葛为多年生豆科缠绕藤本植物，侧蔓和须根多，但块根深生，呈纺锤形或长棒形，表皮为淡黄色，有皱褶，是主要食用和药用部分。葛根为野葛(Pueraria Lobata(Willd.) Ohwi)或粉葛(P. thomsomi Benth)的干燥根，含有异黄酮类、三萜类、芳香类等活性成分。其中异黄酮类化合物是葛根的主要化学成分。葛根味甘、辛，性凉，归肺、胃经，具有解肌退热、透疹、生津止渴、升阳止泻等功效[1]，被广泛用于保护心脑血管[2-4]、治疗感冒[5]、Ⅱ型糖尿病[6]、腹泻等中药复方制剂中，用量极大，是制剂的重要成分。其中葛根素是葛属植物的特有成分，亦是主要有效成分，具有扩张冠状动脉血管，降低血脂，增强心肌收缩力，降低血压，防治高血压头晕、头痛、颈项疼痛[7-12]等功效。

通过投加一定比例的PAM和PAC（聚合氯化铝），进一步降低预曝气池中的固体悬浮物浓度。污水先流经PAC絮凝桶进行混合，产生细小絮状体，再流入PAM絮凝桶产生较大絮状体，从而能在初次絮凝沉淀池内较快地沉淀，降低固体悬浮物和部分COD。

市场上葛根相关的产品种类繁多，其中葛根素作为葛根主要的化学成分，其含量的检测需要该标准样品作为检测对照；同时，在葛根相关活性研究和产品开发中，葛根素也是重要的研究对象，因此迫切需要开展该标准样品的研制工作。本研究采用高速逆流色谱(high-speed countercurrent chromatography，HSCCC)技术制备葛根素，通过紫外吸收光谱(ultraviolet absorption spectrometry，UV)、红外光谱(infrared spectroscopy，IR)、质谱(mass spectrometry，MS)和核磁共振(nuclear magnetic resonance，NMR)波谱等方法进行结构鉴定，并开展均匀性检验、稳定性检验、定值研究，最终得到纯度大于98%、扩展不确定度小于1%的葛根素标准样品。

再次，网络热词风格诙谐幽默，让人忍俊不禁，具有风趣性。[1]30“鸭梨”诞生于百度贴吧，不知是有意还是无心，一位楼主在发帖时将“压力”写成了“鸭梨”，于是引发人们模仿，纷纷以“鸭梨大”“鸭梨山大”“毫无鸭梨”等形式表达出对压力的主观感受。当今社会，当人们面临来自工作﹑家庭﹑健康等方面的重重压力时，往往只要一提到“压力”便郁闷不已。“鸭梨”表达了人们对“压力”的戏谑和调侃，能起到减压的作用。如能把“压力”当成香甜可口的“鸭梨”吃下去，心情自然大好。其他此类网络词汇像“猪坚强”“范跑跑”“打酱油”“我反正信了”“hold住”“忐忑”“悲催” 等都或多或少带有诙谐幽默和戏谑调侃的意味。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

KQ-250E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；TBE-300B半制备型高速逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司)；LC-20高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司)；RE-2000旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；ALPHR1-2冷冻干燥机(德国Marin Christ公司)；Spectrum400傅立叶变换红外-近红外光谱仪(美国PerkinElmer公司)；1100 Series LC/MSD SL(美国Agilent公司)，超导核磁共振谱仪(德国Bruker公司)。

乙酸乙酯，甲醇，正丁醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；乙腈(色谱纯，美国Fisher Scientific公司)；葛根提取物(湖南长沙远航生物制品有限公司)。

1.2 方法

1.2.4 均匀性、稳定性、定值研究

HSCCC溶剂体系为乙酸乙酯∶正丁醇∶水(2∶1∶3，v/v)，转速900 r/min，流速1.5 mL/min，分离温度25℃，检测波长254 nm。根据HSCCC图谱收集目标化合物，旋转蒸发去除溶剂，冷冻干燥后得到高纯度葛根素样品。

可以看出，在显著性水平α=0.05时，葛根素标准样品F检验的结果小于临界值F0.05(9,20)，说明该样品的均匀性良好。其中，瓶间方差用下式计算：式中瓶间测量次数Sbb=SA=3.36×10-4，瓶间标准偏差是该方差的平方根：Sbb=SA=3.36×10-4，故均匀性检验引入的不确定度u均=Sbb=3.36×10-4。

1.2.2 纯度分析

Russell Taylor、Michael Schmid 和浙江理工大学艺术与设计学院副教授、硕士生导师翟音也分别进行了关于国内外地板现状、色彩设计等方面的精彩分享。

总平均值由下式计算：

其中β是稀疏惩罚项的权重。在学习过程中，通过BP算法对神经网络的W和b的逐步修正，代价函数逐渐被最小化。在此过程中，必须计算隐藏层的每个神经元对输出层误差的贡献。此外，还应该计算代价函数对W和b的偏导数。文献[16]指出，L-BFGS算法在深度学习中训练维度较低的情况下，效果比较好且收敛速度快，运行稳定，因此本文采用L-BFGS算法求解。

截距由下式计算：

如图5所示，如果伸杆已伸出并与若干伸杆支撑组件相接触，此伸杆质量会被其根部和若干伸杆支撑组件和滑车共同承担。考虑到多个未知力不能同时进行求解的问题，这里做出如下假设进行求解。假设在伸杆锥度保持不变的情况下，各支撑组件不会对卷筒式伸杆的轴线造成支撑影响，并且支撑组件能够很好地起到支撑作用，对伸杆的第1段进行处理时可以采用如图5所示的方法，得到第一个伸杆支撑组件的支撑力为:

采用UV、IR、MS、NMR进行结构确证。UV分析条件：甲醇作为溶剂，浓度为0.1 mg/mL，扫描范围200～400 nm；IR分析条件：KBr压片法，扫描范围400～4000 cm-1。MS分析条件：正、负两种离子模式，锥孔气流速40 L/min，毛细管电压3.0 kV，脱溶剂温度320℃，质量扫描范围m/z 150～1000。NMR分析条件：溶剂为氘代丙酮加重水，采集13C-NMR和1H-NMR谱图。

高校校训文化和社会主义核心价值观都是中国特色社会主义文化的组成部分，从精神内涵和价值诉求上具有内在一致性，高校思想政治工作者要切实发挥校训的载体作用，构建校训精神融入社会主义核心价值观教育的有效路径。

1.2.1 葛根素样品制备与分装

里奥哈的陈年规定本就比其他西班牙产区严格，而唐园（Viña Tondonia）是传统里奥哈的极致表现，在美国旧橡木桶中进行超长时间的陈年，酒中永远萦绕着迷人的氧化风味，但骨子里又不失活跃的灵魂。氧化风格的唐园（Viña Tondonia）白葡萄酒是他们的骄傲，圆润平衡，富有香料、苦杏仁、香草和核桃的风味，这种魅力很难在其他白葡萄酒里找到。而更值得一提的是特级珍藏（Gran Reserva）桃红，10年左右才出一个年份，可谓陈年葡萄酒中的极品。

依据GB/T 15000.3—2008《标准样品工作导则(3)标准样品：定值的一般原则和统计方法》[13]开展均匀性检验、稳定性检验、定值研究工作。均匀性：采用方差分析法进行纯度均匀性检验，判断葛根素的均匀性是否合格。稳定性：将葛根素样品避光贮存于4℃，开展12个月长期稳定性的研究。采用直线作为经验模型，观察斜率值是否有显著变化，预测葛根素的稳定性变化。定值：采用多个实验室协作试验的联合定值方式，分别对随机抽取8个样品进行检测，对所采集的测定结果采用格拉布斯(Grubbs)检验法进行检验，计算葛根素标准样品的标准值和不确定度。

2 结果与分析

2.1 葛根素制备及纯度分析

采用HSCCC乙酸乙酯∶正丁醇∶水(2∶1∶3，v/v)溶剂体系分离纯化得到高纯度葛根素样品(图1)，采用HPLC对葛根提取物和分离所得单体进行洗脱，254 nm检测波长下，应用峰面积归一法计算纯度值，分离所得单体葛根素的纯度为99.53%。(图2)

图1 葛根素HSCCC图

图2 葛根素HPLC图 A.葛根提取物；B.分离所得单体

2.2 结构确证

采用UV、 IR、 MS、NMR对葛根素进行结构鉴定。UV最大吸收波长为250 nm(图3)； IR吸收峰(图4)：3240(-O-H)，1634(-C=O)，1515，1446(Ar)，1260，1212，1178，1082(醚-C-O)。通过ESI-MS正负离子模式扫描(图5)可得：[M+Na]+=439.2，[M-H]-=415.1，故测定的相对分子质量为416。1H-NMR和13C-NMR测试结果见图6，通过对数据进行归属(表1、表2)。与文献[14,15]进行比较，确定该样品为葛根素。

图3 葛根素紫外吸收光谱图

图4 葛根素红外光谱图

图5 葛根素质谱图 A.正离子模式；B.负离子模式下

图6 葛根素核磁共振图谱 A.1H-NMR；B. 13C-NMR

表1 1H-NMR测试数据

H的位置测定值文献值[15]2832882857951798669997022ˊ73917403ˊ68226835ˊ68226836ˊ73917401ˊˊ4829490

表2 13C-NMR测试数据

C的位置测定值文献值[15]21530915273123611231417547175351267812646115521150716158160981131011234a1173511678a156631561

续表2

C的位置测定值文献值[15]1ˊ1230312252ˊ1305113003ˊ1155211504ˊ1576115685ˊ1155211506ˊ1305113001ˊˊ73997332ˊˊ70947073ˊˊ79227844ˊˊ70947015ˊˊ82178136ˊˊ6186611

2.3 均匀性检验

式中

3）渗沥液协同处理方案会造成烟气成分中的灰分、水分、重金属及Cl-等含量的增加，所以余热锅炉设计阶段应充分考虑协同处理方案带来的腐蚀积灰等问题。

表3 根素样品均匀性检验结果

检验结果不同样品瓶中葛根素样品纯度(%)4296789536332753660第一份9968995399549968996699499951995599469939第二份9953995499609945995499529962995799539940第三份9964995599559959994799459944994699579948平均值9962995499569957995699499952995299529942总体平均值9953标准偏差008F值170F005(9，20)239

将葛根素样品采用2 mL棕色样品瓶进行分装。分装是在相对独立和洁净空间进行的，以每瓶10 mg分装，用十万分之一天平称量，样品共100 瓶，以1～100号计。分装好的样品瓶放在4℃冰箱中长期保存。

2.4 稳定性检验

将葛根素样品于4℃冰箱冷藏避光保存，以1年为期，对制备的葛根素样品每3个月取样，按1.2.2纯度分析方法，峰面积归一化法进行纯度计算，每份试样平行测试3次，采用t检验对数据进行分析，稳定性检验结果见表4。

表4 稳定性检验结果

时间(月)平均值(%)标准偏差(%)09954001399520016995200199956002129950002

采用直线作为经验模型，观察斜率值是否有显著变化，以此对标准样品的稳定性变化进行预测。斜率可用下式计算：

（2）甲、乙两种植物单独种植时，如果种植密度过大，那么净光合速率下降幅度较大的植物是______，判断的依据是_______________。

由于所制备的样品单元数都小于100，根据随机数表，分别抽取10瓶样品进行均匀性检验。其中葛根素瓶号为42、9、67、89、53、63、32、75、36、60；每瓶样品各称3份，每份1.0 mg按照1.2.2纯度分析方法进行HPLC分析，计算其纯度。采用方差分析法进行检验，对其均匀性做出判断。结果见表3。

1.2.3 结构确证

直线上的点的标准偏差可由下式计算：

式中稳定性测量次数n=3。

取其平方根s=0.276%，与斜率相关的不确定度用下式计算：

自由度为n-2和p=0.95(95%置信水平)的分布t因子等于3.128，由于|b1|<t0.95,n-2·s(b1)=3.128×0.029%=0.093%，故斜率是不显著的，因而未观测到该样品的不稳定性。t=12个月的长期稳定性的不确定度为： u稳=sb1·t=0.029%×12=3.48×10-3。

2.5 定值

对联合定值的8家实验室所采集的测定结果，采用Grubbs检验法进行检验，未发现异常值。经过数据统计，计算得出葛根素样品的标准值和不确定度。不同实验室检测和方差分析结果见表5、表6。

表5 不同实验室检测结果

实验室序号纯度值(%)平均值(%)1995299499950995499529952995229950995699469946995299569951399459952995199489947994999494995299519953995299529953995259952994699499948995299469949699519956995199529955995799547995599509949994999529955995289952995099539954994999509951

表6 不同实验室方差分析结果

变差源SS自由度MS组间116×10-67166×10-7组内265×10-640663×10-8总和381×10-647

配制浓度为0.5 mg/mL的葛根素样品溶液，采用HPLC峰面积归一法对葛根素进行纯度分析。色谱柱为Wondasil C18 (5 μm, 150×4.6 mm) ；流动相∶乙腈∶水=12∶88；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：254 nm；运行时间：30 min。

总平均值的不确定度等于：

=7.43×10-5,

式中，实验室内测量次数n=6，实验室数量p=8，

实验室内重复性方差S2r=MS组间，实验室间方差制备所得标准样品定值结果的不确定度由以下几部分组成：(1) 均匀性检验引入的不确定度；(2) 稳定性检验引入的不确定度；(3) 多个实验室定值引入的不确定度。

故uCRM=3.49×10-3=0.35%，

在置信概率为95% 时，k=2，则扩展不确定度UCRM=2uCRM=0.70%。

党的十八届四中全会对全面推进依法治国做出了重要部署，在其报告中也指出：“推进各级政府事权规范化、法律化，完善不同层级政府特别是中央和地方政府事权法律制度，强化中央政府宏观管理、制度设定职责和必要的执法权，强化省级政府统筹推进区域内基本公共服务均等化职责，强化市县政府执行职责。”

3 结论

针对我国尚无葛根素国家实物标准样品的现状，开展了葛根素标准样品的研制工作，成功的建立了葛根素样品的制备方法。并依据GB/T 15000标准样品工作导则，对制备得到的葛根素样品进行均匀性检验、稳定性检验及定值研究，最终申报获批成为国家实物标准样品。

葛根素标准样品的标准值为99.51%，扩展不确定度(95%置信区间)为0.70%。该标准样品符合GB/T 15000标准样品工作导则要求，填补了国内该领域研究的空白。葛根素标准样品不仅可以满足葛根及相关产品分析检测、质量控制工作的需求，同时，也为检测结果的准确性、可比性，以及溯源性提供了技术支撑。

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