柚皮苷是从芸香科植物柚果实中分离的黄酮类化合物，有报道柚皮苷能调节脂质代谢[1-5]，但其机理未明。前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)/低密度脂蛋白受体(LDLR)通路已经成为高胆固醇血症治疗的新靶点[6-10]，所以，本试验研究柚皮苷是否可通过调节PCSK9- LDLR通路防治试验性大鼠的高脂血症。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品 柚皮苷，纯度98%，上海永家生物科技有限公司产品；荧光定量PCR试剂盒，上海恪敏生物科技有限公司产品；甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)，低密度脂蛋白胆固醇( LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒，上海信帆生物科技有限公司产品；胆酸钠和胆固醇，国药集团试剂有限公司产品。

1.1.2 实验动物 健康雌性SD大鼠60只，雌雄各半，体重200 g～220 g，基础饲料和高脂饲料(1%胆固醇、8%猪油、0.25%胆酸钠和90.75%的基础饲料)由湖南农业大学动物医学院小动物实验中心提供。

1.2 方法

1.2.1 试验分组 动物试验分组：基础饲料适应喂食1周后，大鼠随机分成6组(n=10)，即正常对照组、高脂模型组、低剂量预防组、高剂量预防组、低剂量治疗组和高剂量治疗组。正常对照组喂食基础饲料，其余各组喂食高脂饲料，自由进食饮水。低、高剂量预防组每天需同时灌喂低剂量(10 mg/kg)、高剂量(30 mg/kg)柚皮苷。低、高剂量治疗组需在喂食高脂饲料1周后开始灌喂柚皮苷。5周后，颈总动脉取血分离血清测定血脂。处死大鼠，摘取肝脏分析PCSK9和LDLR的表达。

深圳莲花山公园筹建于1992年10月，1997年6月正式对外局部开放，公园总占地面积约194公顷，是深圳市民休闲游憩的免费公共场所.在深圳调研期间，分别在工作日和休息日的早上、上午、中午、下午、傍晚时段对莲花山公园的无障碍环境和园内休闲游憩的游客进行了观察和访谈.

高脂模型组大鼠血清TG、TC、LDL-C都显著高于正常对照组，HDL-C显著低于正常对照组(P<0.01)，表明实验性大鼠高脂模型建立成功。4个柚皮苷处理组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平都显著低于高脂模型组，4个柚皮苷处理组中HDL-C的水平较高脂模型组有明显升高(P<0.05或P<0.01)(表1、表2)。

1.2.3 统计方法 所有数据用SPSS22.0进行分析。

D2D通信的建立有两种方式：基站辅助通信建立和设备自组织建立。设备自组织建立方式，不需要基站的参与，但需要更为复杂的信令交互和资源分配方式，需要考虑更多的运用场景与潜在问题，因此，在通信网络正常的情况下，基站辅助通信建立是一种更优的方式。本文考虑在通信网络正常、网络故障或者无线环境恶劣两种情况下列车之间D2D通信的建立与维持等内容。

2 结果

2.1 柚皮苷对大鼠肝PCSK9和LDLR mRNA表达的影响

高脂能显著增加大鼠肝PCSK9表达水平，降低LDLR表达(P<0.01)。试验结束时，4个柚皮苷处理组大鼠肝PCSK9表达水平都显著低于高脂模型组，与此同时，4个柚皮苷处理组中LDLR表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)(图1)。

2.2 柚皮苷对大鼠血脂的影响

1.2.2 检测指标和方法 肝PCSK9和LDLR mRNA表达采用荧光定量PCR检测(PCSK9:forward,5′-TTGCAGCAGCTGGGAACTT-3′,reverse,5′-CCGACTGTGATGACCTCTGGA-3′; LDLR:forward,5′-AGGCTGTGGGCTCCATAGG-3′,reverse,5′-TGCGGTCCAGGGTCATCT-3′; 36B4:forward,5′-GCGACCTGGAAGTCCAACTAC-3′,reverse:5′-ATCTGCTGCATCTGCTTGG-3′)[3]；血脂(TC、TG、LDL-C和HDL-C)水平采用试剂盒(北京中生北控生物科技股份公司)和全自动生化分析仪(日本日立7170型)检测。

英国有着系统完善且渠道清晰的足球运动员培训与选拔体系，其体系构架由英国足球协会（Football Association)管理下的职业足球运动员培养体系和英格兰校园足球协会（England School Football Association)管理下的校园足球运动员培养体系构成，2个体系呈双“金字塔”形状，之间通过社区足球（Community Football）与职业球探（Professional Scout）进行衔接，构成了英国独具特色的“双金字塔”足球人才培养体系（图1）。

A.PCSK9表达；B.LDLR表达。与对正常对照组相比，**P<0.01; 与高脂模型组相比*P<0.05,**P<0.01;1.正常对照组; 2.高脂模型组; 3.低剂预防组; 4.高剂预防组; 5.低剂治疗组; 6.高剂治疗组

A.PCSK9 expression; B.LDLR expression.Compared with control group,**P<0.01;Compared with model group,*P<0.05,**P<0.01;1.Control group; 2.High lipid group; 3.Low dose preventive group; 4.High dose preventive group; 5.Low dose treated group; 6.High dose treated group

图1 肝前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)和低密度脂蛋白受体mRNA表达

Fig.1 Expressions of hepatic PCSK9 and LDLR mRNA

表1 柚皮苷对大鼠血脂中甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)的影响

Table 1 Effects of naringin on serum TC and TG in rats

组别 Groups胆固醇/(mmol·L-1) TC 试验前 Before test试验后 After test甘油三酯/(mmol·L-1) TG 试验前 Before test试验后 After test正常对照组 Control group2.70±0.372.71±0.260.75±0.091.22±0.15高脂模型组 High lipid group2.70±0.2411.02±1.58++0.82±0.092.65±0.30++高剂量预防组 High dose preventive group2.67±0.395.85±0.63**0.85±0.071.42±0.16**低剂量预防组 Low dose preventive group2.72±0.218.23±0.77*0.82±0.101.95±0.18*高剂量治疗组 High dose treated group2.73±0.356.23±0.5**0.80±0.091.52±0.17**低剂量治疗组 Low dose treated group2.72±0.289.01±0.82*0.81±0.082.03±0.22*

注：与正常对照组相比++P<0.01；与高脂模型组相比*P<0.05,**P<0.05

Note:Compared with control group,++P<0.01；：Compared with high lipid group,*P<0.05,**P<0.05

表2 柚皮苷对大鼠血脂中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的影响

Table 2 Effects of naringin on serum HLD-C and LDL-C in rats

组别 Groups高密度脂蛋白胆固(HDL-C)(mmol/L)试验前 Before test试验后 After test低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) (mmol/L)试验前 Before test试验后 After test正常对照组 Control group1.26±0.141.27±0.140.24±0.020.25±0.03高脂模型组 High lipid group1.25±0.151.22±0.120.25±0.036.46±0.70高剂量预防组 High dose preventive group1.30±0.15 1.59±0.18**0.26±0.023.06±0.42**低剂量预防组 Low dose preventive group1.28±0.161.35±0.15*0.27±0.034.02±0.51*高剂量治疗组 High dose treated group1.29±0.131.42±0.16**0.25±0.033.57±0.32**低剂量治疗组 Low dose treated group1.27±0.111.37±0.12*0.26±0.034.41±0.46*

注：与正常对照组相比++P<0.01；与高脂模型组相比*P<0.05,**P<0.05

Note:Compared with control group,++P<0.01；：Compared with high lipid group,*P<0.05,**P<0.05

3 讨论

PCSK9也称为神经细胞凋亡调节转化酶1或原蛋白转化酶9，是枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶家族的成员。PCSK9基因突变已与一个常染色体显性遗传的家族性高TC血症和低TC血症相链接。自然发生的PCSK9基因各种功能增益突变和功能损失突变，已经分别被确定与高TC血症和低TC血症有关。这些的变异可通过提升其蛋白酶活性，减少LDLR水平从而阻碍TC摄取到细胞引起疾病；PCSK9的几个变种也被可认为可导致循环中TC水平的 显著降低[9-10]。

血浆LDL-C升高是心血管疾病的重要危险因素。血浆LDL-C水平可通过结合到LDLR吸收进细胞来控制。PCSK9的主要生理功能之一是介导LDLR的降解，控制LDLC颗粒在血液中循环的水平。当PCSK9结合LDLR的表皮生长因子样重复结构A时，可刺激LDLR的降解。LDLR水平的降低会导致LDLC代谢的减弱，这可能会导致高TC血症和血浆LDLC水平的升高。本试验的结果表明高脂血症大鼠PCSK9的表达和血浆TG和TC水平显著升高，LDLR的表达和血浆HDL-C水平显著降低。因此，PCSK9-LDLR已经成为新的调节血脂药物作用通路[11-12]。

柚皮苷天然存在于柑橘类水果中，尤其是在葡萄柚中，它与这些水果的苦味有关[1]。本试验证实了以前的结果即柚皮苷能调节脂质代谢[1]。本试验还发现柚皮苷能降低大鼠肝PCSK9表达水平，增加LDLR表达，表明柚皮苷能调节PCSK9-LDLR改善脂代谢紊乱，防治实验性大鼠的高脂血症。

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