增液承气汤出自清代医家吴鞠通《温病条辨·中焦篇》，由玄参、地黄、麦冬、大黄、芒硝等五味中药材组成，具有甘凉濡润，滋阴增液，软坚降泄，通腑泄热之功效［1］，用于治疗温病阳明腑实兼阴液亏损之症［2］，自清代以来一直沿用至今.临床上主要用于治疗中老年习惯性便秘、阴虚肠燥便秘证、肝肾阴虚腹实证、慢性呼吸衰竭、流行性出血热少尿期等症，疗效显著［3-5］.随着增液承气汤在临床上的广泛应用，为便于患者服用和携带方便，在增液承气汤的基础上将其研制开发为增液承气口服液，由玄参、地黄、麦冬、大黄等四味中药材组成.增液承气口服液的功能与其有效成分密切相关，因此建立和优化其提取工艺是研究和开发的前提和基础.其中主要药物大黄所含5种蒽醌类衍生物含量测定笔者已发文论述.本文以提取液中地黄和玄参的共有成分梓醇［5］和毛蕊花糖苷的含量为考察指标，采用正交试验优选其最佳提取工艺，从而使生产工艺更加合理.

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1200高效液相色谱仪：包括Agilent1200化学工作站（美国Agilent仪器公司）；G1311A四元泵，G1315A DAD检测器；ZA505AS型十万分之一电子天平（上海赞维衡器有限公司）；RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；DZF-6050型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；THC-10B型小型数控超声波提取器（山东济宁超声电子有限公司，250W）；水为怡宝纯净水（华润怡宝饮料中国有限公司）.

欧洲中央银行并不是以失业率以及汇率来调控政策，而是以利率机制来控制通胀率，这使得政策在欧元区内得不到平衡。欧洲中央银行需要实行平衡的目标组合，以照顾到成员国的利益。

1.2 试药

梓醇对照品（中国药品生物制品检定所，批号110808-200508）；毛蕊花糖苷对照品（批号：111530-201310，含量：93.3%，中国食品药品检定研究院）；乙腈、甲醇（色谱纯，天津四友实业有限责任公司）；水为怡宝纯净水；其余试剂均为分析纯；增液承气口服液样品（委托委托河西制药有限责任公司自制）.

目前旅游业仍然缺乏成体系的监管法规，不利于旅游业的长远发展。相关部门应针对旅游业发展实际情况，完善相关监管法规，使旅游业实现规范、有序发展。增加监管和执法力度，对旅游业违规、违法行为进行合法的严厉惩处，能够为旅游业打造有序发展的大环境，为行业长远发展保驾护航，对管理和执法部门、旅行社和消费群体都有益处。

2 方法与结果

2.1 梓醇［5］方法与结果

2.1.1 色谱条件与系统适用性试验

按处方制备工艺制备缺玄参和地黄的阴性供试品，按“2.1.3”项下方法制得缺玄参和地黄的阴性对照溶液.

Eclipse XDB C18柱（PN 993967-902，4.6mm×150mm，5μm）；检测波长：210nm；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99）；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；进样量：10μl；在流动相的优化中，选用了乙腈、甲醇、磷酸系统的不同配比进行试验，结果当乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99）时，能够获得好的分离效果和短的分离时间，理论板数按梓醇峰计算应不低于3000，梓醇峰和前后色谱峰达到基线分离，拖尾因子为1.06，峰形基本对称，所以选择此流动相系统作为本实验的流动相；定量方法：外标法.结果表明，阴性对照对含量测定无干扰，色谱图见图1.

  

图1 梓醇HPLC色谱图 A对照品 B供试品 C阴性对照 1.梓醇Fig 1 Catalpol HPLC A.reference substance；B.sample；C.negative control substance； 1.catalpol

2.2.2 对照品溶液制备

精密称取梓醇对照品12.92mg，于100ml棕色量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，超声处理10min，放至室温，得对照品贮备溶液；精密吸取上述贮备溶液5ml，于50ml棕色量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1ml含梓醇12.92μg），避光冷藏保存.

2.1.3 供试品溶液的制备

精密量取按最佳提取工艺方法提取的溶液10ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至10ml量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液.

2.1.4 缺玄参和地黄的阴性对照溶液的制备

杨力生的大脑不禁嗡地一震，不觉眼前一黑，什么都看不清了。待稍一清醒，他强打精神说：“这样大的事，你怎么不提前跟我说一声呢？让我知道，我也好给你拿个意见。”

社会组织的多元性不仅体现在经济分层带来的利益群体多元化，更大程度上来源于社会生活的丰富多彩和人们需求的不同。有人倾向从经济分层的角度讨论社会组织的多元性，笔者更倾向于从人自身的需求不同探寻社会组织的多元性。

2.1.5 线性关系考察

色谱柱：Thermo HYPERSIL C18，（150mm×4.6mm，5μm，柱号：5020-07345）；检测波长：334nm；流动相：乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）；流速：1.0ml·min-1；柱温：30℃；进样量：10μl；理论板数：按毛蕊花糖苷峰计算应不低于3000；拖尾因子：0.95～1.05；定量方法：外标法.结果表明，阴性对照对含量测定无干扰，色谱图见图2.

2.1.6 精密度、重复性、稳定性试验

取“2.1.2”项下对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件重复进样，测定峰面积值，结果梓醇平均峰面积值RSD%为0.56%，表明仪器精密度良好.精密称取同一批样品共6份，按“2.1.3”制备供试品溶液.按“2.1.8”项下测定法测定，结果梓醇峰面积值RSD%为1.35%，表明本方法的重复性良好.取“2.1.3”项下供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件，分别于0，2，4，6，8h进样，测定峰面积值，结果梓醇峰面积值RSD%为1.10%.表明梓醇含量在8h内具有良好的稳定性.

2.1.7 加样回收试验

分别精密量取已知含量的样品各2ml，共9份，按低、中、高对照品加入量分别设计3个浓度水平，制备供试品溶液，测定样品含量，计算得平均加样回收率为98.23%，RSD%为0.76%，结果见表1.

 

表1 梓醇回收率试验结果Tab 1 Results of recovery test

 

2.1.8 样品测定

取10批样品，分别按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液.分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按“2.1.1”色谱条件测定，用峰面积按外标法计算样品中梓醇的含量.

研究对象纳入标准为：①支气管哮喘符合《儿童支气管哮喘诊断与防治指南（2016年版）》中规定的诊断标准［3］；喘息性支气管炎、毛细支气管炎、喘息性支气管肺炎符合《诸福棠实用儿科学》第八版诊断标准［4］；②排除气管异物、急性喉炎、先天性发育不良和胸廓畸形等引起的喘息儿童；③排除心源性哮喘儿童；④排除血清呼吸道病原体谱检测（间接免疫荧光法）腺病毒、流感病毒A、流感病毒B、副流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体及嗜肺军团菌IgM阳性儿童。

2.2 毛蕊花糖苷方法与结果

2.2.6 精密度、重复性、稳定性试验

  

图2 毛蕊花糖苷HPLC色谱图 A.毛蕊花糖苷对照品；B.供试品；C.阴性对照； 1.毛蕊花糖苷Fig 2 Acteoside HPLC A.reference substance；B.sample；C.negative control substance； 1.acteoside

分别精密吸取上述对照品贮备溶液2.0，4.0，6.0，8.0和10.0ml，于50ml棕色量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀.分别精密吸取上述溶液10.0μl，按照“2.1.1”项下色谱条件，测定峰面积值.以峰面积值（AREA）为纵坐标，以对照品进样量（μg）为横坐标绘制标准曲线，得梓醇的回归方程为：Y=235.34X-0.06，r=0.9999，线性范围为进样量：0.05～0.26μg.

2.1.2 对照品溶液的制备

精密称取毛蕊花糖苷对照品10.30mg，于100ml棕色量瓶中，加流动相适量使溶解，加流动相至刻度，摇匀，得对照品贮备溶液；精密量取上述贮备溶液5ml，于25ml棕色量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1ml含毛蕊花糖苷20.60μg），避光冷藏保存.

2.2.3 供试品溶液制备

在这一段简短的语言描述里，作者综合运用了多种修辞方法：运用比喻的修辞，在把“广场”比作“露天公寓”的过程中，形象地再现了苏比生活的贫穷；运用拟人修辞，通过“打招呼”这一动词性的短语，把北风预示的寒冷以及这些寒冷给予像苏比一样穷人的警告，以一种幽默的方式体现在语言描写之中；运用借代，作者把像苏比一样的广场流浪汉们，形象地称之为“房客们”。从而在幽默之中表达着一丝讽刺。

精密量取本品5ml，水浴蒸干，残渣加流动相溶解，转移至25 ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得.

2.2.4 缺玄参和地黄的阴性对照溶液的制备

按处方制备工艺制备缺玄参和地黄的阴性供试品，按“2.2.3”项下方法制得缺玄参和地黄的阴性对照溶液.

为了在将来实验中更好的识别和研究第五主族原子(N、P、Sb、Bi)替位掺杂对砷烯几何结构和电子性质的影响，模拟计算了扫描隧道显微镜(STM)图像，如图5所示. 在1 V的正偏压条件下，其STM图像较容易识别，并与其晶体结构相对应. 从图5可见，4种不同的掺杂晶格的STM图像存在明显的差异，因此为实验时辨别砷烯材料中的这些杂质提供了参考.

2.2.5 线性关系考察

分别精密吸取上述对照品贮备溶液2.0，4.0，6.0，8.0和10.0ml，于25ml棕色量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀.分别精密吸取上述溶液10.0μl，按照“2.2.1”项下色谱条件，测定峰面积值.以峰面积值（AREA）为纵坐标，以对照品进样量（μg）为横坐标绘制标准曲线，得毛蕊花糖苷的回归方程为：Y=974.51X-2.04，r=0.9999，线性范围为进样量：0.08～0.41μg.

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

取“2.2.2”项下对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件重复进样，测定峰面积值，结果毛蕊花糖苷平均峰面积值RSD%为0.55%，表明仪器精密度良好.精密称取同一批样品共6份，按“2.2.3”制备供试品溶液.按“2.2.8”项下测定法测定，结果毛蕊花糖苷的平均含量为0.22mg·ml-1，毛蕊花糖苷峰面积值RSD%为0.67%，表明本方法的重复性良好.取“2.2.3”项下供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件，分别于0，2，4，6，8，12，24h进样，测定峰面积值，结果毛蕊花糖苷峰面积值RSD%为0.85%.表明供试品溶液在24 h内稳定性良好.

2.2.7 加样回收率试验

取已知含量的同一批样品，共9份，按低、中、高对照品加入量分别设计3个浓度水平，制备供试品溶液，测定样品含量，计算得平均加样回收率为98.88%，RSD%为0.49%，结果见表2.

 

表2 毛蕊花糖苷加样回收率试验结果Tab 2 Results of recovery test

 

2.2.8 样品含量测定

取10批样品，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液.分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按“2.2.1”色谱条件测定，用峰面积按外标法计算样品中毛蕊花糖苷的含量.

3 提取工艺优化

3.1 单因素分析

本文以乙醇浓度、料液比、提取时间和提取次数为考察对象，进行单因素分析.

通过L9(34)正交试验得到卷曲形茶最佳做形工艺：揉捻压力为揉捻机加压力度的1/5，次数2次，时间5 min。在此条件下干茶外形条索尚紧、较弯曲、较绿、有毫、匀整；清香高长，汤色黄绿明亮，滋味醇正，叶底黄绿明亮、鲜活，完整，感观审评综合得分94.06分。碎茶率为0.57%。

乙醇浓度对提取率的影响 取按处方组成混合的细粉5份，每份约3g，精密称定，分别加40%、50%、60%、70%、80%的乙醇60ml，加热回流90min，回流2次，合并提取液，将提取液浓缩至50ml的量瓶中，放冷，分别加不同浓度的乙醇至刻度，摇匀；精密量取续滤液10ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解并转移至10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀.取续滤液测定，计算梓醇、毛蕊花糖苷的含量.表3结果显示：乙醇的浓度对梓醇、毛蕊花糖苷的提取率有明显影响，随着乙醇体积分数的提高，提取率不断增加，当超过60%后，梓醇的提取率变化较小，从节约资源和生产减少成本角度出发，选择溶剂浓度为60%即可满足提取要求.

My dear Comrades.Ihave been listening to you,amazed at the wells of faith in human beings！（1972:394）

 

表3 乙醇浓度对提取率的影响Tab 3 Effect of material-liquid on extraction rate of catalpol

  

编号1 2 3 4 5乙醇浓度/%40 50 60 70 80梓醇/μg·g-1 35.6 57.3 87.9 88.2 88.5毛蕊花糖苷/μg·g-1 101.4 177.0 250.7 271.3 273.2

料液比对提取率的影响 取按处方组成混合的细粉5份，每份约3g，精密称定，分别加60%的乙醇30、45、60、75、90ml，加热回流90min，回流2次，合并提取液，将提取液浓缩至50ml的量瓶中，放冷，分别加不同浓度的乙醇至刻度，摇匀；精密量取续滤液10ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至10ml量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，取续滤液测定，计算梓醇、毛蕊花糖苷的含量.表4结果显示：在料液比达到1∶20之前，提取率随提取提取液用量的增加而增加，再增大提取液用量，提取效果变化不明显，这主要是溶剂用量增大到一定限度时，原料表面与提取剂之间达到了饱和，体积分数差不再是影响提取率的主要原因.

 

表4 料液比对提取率的影响Tab 4 Effect of material-liquid on extraction rate of catalpol

  

编号1 2 3 4 5料液比1∶10 1∶15 1∶20 1∶25 1∶30梓醇/μg·g-1 41.1 65.2 79.8 80.1 79.9毛蕊花糖苷/μg·g-1 168.8 293.2 321.0 327.3 323.6

提取时间对提取率的影响 取按处方组成混合的细粉5份，每份约3g，精密称定，分别加60%的乙醇60ml，加热回流30、60、90、120、150min，回流2次，合并提取液，将提取液浓缩至50ml的量瓶中，放冷，分别加不同浓度的乙醇至刻度，摇匀；精密量取续滤液10ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至10ml量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，取续滤液测定，计算梓醇、毛蕊花糖苷的含量.表5结果显示：提取时间在120分钟以内，提取率与提取时间呈正相关，提取时间超过120分钟以后则呈现降低趋势，可能会造成梓醇的不稳定.另外，随着提取时间的延长，干扰成分的溶出也会增加也会影响提取率降低，本实验以90min为适宜的提取时间.

 

表5 提取时间对提取率的影响Tab 5 Effect of extraction time on extraction rate of catalpol

  

编号1 2 3 4 5提取时间/min 30 60 90 120 150梓醇/μg·g-1 46.0 61.5 85.4 86.3 74.9毛蕊花糖苷/μg·g-1 223.6 270.1 312.3 325.4 320.5

提取次数对提取率的影响 取按处方组成混合的细粉5份，每份约3g，精密称定，分别加60%的乙醇60ml，加热回流90min，分别回流1、2、3、4次，合并提取液，将提取液浓缩至50ml的量瓶中，放冷，分别加不同浓度的乙醇至刻度，摇匀；精密量取续滤液10ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至10ml量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，取续滤液测定，计算梓醇的含量.表6结果显示：随着提取次数的增多，提取率也增加，说明梓醇、毛蕊花糖苷不能一次提取完全.提取次数为3次以后，增加提取次数，提取率改变不大，考虑到节约实验时间和成本，选择提取次数为3次.

 

表6 提取次数对提取率的影响Tab 6 Effect of extraction repeat number on extraction rate of catalpol

  

毛蕊花糖苷/μg·g-1 237.7 286.8 332.1 328.9编号 提取次数1 2 3 4 1 2 3 4梓醇/μg·g-1 62.8 86.9 87.7 87.8

3.2 正交试验

由单因素考察的结果设置因素水平表，见表7.采用L9（34）正交表进行试验，见表8，并将结果进行方差分析，结果见表9-10.

 

表7 因素水平表Table 7 Factors and levels of orthogonal experiments

  

水平1 2 3 A溶剂浓度/%60 65 70 B料液比1∶10 1∶15 1∶20 C提取时间/min 75 90 105 D提取次数1 2 3

正交试验中，由表8中极差值R值的大小显示，各因素的主次作用为：B＞D＞C＞A.由表9和表10方差分析结果表明：B因素、C因素、D因素的影响都有显著性意义（P＜0.05），A因素无显著性意义.综合考虑成本，选择提取的最佳工艺为A1B3C2D3，即以60%乙醇为溶剂，料液比1∶20，回流提取时间90min，提取次数为3次.根据此条件，进行重复性验证试验.

3.3 验证试验

为此，本文以某省道地形图测量项目为研究对象，通过对谷地GoodyGIS软件在该项目地形图补测中的应用的实践，证实了GoodyGIS卫星影像数据在公路地形图测绘中的实用性。

取按处方组成混合的细粉3份，各约3.0g，用最佳工艺提取，采用2.1和2.2项下方法测定，实验结果与正交试验基本一致，说明工艺稳定可行.

就一顿饭光阴，梅先生以他雷厉风行、笃定爽朗的工作作风，磅礴天地的与我开始了他怎样从那个天高皇帝远的小镇，怀揣着“要当科学家”的理想、行积跬步至翱翔于祖国计算机事业之天上人间的。

4 小结

4.1 在增液承气口服液提取工艺条件的筛选试验中，根据文献报道［7-12］，并结合实际生产考虑，利用正交试验将各因素、各水平之间的组合均匀搭配，合理安排，用较少的试验次数优选出了最佳的提取工艺，并找出影响提取的主要因素，为确定合理的生产工艺提供实验依据.

老砍头双目瞳孔迸射出的白光将秀容月明笼罩住了，眼看秀容月明的眼睛要被阳关三叠刺瞎，突然，阳光暗了下来，同时，山洞里传出一声响亮的婴儿啼哭。

4.2通过L9（34）正交试验，确定增液承气口服液最佳提取工艺为：以60%乙醇为溶剂，料液比1∶20，回流提取时间90min，提取次数为3次.优化后的提取工艺经验证实验确认稳定可靠，可提高有效成分提取率，为增液承气口服液有效成分的提取提供了一种新方法.

有游客前往观光旅游的地方，其环境一定是具有特色的，是美好的，怡人的，对于一个环境脏乱差的地方，是没有人愿意前往的，这就强调了环境保护的重要性，旅游业要实现有效发展，必须要依靠环境的美化来实现，只要环境美好了，自然能够吸引越来越多的游客前往观光旅游，提升地区的游客量和消费量。

 

表8 L9（34）正交试验及结果Table 8 Design and results of orthogonal experiments

 

 

表9 梓醇含量方差分析表Tab 9 Variance analysis of orthogonal experiments

  

F0.05（2，2）=19.00；F0.01（2，2）=99.00；*显者性

 

表10 毛蕊花糖苷含量方差分析表Tab 10 Variance analysis of orthogonal experiments

  

F0.05（2，2）=19.00；F0.01（2，2）=99.00；*显者性

参考文献：

［1］杨进等.温病条辨［M］.北京：中国医药科技出版社，1996：201-207.

［2］杨端芬.增液承气汤治疗小儿病毒性肺炎88例［J］.四川中医，2001，19（3）：60-61.

［3］王爱英，王勤.HPLC法测定增液承气口服液中5种蒽醌类衍生物的含量［J］.中国药房，2011，22（35）：3321-3323.

［4］魏庆华，王勤.HPLC测定增液承气口服液中哈巴苷和哈巴俄苷含量［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（7）：81-83.

［5］王勤，袁小龙.HPLC测定增液承气口服液中梓醇含量［J］.中国中医药信息杂志，2014，21（1）：83-87.

［6］国家药典委员会编.中华人民共和国药典一部［S］.2010年版.北京：化学工业出版社，2010：115-116.

［7］魏庆华，王勤.正交实验考察锁阳中有机酸的提取工艺［J］.西北药学杂志，2010，25（3）：86-188.

［8］罗光宏，王勤，祖廷勋.甘肃河西沙区锁阳多糖提取工艺优化及含量测定［J］.食品科学，2011，32（10）：79-83.

［9］张汉忠，张汉贞，邹阳.正交试验优选地黄醇浸提取工艺［J］.中国医院药学杂志，2001，21（11）：677-678.

［10］吕杨，王慧森，李更生.正交试验优选鲜地黄提取工艺［J］.中医研究，2009，22（2）：18-20.

［11］何晓红，刘飞，伍晓丽.玄参总黄酮提取工艺的研究［J］.重庆中草药研究，2001，61（1）：7-9.

［12］钱斯日古楞，王红英，金凤燮.正交设计研究麦冬皂苷取工艺［J］.中成药，2005，27（5）：594-595.