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一例猪传染性胸膜肺炎的实验室检测与分析

更新时间：2009-03-28

猪传染性胸膜肺炎是由猪胸膜肺炎放线杆菌引发的以急性出血性纤维素性胸膜肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为临床特征的高度传染性呼吸道疾病，又称猪接触性传染性胸膜肺炎。该病由于多呈急性死亡且具有高度传染性，成为影响生猪养殖经济效益的主要疫病之一。该病根据病理变化分为最急性、急性、亚急性和慢性4种类型。

1.6 不良反应评价标准 治疗术中及术后观察患者是否出现以下症状及其程度。（1）无任何不适症状；（2）轻度：穿刺部位刺痛、胀痛，持续时间小于30 min或吞咽时有异物感。低热，体温低于38.5℃；（3）中度：穿刺部位疼痛较严重，持续30 min以上或局部可触及硬结。高热，体温高于38.5℃；（4）重度：恶心、呕吐、呼吸困难，损伤颈部大血管、气管或喉返神经等等，甚至发生休克者。

1 临床症状

湖南衡阳市某猪场母猪突然发病，体温升至41℃，精神颓废，出现咳嗽、气喘，呈明显的腹式呼吸，常呆立或呈犬坐姿势，其中两头母猪24h后突然死亡。

晓渊去年以选拔入都，出其先德《梅岭课子图》索题，尘事牵缀未有以报。今将以别驾之，官江苏，重来叙别，率书五十六字应之：

2 剖检变化

主要病变发生在肺和呼吸道内。肺出血、水肿，双侧性肺炎，心叶及尖叶病灶区呈紫红色，轮廓清晰，与正常组织界限分明；肺间质积留血色胶样液体；气管、支气管中充满泡沫状血样粘液及渗出物；喉头、鼻腔内充满血样液体；肝、脾肿大，色变暗。

逆变法属于一种逆向思维，它是“正难则反”思想在化归策略中的一种，简单地说，逆变法就是数学形式的反面思考，实现对立双方的转化〔3〕81。将y=f（x）看成是x的方程，若求得x=g（y），由g（y）的定义域及x的范围（原来函数y=f（x）的定义域）即g（y）的范围，则可求得y的范围。

3 实验室检测

3.1 细菌分离培养

挑取单菌落革兰氏染色镜检，可见革兰氏阴性小球杆菌，呈线状、多形性和丝状。

3.2 镜检形态

解剖发病死亡的两头母猪，无菌取肺脏深部组织，划线于巧克力培养基上，37℃培养48h，观察细菌生长结果。细菌分离结果可见圆形、坚硬的“蜡状型”、有黏性的菌落。

  

图1 分离细菌镜检图片

3.3 16SrDNA测序鉴定

从巧克力培养基上挑取单菌落作模板，用细菌通用引物16srDNA（引物信息见表1）进行PCR扩增（扩增结果见图 2）。50μL的 PCR体系：水40μL，10×PCR buffer 5μL，dNTP 2μL，上、下游引物各 1μL，Taq酶 0.5μL，模板 0.5μL。反应条件为 94℃预变性 5min，94℃变性 30s,58℃退火30s，72℃延伸 30s，循环 30 次，72℃延伸 7min，4℃保存。取5μL PCR产物经琼脂糖凝胶电泳验证后，产物送金斯瑞生物技术有限公司测序。结果其同源性与胸膜肺炎放线杆菌达到99%，初步断定该细菌为胸膜肺炎放线杆菌。

 

表1 16srDNA引物信息[1]

  

特异性引物16SrDNA序列AGAGTTTGATCCTGGCTCAG CGGTTACCTTGTTACGACTT长度1500bp退火温度/℃58

  

图2 细菌通用引物16srDNA检测结果

 

（阴：阴性对照；1：细菌；M：DNA分子量标准）

3 .4细菌药物敏感性检测

将分离到的细菌接种于TSB液体培养基中，并加入1/1000的生长因子（V因子）进行培养，将其浓度调至0.5麦氏单位浓度，进行药物敏感性检测（结果见表2）。由表2可见β-内酰胺类药物、第3代头孢药物和喹诺酮药物对细菌相对敏感，而酰胺醇类药物、四环素药物的敏感度低。

 

表2 细菌药物敏感性检测

  

药物名称恩诺沙星氟苯尼考丁胺卡那多西环素青霉素大观霉素抑菌环/mm 30 10 20 14 27 27敏感性高度低度中度低度高度高度药物名称头孢曲松头孢噻肟阿莫西林庆大霉素林可霉素环丙沙星抑菌环/mm 34 42 12 20 13 30敏感性高度高度低度中度低度高度

4 讨论与分析

4.1 药敏试验有助于病情控制

细菌分离结果显示，从2头死亡母猪体内均检测到胸膜肺炎放线杆菌，而且从肺中只分离到这一种细菌，证明非混合感染。取分离的细菌进行药物敏感性检测，结果发现细菌对β-内酰胺类药物、第3代头孢药物和喹诺酮药物较敏感。由此建议猪场隔离病猪并严格消毒，降低猪群密度，及时清扫猪舍内的排泄物，配合使用头孢噻呋钠进行治疗与防控，结果该场病情得到了有效控制。

4.2 猪传染性胸膜肺炎防控要点

猪传染性胸膜肺炎常发生于4～5月和9～11月[2]。气候更替、环境变化、猪场转群、或长途运输等应激因素都会增加发病率和死亡率。因该病为经空气传播的高度传染性呼吸道疾病，在加强饲养管理和严格卫生消毒的前提下可考虑免疫接种灭活疫苗[3]，同时做好控制猪舍养殖密度、人员流动和灭鼠灭鸟等工作，可以避免直接或间接传播本病。 □

参考文献：

[1] WEISBURG WG,BARNS SM,PELLETIER DA,et al.16S Ribosomal DNA Amplification for Phylogenetic Study[J].J Bacteriol,1991,173(2)：697-703.

[2] 侯红岩，何家惠，侯继波.猪传染性胸膜肺炎的流行病学和流行特点[J].兽医导刊,2010,(9)：33-35.

[3] 张朝阳,刘二龙.猪传染性胸膜肺炎研究进展[J].中国畜牧兽医文摘,2006,(6)：62-63.

 
张磊，黎满香
《湖南畜牧兽医》 2018年第01期
《湖南畜牧兽医》2018年第01期文献

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