类胡萝卜素是一类天然脂溶性的色素，在人体内的代谢物包括视黄醛、视黄醇等（何强强等，2011）。研究表明类胡萝卜素在增强人体的免疫功能等方面有很重要的作用，在预防癌症、心血管疾病、骨质疏松症及其它慢性疾病方面效果显著（LaRowe et al，2005；Rao et al，2007；吴小芬等，2016）。类胡萝卜素在鱼、虾、贝、蟹等重要的海洋动物中都有分布，特别是牡蛎、扇贝、贻贝等双壳纲中含量更高（Ackman et al，1989；张倩等，2011），主要起到改善卵质、减少胚胎发育死亡率、抗氧化、着色等作用（刘金海等，2002；高前欣，2005）。贝类体内缺乏相应的酶系，自身不能合成类胡萝卜素，其体内丰富的类胡萝卜素来自于所摄食的含有类胡萝卜素的藻类或者微生物，经代谢吸收，最后富集在体内（Britton et al，1995）。在虾夷扇贝（Patinopecten yessoensis） （李宁，2009） 和华贵栉孔扇贝 （Chlamys nobilis）（Zheng et al，2010）的闭壳肌组织、三角帆蚌（Hyriopsis cumingii） （闻海波 等，2012）的外套膜中央膜、边缘膜、性腺、鳃丝及肝脏5种组织以及马氏珠母贝（Pinctada martensii） （吴小芬等，2016）的鳃、肝胰腺、闭壳肌、外套膜边缘膜与外套膜中央膜组织中已有类胡萝卜素含量比较的相关报道。目前国内有关织锦巴非蛤的研究多涉及生态、生理学特性及食品应用等方面（肖湘 等，2002；王万东，2006；赖增隆，2009），而有关不同组织及性别总类胡萝卜素的研究至今未见报道。

织锦巴非蛤（Paphia textzle）属于软体动物门（Mollusca）、瓣鳃纲 （Lamellibranchia）、帘蛤目（Veneroida）、帘蛤科 （Veneridae）、巴非蛤属（Paphia），主要分布于中国福建沿海、广东、广西和台湾等地（栗志民等，2011）。该贝类营养丰富、肉味鲜美，因而受到广大消费者的喜爱，是我国东南沿海著名的海产经济贝类之一（纪燕如等，2011）。

随着教育技术的发展，传统课堂正在逐步被混合式学习方式所取代。混合式学习，就是要把传统学习方式的优势和网络化学习的优势结合起来，既要发挥教师引导、启发、监控教学过程的主导作用，又要充分体现学生作为学习过程主体的主动性、积极性与创造性[3]。这种将网络学习与面对面学习结合起来的方式大大激发了学生的学习热情。

本研究分析了雌雄织锦巴非蛤斧足、外套膜、闭壳肌、鳃、性腺5个组织的总类胡萝卜素含量，并对各组织中的类胡萝卜素含量的差异情况进行比较，探索织锦巴非蛤体内类胡萝卜素分布规律，为下一步织锦巴非蛤的品质鉴定、营养成分分析、加工利用与遗传育种研究提供参考资料。

1 材料与方法

1.1 实验材料

织锦巴非蛤于2017年2月购自福建省厦门市水产市场，体重（19.10±2.35）g，壳长（54.22±2.07）mm、壳宽（31.57±1.13）mm、壳高（20.37±1.02）mm。随机选取100个织锦巴非蛤样品用于本实验分析。

1.2 实验方案

纳入标准：①年龄40岁以上明确诊断为年龄相关性白内障的患者；②眼部有干燥感、异物感、烧灼感、疲劳感、不适感、视力波动等主观症状之一；③裂隙灯显微镜检查发现睑缘有以下改变中的2项：睑缘充血、睑缘毛细血管扩张、睑缘增厚或不规则以及睑板腺体开口凸起伴分泌物呈白色颗粒状、奶油状或牙膏状、睑缘皮肤黏膜交界线（Marx线）移位。排除标准：①患有其他眼病如眼部过敏、术前持续使用眼局部药物的、有眼部手术史或者眼球外伤史的患者；②术前MGD临床分级[2]为4级的患者。

织锦巴非蛤的斧足（Fo）、外套膜（Ma）、闭壳肌（Ad）、鳃（Gi）及性腺（Go）5种组织的雌、雄比较结果如图2所示，除了性腺之外，各组织之间的总类胡萝卜素含量没有显著性差异（P＞0.05），精巢中的总类胡萝卜素含量显著高于卵巢（P＜0.01）。

1.2.2 织锦巴非蛤雌雄鉴别

1.2.3 总类胡萝卜素的提取

采用镜检法鉴定织锦巴非蛤的雌雄。取少许织锦巴非蛤的性腺涂在事先滴有一滴蒸馏水的载玻片上，直接放在显微镜（Olympus BX-53）下进行观察。

对100个织锦巴非蛤的斧足（Fo）、外套膜（Ma）、闭壳肌 （Ad）、鳃 （Gi） 及性腺 （Go） 5种组织总类胡萝卜素含量进行测量，然后按照总的（不分雌雄）、雌性、雄性进行各组织总类胡萝卜素含量比较，结果如表1所示。总的来讲，各组织中总类胡萝卜素的含量依次为：斧足＞性腺＞鳃＞外套膜＞闭壳肌，除了鳃与性腺之间没有显著性差异外（P＞0.05），其它各组织之间均存在极显著差异（P＜0.01），其中斧足中含量最高，为（19.45±0.80） μg/g，闭壳肌中含量最低，为（1.71±0.12）μg/g。雌、雄各组织中总类胡萝卜素含量的分布基本一致，但在雄性个体精巢中总类胡萝卜素含量明显高于外套膜中的含量，雌性个体卵巢中总类胡萝卜素含量低于外套膜中的含量。

1.3 数据处理

将织锦巴非蛤的精巢和卵巢处理后在显微镜下观察，在40倍物镜下可以看到清晰的精子的形态或者椭圆形的卵细胞（如图1所示）。

2 结果与分析

2.1 织锦巴非蛤雌雄鉴定结果

采用Excel 2013软件进行数据统计分析。数据结果以平均值±标准误（Mean±SE）表示，P＜0.05表示有显著性差异，P＞0.05表示无显著性差异，采用Excel 2013和Photoshop软件作图。

因此，要记住这3种面包的配方，首先要记住法棍面包的配方，通常酵母和改良剂的用量是一定的，食盐的用量在法棍面包中是2%左右，水的添加量主要看面粉的吸水率。在此基础上添加一定比例的油、糖、蛋、乳制品可以制作出不同的面包品种，或者说很多面包品种的基础面团配方都是在油、糖、蛋、乳制品上做比例的调整，并通过添加馅料，改变面包口味，进而变化出很多不同的面包品种。

2.2 织锦巴非蛤不同组织总类胡萝卜素含量差异比较分析

总类胡萝卜素提取方法参阅文献（杨叶欣等，2012）研究并略有改动，具体方法步骤如下：1）称取织锦巴非蛤各组织0.1 g左右，加入等量的无水硫酸钠和适量的无水乙醇（分析纯）充分匀浆；2）将匀浆液用无水乙醇润洗两次匀浆管，一并转移到10 mL离心管中，加无水乙醇定容至8 mL，用锡箔纸避光密封，在4℃冰箱过夜；3）用4 500 r/min低温离心 10 min（Centrifuge 5 430 R，Eppendorf公司），取上清液；4）用紫外分光光度计（UV-1200，MAPADA）测定在480 nm处的吸光值，代入公式算出总类胡萝卜素含量。总类胡萝卜素含量（μg/g） =A480×K××G，其中：A480为480 nm处吸光度值，K为常数（104），V为提取液体积（mL），为1 cm光程的比色杯中1 g/L质量浓度溶质的理论吸收值（2 500），G为样品质量（g）。

1.2.1 取样

  

图1 织锦巴非蛤雌雄鉴定

 

注：白色箭头指向精子，黑色箭头指向卵细胞

 

表1 织锦巴非蛤不同组织总类胡萝卜素含量比较结果

  

注：标有不同小写字母者表示横向组间差异显著（P＜0.05），标有相同小写字母者表示横向组间差异不显著（P＞0.05）。

 

组织 斧足 性腺 鳃 外套膜 闭壳肌雌性 （Mean±SE） 16.52±1.31a 3.61±0.45c 6.79±0.81b 4.77±0.40c 1.23±0.24d雄性 （Mean±SE） 18.89±1.07a 11.01±1.28b 8.77±0.56b 5.51±0.33c 1.66±0.13d总的 （Mean±SE） 19.45±0.80a 9.87±0.78b 8.16±0.40b 6.20±0.29c 1.71±0.12d变异系数CV 40.92% 78.23% 48.09% 46.88% 72.16%

2.3 织锦巴非蛤各组织总类胡萝卜素含量雌、雄比较结果

随机选取健康的织锦巴非蛤，用手术刀切断织锦巴非蛤的前后闭壳肌，打开壳后剪取斧足、外套膜、闭壳肌、鳃和性腺组织。

Monographic report: Clinical features and treatment effect of ischemic stroke

3 讨论

类胡萝卜素是一种广泛分布于动物、植物、微生物体内的天然色素，对于水产动物如对虾、贝类等在着色方面具有非常重要的作用（Matsuno et al，2001；邓敦等，2003；冷向军等，2006）。近年来，随着生活水平的不断提高，消费者在购买食品时越来越重视商品的质量，而色泽又是判断食品质量的一个重要指标。颜色与食品的营养价值有一定的关系，诱人的色泽不但能提高商品的价值，也可增强食用者的食欲，因此研究贝类中类胡萝卜素含量是有必要的。

本实验结果表明，斧足中总类胡萝卜素的含量在被测量的5个组织中最高，含量为（19.45±0.80） μg/g，而在华贵栉孔扇贝 （Zheng et al，2010） 性腺中的含量最高 （59.90±1.32） μg/g，在马氏珠母贝（吴小芬等，2016）肝胰腺中含量最高（91.39±13.09）μg/g，在三角帆蚌（闻海波等，2012）的肝脏中含量更是高达（134.8±61.7）μg/g，这说明了总类胡萝卜素的生物组织分布存在物种特异性。织锦巴非蛤类胡萝卜素含量在各组织的分布与上述3种贝类物种的研究规律不同，推测与织锦巴非蛤的取样时间有关，本实验样品采集于2月份，此时精巢和卵巢分别处于休止期和滞留退化状态，这可能是导致性腺组织类胡萝卜含量比其他贝类偏低的原因。此外，在被检测的5个组织中除了鳃和性腺之间的总类胡萝卜素含量没有显著性的差异外（P＞0.05），其他各组织之间均有极显著的差异（P＜0.01），因此类胡萝卜素在织锦巴非蛤体内的分布具有组织特异性。

  

图2 织锦巴非蛤各组织总类胡萝卜素含量雌、雄比较结果

 

注：**表示两变量之间有极显著差异（P＜0.01）。

织锦巴非蛤是一种重要的经济贝类，大多雌雄异体，从外形无法区分性别差异，当性发育成熟时，卵巢颜色一般为淡黄色，精巢为乳白色，但这种肉眼观察法并不准确，尤其是非繁殖季节。因而，本研究选用镜检法鉴别织锦巴非蛤的雌雄。研究发现雌雄比例相差较大，推测有两种可能：第一，采样偏少；第二，与波纹巴非蛤类似，存在性逆转。波纹巴非蛤生殖腺组织学的研究证实波纹巴非蛤存在性逆转现象，雌雄比例随季节变化，雄性个体在2-4月份出现频率较高（吴洪流 等，2002）。此外，本研究结果表明，织锦巴非蛤精巢中的总类胡萝卜素含量显著高于卵巢，这与虾夷扇贝（李宁，2009）和华贵栉孔扇贝（Zheng et al，2010）卵巢中的类胡萝卜素含量均显著高于精巢的研究结果不相同，但与波纹巴非蛤的研究规律较为类似，推测造成这种结果的原因与织锦巴非蛤生殖周期有关。一般来说，分布于闽南海区的波纹巴非蛤繁殖期在5月中旬至10月下旬，进入11月份后，生殖活动已基本结束，此时多数个体卵巢萎缩退化（赵志江等，1991；徐小伟，2014），而精巢退化不显著，这可能也是造成卵巢中类胡萝卜素含量较低的原因。有关织锦巴非蛤精巢中类胡萝卜素含量显著高于卵巢的原因还需要进一步的研究。

4 结论

本研究利用镜检法对织锦巴非蛤进行了性别鉴定，利用分光光度法对不同组织及性别的总类胡萝卜素含量进行检测分析，初步揭示了总类胡萝卜素在织锦巴非蛤体内的分布及性别差异情况，为下一步织锦巴非蛤的优良品种选育提供了参考。

为对本文提出的球面波传播的频域分析方法进行评估，利用表1给出的波传播系数及r1处粒子速度作为输入量，计算r2处的粒子速度，并将其和实测粒子速度进行比较。按照粒子速度的频率响应函数的定义，r2处粒子速度的频域计算公式可以写为[20]

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