奶牛酮病是奶牛泌乳早期最常见的代谢疾病，在北美近40%的奶牛在产后数周内会发生不同程度的亚临床酮病，发病率变化很大，最高可达80%[1]。奶牛产后开始泌乳和对营养需求增加的适应过程引发了能量负平衡的生理状态[2]。Turk等[3](2013)的研究提示，脂肪动员和氧化应激是分娩前后奶牛对能量负平衡的复杂代谢的适应性反映。

葡萄籽原花青素是一种新型高效抗氧化剂，是目前为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有极强的抗氧化、消除自由基的作用，可有效消除超氧阴离子自由基和羟基自由基，也参与磷酸、花生四烯酸的代谢和蛋白质磷酸化，保护脂质不发生过氧化损伤[4]；对泌乳奶牛，有人研究葡萄籽与亚麻籽对产奶性能、肝肾功能、免疫指标的影响，认为它们对奶牛产奶性能和健康没有影响[5]。目前对提取的葡萄籽原花青素在老鼠的抗氧化方面的试验有文献资料报道，它能够显著提高老鼠的抗氧化能力，但还没见有在奶牛上做试验的报道。

本实验通过给产后二周的奶牛灌服葡萄籽原花青素，研究它对奶牛血清中H2O2和血酮含量变化的影响，为预防奶牛氧化应激和酮病提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 药物

葡萄籽原花青素(原花青素含量≥90%)，从国内某生物科技有限公司购买。

朝游北海暮苍梧，袖里青蛇胆气粗。子虚先生又岂是凡人。他看破红尘，一心向道，道成世界，周流不息，不息不停之中，凡人认命，得道者造命罢了。棋在棋盘上，棋也在天地星宇里。他与乌有先生已经悟出了今夜天地之间的“媪妇谱”，遂明白东方宇轩诸人布置万花因隧道的关键，他们这两个牛头马面老家伙，庶几可不辱使命矣。

1.2 主要试剂及仪器

在本实验中,每天按照40mg/kg/d剂量给产后2周的实验组奶牛灌服葡萄籽原花青素，奶牛血浆H2O2水平从实验第1天开始，血浆H2O2水平一直高于对照组奶牛的水平。在第3天达峰值，实验组H2O2水平极显著地高于对照组间水平(p<0.01)，第4天两组间仍有显著差异(p<0.05)。目前笔者未见到摄入葡萄籽原花青素对动物或人血浆H2O2水平影响的报道。本实验给奶牛灌服GSEP使血浆H2O2水平升高结果似乎与现行理念相矛盾，即多数研究者认为抗氧化剂可降低氧化应激水平。其原因是否与GSEP在奶牛的用量、本次GSEP产品质量、或其他因素有关，需要进一步研究。

1.3 实验动物

如图2所示，实验组在灌服葡萄籽原花青素后，血清中H2O2的含量逐日上升，在第4天时达到峰值，实验组与对照组之间出现极显著差异(p<0.01)，在第5天时还存在显著差异(p<0.05)。对照组血浆H2O2的含量在实验第6 天达到峰值，之后下降。整体来看，实验组奶牛的血浆H2O2的含量除实验前外，其余每日血浆H2O2的含量均高于对照组的含量。

1.4 实验方法

（2）清洁灌肠。清洁灌肠是将大量的灌肠液灌入肠道，反复多次，达到肠道清洁的目的。清洁灌肠是将肛管插入肛门10 cm，肛管的尖端位于直肠的中下端，但因为直肠中的粪便造成的阻力会让大部分的灌肠液滞留于直肠下端，从而无法有效地清除粪便。直肠下的7～10 cm是人类排便的最敏感部位，经常性给予刺激后，患者常常会有腹痛、腹胀等情况[13-14]。传统清洁灌肠所采取的体位为侧卧位，但要达到清洁肠道的目的需要多次灌肠，且总的灌肠液量大，效果常不满意，损伤肠道黏膜，增加痛苦[15]。

1.5 指标测定及方法

现阶段，粉丝群体的核心仍然是90后，他们和“互联网”一起长大，天生的互联网“基因”让他们可以快速进入和掌握各种新兴媒体，收获最佳传播效果。

将复合磷酸盐(按照焦磷酸钠∶多偏磷酸钠∶六偏磷酸钠为2∶2∶1)0.4%、盐2.3%的添加量放入盆中，再放入适量水，恰好淹没牛肉即可，然后将切好、洗净的牛肉(片状)放入盆中进行腌制并使其处于4 ℃的环境下。腌制一段时间后，均匀翻动肉块。

1.6 统计学处理

数据资料以EXCELL 录入，统计2组奶牛血浆H2O2和酮体含量，并进行组间差异性t检验，p<0.05为差异显著。

2 结果

2.1 血清酮体含量

研究表明：体内过剩自由基和活性氧的产生及引发的脂质过氧化反应过程与许多疾病的发生发展密切相关[6]。围产期奶牛由于营养物质摄入不足、能量代谢加快、内分泌激素急剧变化等原因导致能量需求和耗氧量需求增大，活性氧生成增多，进而导致氧化应激的发生及免疫功能下降，围产期易发的疾病如乳房炎、酮病等都与氧化应激有一定的关联[7]。本实验中实验奶牛为产后2周奶牛，处在围产期，是能量负平衡和氧化状态失衡的时期。

老黄听是听到了她的话，可袁安这小子的龙虎爪已不可思议地直奔他胁下了。匠作的快泥刀、捕快的疯横刀也停不下来。

  

 

图1 原花青素对奶牛血浆中酮体含量的影响

2.2 血浆H2O2含量

在广西某奶牛场，选择奶牛的胎次、年龄、体重与分娩日期相近的产后二周的6头荷斯坦奶牛，同栏饲养，平均体重550kg，配对分配到对照组和葡萄籽原花青素40 mg/kg/d剂量实验组，

H 2O2测定采用化学比色法，取血浆样本，严格按照试剂盒说明操作，1cm 光径比色杯，使用分光光度计，测定血浆中H2O2水平。血酮测定采用水杨醛比色法，将血浆中的乙酰乙酸、BHBA转化为丙酮后，测定血浆中的总酮体，其主要步骤为除蛋白、蒸馏、显色及比色等。

  

 

图2 原花青素对奶牛血浆中H2O2水平的影响

3 分析与讨论

如图1所示，在实验第一天，两组奶牛的酮体含量都明显下降，对照组的酮体含量下降略多一些，之后两组的走势图在6天内的含量相似，在实验最后1天，对照组的酮体含量明显升高，但两组间差异不显著。

第一天早晨喂料前，采集颈静脉血10 mL置于肝素钠抗凝管中，3 000 r/min 离心10min，分离血浆，分装后-80℃冰箱保存，备用。随后对实验组奶牛灌服原花青素40 mg/kg/d，对照组不灌服，以后每天早晨喂料前采集颈静脉血，然后实验组奶牛灌服葡萄籽原花青素，连续7天，第8天只采集血样，不灌服。

H2O2测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。主要仪器包括：V I S -7220型分光光度计，离心机，电热恒温水浴锅，超低温冰箱，酮体蒸馏设备等。

在GSEP相关研究中，Miltonprebu等报道GSEP预处理能对Cd中毒大鼠肝脏线粒体复合体产生的过氧化氢含量显著减少，但GSEP处理大鼠与健康对照大鼠的过氧化氢含量相似[8]。GSEP能够缓解H2O2诱发氧化应激引起的损伤。

卢婷(2009)[9]在“原发性高血压患者颈动脉重构与血浆过氧化氢、过氧化氢酶相关性研究”中报道了人血浆中平均H2O2水平。研究认为，与对照组比较,原发性高血压组患者血浆过氧化氢水平显著升高，原发性高血压患者合并颈动脉内-中膜增厚该变化与血浆过氧化氢水平成正相关，高血压颈动脉重构与体内过氧化氢水平呈正相关。在该研究中，人的平均血浆过氧化氢水平为2.78～3.68μm/L，远比本研究报道的产后奶牛的值低，可能反映了人与动物血浆过氧化氢水平的差别很大，在此方面需要进行研究。

在血浆酮体水平上，奶牛产后2周时，实验组和对照组都有较高血浆酮体水平，实验开始(即实验组灌服葡萄籽原花青素)后1天，两组的血浆酮体水平均下降，此后数日灌服葡萄籽原花青素对降低血浆酮体水平的作用不显著(图1)，但实验组奶牛的血浆酮体含量变化较为稳定，而对照组奶牛的波动较大。

本研究结果发现了与以往研究不一致的结果，应用GSEP不仅没有减轻奶牛血浆过氧化氢水平，反而在灌服GSEP后的头3天，其水平过氧化氢呈线性上升。不论如何，GSEP在产后奶牛上的应用需要谨慎，其抗氧化效果还需要进一步研究。

参考文献

[1]Zhang G, Hailemariam D, Dervishi E, et al. Dairy cows affected by ketosis show alterations in innate immunity and lipid Carbohydrate metabolism during the dry off period and postpartum[J]. Research in Veterinary Science, 2016, 107:246-256.

[2]Esposito G, Irons P C, Webb E C, et al. Interactions between negative energy balance,metabolic diseases, uterine health andimmune response in transition dairycows[J].Animal Reproduction Science, 2014, 144(3-4):60-71.

[3]Turk R, Podpe?an O, Mrkun J, et al. Lipid mobilisation and oxidative stress as metabolic adaptation processes in dairy heifers during transition period.[J]. Animal Reproduction Science, 2013, 141(3-4):109-115.

[4]常肖肖, 蒋林树. 葡萄籽原花青素生物学功能及其在畜禽生产上应用的研究进展[J]. 中国农学通报, 2015(11)：5-8.

[5]Nudda A, Correddu F, Marzano A, et al. Effects of diets containing grape seed, linseed, or both on milk production traits, liverand kidney activities,and immunity of lactating dairy ewes[J]. Journal of Dairy Science, 2015, 98(2):1157-66.

[6]Lykkesfeldt J, Svendsen O. Oxidants and antioxidants in disease: Oxidative stress in farm animals[J]. Veterinary Journal, 2007,173(3):502-511.

[7]谷 娟, 张春刚, 刘 祯,等. 氧化应激与奶牛围产期疾病的关系及其作用机制[J]. 中国奶牛, 2015(10)：31-36.

[8]Miltonprabu S, Nazimabashir. Hepatoprotective effect of grape seed proanthocyanidins on Cadmium-induced hepaticinjuryin rats: Possible involvement of mitochondrial dysfunction, inflammation and apoptosis[J]. Toxicology Reports, 2016, 3:63-77.

[9]卢 婷. 原发性高血压患者颈动脉重构与血浆过氧化氢、过氧化氢酶相关性研究[D]. 中南大学, 2009.

(本栏责任编辑 何宝祥)