SYJ⁃6簇生朝天椒山东金乡胡集镇SYJ⁃7簇生朝天椒山东金乡胡集镇SYJ⁃8簇生朝天椒山东金乡胡集镇

1.2 农艺性状评价方法

2016年6月和9月，采用常规方法对鲁西南地区8个商品名不同的簇生朝天椒品种进行株高、果实个数、分枝数、单株簇数、平均每簇果数、叶色、鲜单果重等农艺性状指标进行调查；10月中旬烘干测定样品干质量，并计算干鲜比，果实色价采用GB10783方法测定。

综上所述，异位妊娠患者采用腹腔镜手术治疗效果理想，并发症发生率较低，能改善血清孕酮、VEGF和INH-A水平。

1.3 InDel分子标记评价方法

1.3.1 InDel引物筛选 辣椒基因组DNA提取、质量检测、InDel-PCR扩增程序及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测等参照姜童等[9]的方法进行。供试材料为8个植物学性状差异较大的干制辣椒品种(表2)。引物参照Li等[10]开发的辣椒InDel引物，从12条染色体上共251对InDel引物中筛选出60对InDel引物(图1)，引物由上海Sangon公司合成。

徐艺犟劲上来了，脖子一梗，道：“我不能让您冒险，您不能一个人上去，不就是拿钱去换他手里的拍卖推荐函吗？我去。”

 

表2 用于InDel引物筛选的供试材料Tab.2 The tested materials for the screening of InDel primers

  

品种编号SampleNo．品种名称Nameofvarieties品种类别Nameofcategory品种来源Nameofsources1簇生椒1号簇生椒中国山东2日本三樱椒簇生椒中国山东3长阳簇生椒簇生椒中国湖北4秘鲁王后羊角椒秘鲁5鸡血红羊角椒美国6铁皮椒9号羊角椒美国7北京红羊角椒中国山东8Y20羊角椒韩国

  

图1 60对引物在辣椒染色体物理图谱上的位置Fig.1 Location of 60 pairs primers on the physical map in pepper chromosome

1.3.2 指纹图谱构建 选用筛选的25对InDel引物对8个不同商品名的辣椒品种进行扩增，统计扩增条带数进行指纹图谱构建。

1.4 数据处理与分析

2 结果与分析

2.1 簇生朝天椒农艺性状评价

簇生朝天椒植株农艺性状比较结果显示(表3)，8个品种株高均在79.1～96.4 cm，抗倒伏性较好；分枝数集中在4～5簇；单株簇数最多的品种为SYJ-5，株型紧凑，单株簇数较少的品种为SYJ-6。从平均每簇果数调查来看，8个品种的平均单簇果个数为5个左右；叶色较突出的品种为SYJ-2、SYJ-3、SYJ-6、SYJ-8，表现为深绿色，其他品种均为正常绿色。

本研究对8个不同商品名的簇生朝天椒品种进行基本农艺性状调查，基于表型数据(簇生朝天椒农艺现状UPGMA聚类分析) 与InDel分子标记(簇生朝天椒进行指纹图谱构建)相结合进行了生物学性状差异较小、遗传背景较窄的不同商品名的8个簇生朝天椒的亲缘关系及品种相似度分析，表明该8个不同商品名辣椒品种相似程度较大，同质化严重且存在同物异名现象。本研究结合 InDel分子标记构建指纹图谱数据与农艺性状数据的遗传相似系数矩阵存在极显著正相关，这与Lefebvre等[21]结果相似。由此认为，本研究扩增的InDel DNA片段散布于整个辣椒基因组中，并与本试验的表型性状QTR有很高的关联性。因此，结合簇生朝天椒农艺性状与综合利用InDel分子标记分析，能更准确鉴定、评价鲁西南地区簇生朝天椒品种的相似度，对地方辣椒品种的品质及品种保护具有一定的利用价值，有效地缓解了辣椒栽培品种混乱、定名混乱、种子同质化的现象，有利于种子市场的规范和种业的健康发展。

 

表3 八个朝天椒品种植株农艺性状比较Tab.3 The comparison of agronomic traits among eight clustered pepper varieties

  

品种编号SampleNo．株高/cmPlantheight分枝数/簇Branchnumber单株簇数/簇Clusternumberper单簇果数/个Fruitnumberpercluster叶色LeafcolorSYJ⁃179．1±2．96ab5．11±0．34a7．47±0．60a5．40±0．93a绿 SYJ⁃292．3±1．08a4．62±0．34a6．41±0．35a6．71±1．08a深绿SYJ⁃382．1±2．65ab4．88±0．08a7．74±0．35a5．93±0．90b深绿SYJ⁃483．5±4．18ab4．93±0．34a7．21±0．92a4．87±0．36a绿 SYJ⁃588．1±0．95ab5．07±0．61a8．47±0．60a4．61±0．61a绿 SYJ⁃696．4±2．93ab4．63±0．35a6．07±0．95ab6．23±0．35a深绿SYJ⁃783．8±2．74ab4．68±0．36a7．22±0．59b5．55±0．35a绿 SYJ⁃884．8±1．29a4．76±0．35a8．11±0．67a5．29±0．35a深绿

 

表4 八个朝天椒品种果实性状比较Tab.4 The comparison of fruit traits among eight clustered pepper varieties

  

品种编号SampleNo．果长/cmFruitlong果宽/cmFruitwide鲜单果重/gFreshfruitweight干单果重/gDryfruitweight色价Colorvalue折合干椒产量/(kg/hm2)Equivalentyield干鲜比FreshratioSYJ⁃15．86±0．07ab1．43±0．062ab2．88±0．012b0．73±0．15c11．4±0．08ab4821．60±0．29b3．9SYJ⁃25．75±0．20b1．38±0．072ab2．99±0．100a0．79±0．22a12．6±0．06b5248．50±0．17a3．8SYJ⁃36．12±0．32ab1．41±0．036bc2．63±0．098b0．71±0．31c12．1±0．15ab4669．20±0．04b3．7SYJ⁃45．76±0．09ab1．41±0．035bc2．79±0．056b0．72±0．09c11．7±0．13ab4726．65±0．14b3．9SYJ⁃55．78±0．38a1．36±0．035ab2．60±0．012b0．70±0．09c11．6±0．09ab4517．55±0．06b3．7SYJ⁃65．78±0．12ab1．37±0．061ab2．95±0．071a0．77±0．04a11．4±0．07ab5165．10±0．37a3．8SYJ⁃75．90±0．35ab1．39±0．092bc2．68±0．030b0．68±0．12c12．2±0．40a4412．85±0．09b3．9SYJ⁃86．07±0．25ab1．41±0．092ab2．84±0．011b0．74±0．07c11．5±0．01ab5038．20±0．07b3．8

2.2 InDel分子标记评价

[10] Li W P，Cheng J W，Wu Z M，et al. An InDel-based linkage map of hot pepper (Capsicum annuum)[J]. Molecular Breeding，2015，35(1)：32-34.

2.2.2 指纹图谱构建 本试验用25对具有多态性的引物在8个不同商品名的簇生朝天椒材料检测的部分引物扩增图谱如图3，4所示。这25 对InDel引物在8份簇生辣椒材料中共扩增出 160个位点，扩增片段大小在 130～350 bp。只有引物CIDH267在本研究中8份簇生辣椒材料产生不同的位点，扩增片段大小在180～200 bp(图3)，其中，24对InDel引物扩增检测中无位点差异，部分引物扩增图谱见图4。采用25对InDel引物对8个辣椒品种构建指纹图谱(表6)，通过指纹图谱看出，只有SYJ-2和SYJ-6在引物CIDH267中与其他6个辣椒品种存在1个位点差异。参照中华人民共和国农业行业标准-玉米、水稻品种鉴定-DNA指纹方法判定标准(NY/T1433-2007)，结果表明，这8个不同商品名的簇生朝天椒为疑似同种。

 

表5 InDel标记信息Tab.5 The information of InDel marker primers

  

编号标记名称编号标记名称编号标记名称编号标记名称编号标记名称No．TagnameNo．TagnameNo．TagnameNo．TagnameNo．Tagname1CIDH286CIDH80011CIDH60216CIDH27021CIDH3252CIDH8487CIDH77612CIDH13117CIDH26722CIDH3513CIDH88CIDH36013CIDH37318CIDH30723CIDH8594CIDH2939CIDH58014CIDH30219CIDH20024CIDH9085CIDH44010CIDH515CIDH42620CIDH63425CIDH202

  

1～8.生物学性状差异较大、亲缘关系较远的8份材料。1-8.The variety of biological properties of the larger differences and distant relationship between the eight materials.

 

图2 部分InDel引物的筛选结果Fig.2 The polymorphism screening result of some InDel primer pairs

  

M.Marker；1～8依次是朝天椒品种SYJ-1～SYJ-8。图4同。M.Marker；1-8 is the variety of the clustered pepperSYJ-1-SYJ-8. The same as Fig.4.

 

图3 InDel引物CIDH267在8个朝天椒品种上的扩增检测Fig.3 The electrophoretic pattern of eight clustered peppercultivars with primer CIDH267

  

Ⅰ.CIDH28；Ⅱ.CIDH776；Ⅲ.CIDH602；Ⅳ.CIDH360。

 

图4 部分InDel引物在8个朝天椒品种上的扩增检测Fig.4 The electrophoretic pattern of eight clustered pepper with partial primer

[6] 申 璐，沈火林，柴 敏，等. 采用InDel和SSR标记分析番茄品种基因组DNA多态性[J]. 中国农业大学学报，2011，16(2)：34-42.

 

表6 簇生朝天椒品种InDel指纹图谱Tab.6 The digital fingerprints of InDel markers on clustered pepper

  

引物Primer品种编号SampleNo．SYJ⁃2SYJ⁃4SYJ⁃6SYJ⁃1SYJ⁃3SYJ⁃5SYJ⁃7SYJ⁃8CIDH2800000000CIDH84800000000CIDH800000000CIDH29300000000CIDH44000000000CIDH80000000000CIDH77600000000CIDH36000000000CIDH580--------CIDH5--------CIDH602--------CIDH13100000000CIDH37300000000CIDH302--------CIDH42600000000CIDH27000000000CIDH26710100000CIDH30700000000CIDH20000000000CIDH63400000000CIDH32500000000CIDH35100000000CIDH85900000000CIDH908--------CIDH20200000000

InDel标记的数据记录用Microsoft Excel进行数据整理。根据电泳结果，扩增材料在同一引物中，位点较高的记1，位点较低重复出现的记0，条带缺失记-。用SPSS 14.0软件完成试验统计和UPGMA聚类分析。

  

图5 簇生朝天椒农艺性状UPGMA聚类分析Fig.5 UPGMA method cluster analysis for eight clustered pepper varieties based on agronomic traits

3 讨论与结论

随着辣椒栽培面积的不断扩大，品种的种类也不断更新，遗传基础变得越来越狭窄，以形态形状区分难度大，新品种的新颖性和特异性鉴定缺少凭据，种子领域现状也存在同物异名问题，给种子市场管理提出了挑战。张宝玺等[11]在“十一五”期间提出，辣椒品种的同质化严重，尽管培育的品种很多，而且市场上的辣椒品种性状相近、同物异名的现象屡见不鲜。目前，同质化或相似度评价方法主要有品种特性鉴定和分子标记鉴定，品种特性鉴定是法定的品种鉴定方法，具有准确性、科学性、能更直观地揭示品种间的来源差异等优点，但也存在工作量大、成本高、时间长、结果滞后等问题。而DNA指纹图谱技术则具有高效、准确、不受环境条件影响、实验操作简单、能够量化地体现出品种间的差异等优点。因此，将这2种方法结合起来进行分析，可以相互验证、相互补充，更能充分地揭示出地方品种(品系)的相似度及亲缘关系。

利用品种特性与分子标记进行植物不同物种间亲缘关系分析研究已被广泛应用。包文泉等[12]基于SSR标记的仁用杏主栽品种鉴别和指纹图谱构建；王庆彪等[13]对中国50个甘蓝代表品种进行EST-SSR指纹图谱的构建；张婉等[14]对白菜品种进行SSR指纹图谱数据库的构建。通过构建InDel 指纹图谱从分子层面上更精确、清晰地对品种相似性进行比较和研究。周延清等[15]对河南栽培大豆的RAPD品种鉴定和聚类分析；宋小丽[16]进行了亲缘关系密切的12个辣椒品种的 AFLP鉴定；王明明等[17]进行了木瓜属品种亲缘关系的SRAP分析。随着近年来测序技术的不断进步，分子标记InDel技术自产生以来，因有带型简单、密度高、变异稳定、多态性强、检测容易等优点在植物指纹构建及种质资源遗传多样性的鉴定和分类研究得到广泛的应用。Wang等[18] 基于InDel和SSR序列遗传连锁图谱进行芜菁拟染色体汇编；梁爽[19]利用InDel和SSR整合大白菜分子遗传图谱；胡俏强等[20]进行了糯玉米杂交种纯度InDel分子标记鉴定与田间鉴定的相关性分析，结果显示，InDel标记鉴定结果与田间鉴定结果呈极显著正相关，可用于糯玉米杂交种纯度鉴定。而分子标记InDel在辣椒亲缘关系分析和品种相似度分析方面用的不是很广泛，利用品种特性与构建InDel指纹图谱结合对品种相似性进行比较和研究未见相关的报道。

簇生朝天椒品种果实性状比较结果显示(表4)，8个品种果长为5.75～6.12 cm，SYJ-2和SYJ-5的果长存在显著差异，各品种辣椒果宽为1.36～1.43 cm，8个品种的果宽差异不显著。SYJ-2、SYJ-6的折合干椒产量分别为5 248.50，5 165.10 kg/hm2，且均显著高于其他品种(4 412.85～5 038.20 kg/hm2)。

参考文献：

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沙沟沟道特征为形成区、流通区纵坡坡降较大，堆积区逐渐变缓，沟道宽度在形成区较宽，流通区变窄，为治理工程设置拦挡坝提供了有利条件，在流通区设置拦挡坝长度相对较小，且这些沟段沟道纵坡较缓，上游为开阔的宽谷地带，修建拦挡工程其库容较大，对泥石流峰值流量的调节作用效果显著[5]。

[2] 罗本钒.小白菜遗传多样性分析及优良性状鉴定与利用[M].武汉：华中农业大学，2015.

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[4] 朱 姝，张亚东，朱 镇，等. 8个水稻抗条纹叶枯病分子标记有效性的验证及评价[J]. 华北农学报，2012，27(6)：146-151.

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同样是金枝玉叶的段誉，第一次来燕子坞吃的那些：“茭白虾仁”“龙井茶叶鸡丁”，看看就教人馋涎欲滴。段誉的当时心理评判是这样的：“鱼虾肉食之中混以花瓣鲜果，色彩既美，自别有天然清香。”

2.2.3 八个簇生朝天椒品种相似度评价 选取株高、分枝数、单株簇数、平均每簇果数、果长、果肩径、单鲜果重、单干果重、色价等级作为评价指标做数据均一化处理，利用SPSS 14.0软件处理系统进行表型性状UPGMA聚类分析(图5)，在遗传相似系数为0.78时聚为一个大类，包含8个品种；当遗传相似系数为0.58时聚为3类，第一类包含4个品种(SYJ-1、 SYJ-3 、SYJ-4、 SYJ-7 )，第二类包含3个品种(SYJ-2、SYJ-6、SYJ-8)，第三类只有品种SYJ-5；当遗传相似系数为0.4时聚为5类，第一类包含3个品种(SYJ-1、 SYJ-3 、SYJ-4)，第二类为品种SYJ-7，第三类为品种SYJ-2和SYJ-6，第四类为品种SYJ-8，第五类只有品种SYJ-5；当遗传相似系数为0.17时聚为6类，第一类为品种SYJ-1，第二类包含品种SYJ-3和SYJ-4，第三类为品种SYJ-7，第四类包含品种SYJ-2和SYJ-6，第五类为品种SYJ-8，第六类只有品种SYJ-5。表明该8个不同商品名辣椒品种形态相似程度大，亲缘关系相对较近，品种相似度较高。

[7] 姚国新，黄文超. 利用水稻籼粳分化InDel标记鉴定育种材料的籼粳属性[J]. 杂交水稻，2013，28(3)：53-57.

为减少专家主观色彩，选用三标度法确定判断矩阵A，经数学变换为间接判断矩阵及拟优一致矩阵，应用MATLAB中eig函数得到最大特征根及相应的最大特征向量，经归一化处理得到各因子相对于上一层相关指标的权重值。

[8] 葛 敏，蒋 璐，张晓琳，等. 利用Insertion/Deletion(InDel)分子标记检测玉米互交种混杂的原理及应用[J]. 分子植物育种，2013，11(1)：37-47.

[9] 姜 童，王 辉，林 多，等. 干制辣椒雄性不育系与保持系间多态性InDel标记的筛选[J]. 北方园艺，2017(15)：24-28.

今早出门时，孩子忽然对我说，她中午和同学去探望小学班主任，班主任要留她们在家吃饭。看着孩子欢天喜地的样子，我忽然心头一热，想起了我小学四五年级时的班主任汪老师。

2.2.1 InDel 引物筛选 试验中通过60对InDel引物在生物学性状差异较大、亲缘关系较远的8份材料进行PCR扩增，并进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，结果表明，其中25 对引物具有多态性(表5)，部分引物的筛选结果如图2所示，引物CIDH908、CIDH426有多态性扩增，所有材料均能扩增出清晰的条带且多态性好，稳定性高；本试验所用引物为以上步骤筛选出的25对具有多态性的InDel引物生物学性状差异较小、遗传背景较窄的8个不同商品名的簇生朝天椒进行指纹图谱构建。

[11] 张宝玺，王立浩，毛胜利，等. “十一五”我国辣椒遗传育种研究进展[J]. 中国蔬菜，2010，1(24)：1-9.

其中，Pfa为虚警概率，T为检测门限，u和v分别为Fisher分布参数，通过设置合理的CFAR检测恒虚警概率Pfa，可通过数值求解的方法求解出具体的检测门限T.对于由式(5)得到的MPWF检测量z，目标判决过程可表示为：

[12] 包文泉，乌云塔娜，赵 罕，等. 基于SSR标记的仁用杏主栽品种鉴别和指纹图谱构建[J]. 西北农林科技大学学报：自然科学版，2017，5(6)：2-6.

谢林认为自然是可见的精神，精神是不可见的自然，自然是没有认识到自己乃是精神的精神；要寻找自然世界的终极答案应当向人类自身的内心深处探寻。通过理性反思，自然最后完全回归自我。因而标题中的Klosterbruder可以理解为脱离社会现实、返回内心寻找本原、为艺术而艺术的艺术家的象征，或者说作者认为从某种意义上讲，艺术家也是修士。

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小瓶虽然封着口，可由于没封严实，瓶中灌满了水，倒出水后又倒出一张泡软了的纸条，纸条上的字迹已模糊不清。王敬凯迅即回到局里，经过技术处理，看到如下一行字迹：

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