随着我国国民经济的快速发展，人们生活水平的不断提高，我国的乳业在迅速发展，奶牛养殖业也在大规模地扩增。子宫内膜炎是奶牛最常见的一种繁殖系统疾病，是造成奶牛不孕的主要原因之一，约占不孕奶牛的60%～92%[1]，而奶牛的不孕症是制约畜牧业发展的重要因素。子宫内膜炎在我国发病率一般为10%～30%，最高可达40%，平均约20%[2]。2017年，对湖南岳阳长炼奶牛场进行调查，奶牛子宫内膜炎占奶牛病的10%～15%。奶牛不孕症是一个主要的世界性经济问题。奶牛子宫内膜炎引起奶牛不孕，增加胎间距，降低奶产量，给奶业造成巨大的经济损失，我国每年因该病造成的损失达数亿元人民币。

本试验根据奶牛子宫内膜炎的病机、病理，查阅相关文献，选择黄芩、黄连等对奶牛子宫内膜炎有治疗作用的中药，进行体外抑菌试验。根据单味中药体外抑菌试验结果，选出6～8种药物，为进一步组方提供理论和技术依据，给奶牛子宫内膜炎的治疗以更多选择。今后，可以在饲料中添加中药制剂预防和治疗此类疾病，更加注重饲养质量，提高产品的品质。

1 试验材料

1.1 主要仪器、设备

超净工作台、电子天平、电热恒温培养箱、冰箱和冰柜、高压灭菌锅、水浴锅、蒸发皿、离心机等。

1.2 主要试剂

生理盐水、牛肉膏、琼脂粉、蛋白胨、磷酸氢二钾、蒸馏水、营养琼脂、氯化钠、无水乙醇等。

1.3 培养基

营养肉汤；普通琼脂培养基；琼脂斜面培养基。

1.4 药材

黄连、黄芩、地锦草等几种对奶牛子宫内膜炎有治疗作用的中药。均购自湖南省岳阳市花板桥九芝堂。

中药对子宫内膜炎的体外抑菌试验菌株选用常见的引起子宫感染菌：致病性大肠杆菌（ATCC 25922）、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、链球菌(CMCC(B)32116)。以上菌株由岳阳市疾病预防控制中心微生物实验室保存提供。

1.5 菌种

缺陷限定这个属性是针对缺陷类型的进一步限定，它指出缺陷类型是缺失、不正确还是多余。即修改要做哪些工作，是增加缺少的功能代码、修改不正确部分还是删除多余的代码。

采用琼脂平板打孔法：吸取菌液0.1mL滴在平板琼脂表面，用“L”型玻璃棒将菌液涂布均匀，待菌液被吸收后，用直径为6mm的无菌打孔器打孔，3孔/板。孔间距大于20mm，用灭菌针头挑去孔内琼脂，吸取含1g/mL中药的提取物加入孔中，以刚刚注满为准，不能溢出，每种中药作3个重复，链球菌37℃培养24h，其它两种菌37℃培养18h后测量抑菌直径，以3孔的平均值表示该中药的抑菌作用大小。

2 试验方法和步骤

2.1 单味中药的提取

1.4 统计学处理 采用SPSS 22统计学软件，分割效果组间资料比较采用χ2检验；典型病灶的体积、SUV最大值、SUV平均值、SUV阈值、SUV峰值、TLG组间比较采用两独立样本t检验。检验水准(α)为0.05。

2.2 菌液的制备

保存于斜面的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌菌种，分别接种于营养琼脂平板，37℃培养24 h，再挑取数个菌落接种于MH肉汤，37℃培养24 h，用灭菌生理盐水稀释，以0.5麦氏比浊管比浊，调其含菌量为1×108CFU/mL[4]。然后用灭菌生理盐水将大肠杆菌、金葡菌稀释1000倍，使其浓度为105～106CFU/mL，备用。链球菌稀释10倍。

2.3 培养基的制备

2.3.3 M-H肉汤的制备：称取25gMH肉汤溶于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于试管中，加塞，经121℃高压灭菌15 min，置于4℃冰箱中保存备用。

2.3.2 血平板的制备：灭菌后的营养琼脂待温度降至40℃左右，加入5%的脱纤维绵羊血混匀后再倒平板或斜面。

2.3.1 普通营养琼脂平板、琼脂斜面的制备：称取营养琼脂33 g溶于1 L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，经121℃高压灭菌15 min，待温度降至40℃左右，分装至灭菌的平板上制成营养琼脂平板，分装于灭菌试管中摆成琼脂斜面。

2.4 中药抑菌作用测定

近年来随着我国经济的发展，带动了科学技术水平的提高，我国的医学技术水平也有了较大的提升。同时电子计算机网络技术的巨大发展促进各行各业在技术上有了很大的突破，医学影像学在医学领域中的地位也显著提高[1]。由于近年来许多新兴的影像设备投入到医疗市场中，传统的放射技术已经被新兴的影像技术所取代，使得医学影像技术逐渐提高，为诊断医师提供了更加清晰明了的可用于诊断的图像。医学影像技术方面的改进，可以对疾病进行更加清晰的显示，提高疾病诊断的正确率，以期为患者带来更佳的疾病诊断治疗服务。

三年如同三个世纪一样长。我无数次梦到米米，梦到一浩，梦到哥哥张天明夫妇的甜沫和油条。在上大学以前，我所有的早餐都是甜沫油条。我从五岁就跟着卖甜沫油条摆水果摊的张天明夫妇长大，我们住在芙蓉街有八家住户的大杂院里。父母在记忆中已经面目模糊。从跨进牢狱的第一天，我就开始思念哥嫂的甜沫油条，像思念米米一样一刻不曾停止过。

2.5 中药MIC和MBC测定

抑菌效果判定标准均按《中药药理学》标准，即：抑菌直径≥20mm为极敏，15～19mm为高敏，10～14mm为中敏，10mm以下为低敏。

称取中药10g，加10倍量100mL水，浸泡30min后，用旺火烧开，文火煎煮30min，共煎煮3次，每次的煎煮液用纱布过滤，收集滤液进行抽滤，合并滤液，在水浴锅上蒸发至合适量，将药在离心机上4000 r/min，离心5min后取上清液，将上清液浓缩至10mL，制成含生药1.0g/mL分装于玻璃瓶内，水煮灭菌30 min，4℃冰箱密封保存备用[3]。

2.6 判断标准

采用试管两倍稀释法测定各细菌的最小抑菌浓度 (MIC)。取10支试管，1～10号管每支均装入5mL普通肉汤培养基。第1支试管加中药提取物5 mL，混匀后吸取5 mL至第2支试管，依此类推，至第8管吸出5 mL弃去，9管为阳性对照，10管为阴性对照管。1～8支试管中的药液浓度分别为100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78mg/mL，然后于 1～8管中分别接入已制备好的菌悬液20 μL，37℃培养24 h。再接种到营养琼脂培养基上，37℃培养24 h，无细菌生长的最小药物浓度为最小抑菌浓度。平板上菌落数少于5个的即为最小杀菌浓度（MBC）。

3 试验结果

3.1 单味中药打孔法试验结果

试验结果显示，多数单味中药对引起奶牛子宫内膜炎的3种主要致病菌均有不同程度的抑制作用。对大肠杆菌，单味药以黄连、黄芩、丹参、连翘抑菌作用较强，对金黄色葡萄球菌以黄芩、黄连、苦参、丹参、红花、地锦草、抑菌效果很好，其抑菌圈直径在15～19mm之间，黄连、地锦草甚至大于20mm，达到了极敏。对链球菌以黄连、苦参、黄芩、丹参抑菌效果好。桃仁、党参、黄芪、当归对3种菌抑菌效果不明显（表1）。

长期疾病相关心理问题是影响糖尿病治疗的另一重要因素。调查研究显示，糖尿病18个月的相关心理痛苦的发生率为38%～48%，在不同程度上影响糖尿病患者的治疗依从性、自我管理行为、血糖控制[8]。且针对住院的糖尿病患者的研究表明[2]，糖尿病新住院患者普遍存在不同程度的心理痛苦，患者的回避应对和屈服应对水平越高，心理痛苦程度越大。因此，可以从健康教育着手，提高患者对疾病的认识，消除不必要的恐惧和排斥，让患者以正性的态度对待糖尿病，减轻心理痛苦，自然能改善治疗效果。

 

表1 各单味中药对3种主要致病菌的体外抑菌效果

  

注：***表示高敏，**表示中敏，*表示低敏。

 

中药黄连黄芩苦参黄柏连翘地锦草丹参红花益母草桃仁白术黄芪党参当归大肠杆菌抑菌直径/mm 15.29***14.11**7.68*6.59*11.15**8.49*12.00**6.93*6.65*-6.66*链球菌抑菌直径/mm 16.51***11.05**10.57**-8.75*9.70*13.02**6.58*6.61*---金黄色葡萄球菌抑菌直径/mm 20.71***15.89***19.99***6.49*11.00**21.49***16.25***16.88***7.10*-11.59**6.73*-7.02*-----

3.2 中药的MIC和MBC值

试验结果显示，对大肠杆菌，单味药以黄芩、黄连、连翘、丹参MIC和MBC较小，其中黄连的MIC值达到了8mg/mL；对金黄色葡萄球菌，单味药以黄连、连翘、黄芩MIC和MBC值很小，其中黄连MIC值到了8mg/mL，连翘MIC值达到了16mg/mL，地锦草、苦参、丹参、红花、黄芪、党参MIC和MBC值次之，其MBC值均小于250mg/mL；对链球菌，单味药以黄连、黄芩、苦参、丹参、连翘的MIC和MBC值较小，其中丹参的MIC值达到了16mg/mL，抑菌和杀菌效果最好。在所涉浓度范围内，未测出白术、益母草、桃仁、党参、当归对3种菌全部或部分的MIC和MBC值（表2）。

从广义叙述学的视角来看，无论是新闻还是电影，都是一种由符号组合构成的叙述文本。如果从一般意义的叙述分类来说，以事实报道为主的新闻体裁属于纪实型叙述，以反映剧情为主的电影体裁(非纪录片)属于虚构型叙述。

 

表2 中药对各种细菌的MIC和MBC值

  

注：***表示高敏，**表示中敏，*表示低敏。

 

中药黄连黄芩苦参黄柏连翘地锦草丹参红花益母草桃仁黄芪白术当归党参大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 链球菌MIC值 /mg·mL-1MBC值 /mg·mL-1 16***125***500*500*125***500*125***250**500*MIC值 /mg·mL-1 8***8***62.5***250*250*62.5***250*125**125**250*32***250*250*16***62.5***125**125**------------125**-125**125**MBC值 /mg·mL-1 8***32***250**500*16***125***250**250**MIC值 /mg·mL-1 32***32***32***250*125**-16***125**MBC值 /mg·mL-1 32***64***64***500*125***-32***500*--250**-500*250**------------

4 讨论与小结

4.1 试验药物抑菌作用比较

综合平板打孔法测抑菌圈直径和试管二倍稀释法测最低抑菌浓度和最小杀菌浓度的试验结果，黄连、黄芩、连翘、丹参对大肠杆菌有强抑制作用，黄连、苦参、丹参、红花、黄芩、地锦草、连翘对金黄色葡萄球菌具有强抑制作用，黄连、黄芩、苦参、丹参对链球菌有强抑制作用；黄连、黄芩、丹参对3种菌均有强抑制作用，其中以黄连的抑菌效果最好。

本试验所选用的药物可以分为3大类：清热药：黄连、黄柏、黄芩、苦参属于清热燥湿类药物，连翘、地锦属于清热解毒类药物；理血药：丹参、桃仁、益母草、红花属于活血祛瘀类药物；补虚药：党参、黄芪、白术属于补气类药物，当归属于补血类药物。实验数据显示，清热药的抑菌效果较理血药、补虚药强，对实验中的3种主要致病菌有很强的抑制作用，另外，理血药、补虚药中也有个别药有抑菌作用。

4.2 中药抑菌成分提取方法的分析

中药中发挥作用的是其所含的有效成分。黄连发挥作用的成分是生物碱，以小檗碱为主，约为5%～8%，黄柏中小檗碱约为1.4%～4%，抑菌作用较弱。黄芩中发挥抑菌作用的主要成分是黄芩素、黄芩苷（黄酮类）。丹参发挥抑菌作用的主要成分是丹参醌（醌类）、丹参酮、丹参酚，连翘酚可能为连翘的抗菌有效成分。没食子酸为地锦的主要抗菌有效成分，苦参碱、金雀花碱可能为苦参的抗菌有效成分。由于各种中药的抑菌成分不同，提取方法也有一定差异，而在试验中，更多考虑到实际情况，均采用水煎法提取有效成分，药物未必达到最佳提取要求，因此可以肯定药物有抗菌作用，且其实际的抗菌作用甚至比试验结果显示的更强。

4.3 中药在防治奶牛子宫内膜炎上的展望

治疗子宫内膜炎主要是控制细菌感染。采用抗生素类药物防治奶牛子宫内膜炎，虽然可以消除感染，控制炎症的发生发展，却很难修复因感染所造成的子宫内膜的损伤，而且近些年由于大量应用抗生素类药物治疗，使许多细菌产生了耐药性，在治疗上效果不显著，特别是抗生素在奶中的残留，造成了严重的经济损失。同时，人们越来越关注食品安全问题，这使得奶牛子宫内膜炎的治疗难度越来越大，要求也越来越高。应用中草药及其他新型药物进行治疗已成为研究奶牛子宫内膜炎的热点之一。

中药抗菌抗病毒的物质基础是活性成分，目前，已知多为生物碱、甙类、酸类、酮类、醛类、酚类和挥发油等，如小檗碱、白头翁素、穿心莲内酯、苯甲酸等均为活性成分。抗菌抗病毒中药的活性成分均能直接抑制或杀灭细菌、真菌和病毒，抑制细菌、真菌的繁殖和病毒的复制，参与细菌和霉菌的生化过程，改变其酶和细胞膜等功能，如山梨酸。而清热药、活血或补血药等类中药多有抑菌作用，其中以黄芩、连翘、蛇床子和硼砂效果较好。且中药是纯天然物质，可以调节机体的特异性和非特异性免疫，具有解热、镇痛、抗炎症的作用，毒副作用甚微，几乎无残留，不易产生耐药性，在治疗奶牛疾病方面具有独特优势，日益受到人们的青睐。 □

参考文献：

[1] 孔祥峰,胡元亮,杨龙圣,等.奶牛子宫内膜炎病原菌的分离鉴定及中药的抑菌作用[J].畜牧与兽医,2005,37(9)：15.

[2] 李世宏,严作廷,谢家声,等."清宫液2号"治疗奶牛子宫内膜炎试验研究[J].中兽医医药杂志,2009,28(6)：32-33.

[3] 赵树臣．中药组方治疗奶牛子宫内膜炎的研究[D]．内蒙古农业大学,2007.

[4] 梁利国,邴旭文,张晓军,等．18种中草药煎液对温和气单胞菌的抑、杀菌效果[J].淡水渔业,2010,40(1)：66-69.