凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)又称南美白对虾，自20世纪90年代引进我国以来，其养殖产业得到迅速发展[1]。然而，发展是粗放式的，为了控制大规模高密度养殖带来的环境压力，许多养殖户选择在苗种培育过程中向养殖水体中投放大量的化学添加剂，对生态环境产生了不可逆转的影响。同时，这种“亡羊补牢”式的养殖方式，也使得南美白对虾苗种的抗逆性能越来越差。此外，近年来，以白斑综合症、急性肝胰腺坏死症为代表的对虾病害的大规模暴发，对南美白对虾养殖产业造成重大的损失。因此，生态养殖越来越受到人们的关注[2-7]。有研究表明，在中国对虾(Penaeus chinensis)的育苗过程中使用微生态制剂，可明显改善育苗水体水质，并能显著提高虾苗的出苗率[8]。

微生态制剂是益生菌的统称，是可用于水产养殖中的活菌制剂[9]。芽孢杆菌(Bacillus)和乳酸菌(Lactobacillus)是水产养殖和育苗过程中经常使用的2种益生菌[10]。研究表明，芽孢杆菌能产生多种消化酶，帮助动物对营养物质进行消化吸收，从而促进动物的生长和存活[11-13]；乳酸菌是可发酵糖类且主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称[14]，乳酸菌可以降低水中氨氮的含量，分解养殖水体底质的腐败物质，有效地调控水质[15-16]。目前，针对微生态制剂在南美白对虾养殖应用的研究主要集中在商品虾养殖中[2-3,10]，而在南美白对虾苗期的应用及用量研究相对较少。鉴于此，本试验在南美白对虾整个育苗过程中定期添加芽孢杆菌和乳酸菌，研究益生菌对南美白对虾育苗效果的影响，旨在为南美白对虾的生态育苗提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

供试芽孢杆菌制剂由中国水产科学研究院南海水产研究所自行分离、筛选、培养的菌株培养，活菌量为1.2×109 cfu/g；乳酸菌制剂购自广州市欣海利生生物科技有限公司，呈液体状，活菌量为1.0×108 cfu/g；供试南美白对虾的无节幼体购自深圳环球集团。

1.2 试验设计

南美白对虾无节幼体养殖于室内玻璃纤维水桶(300 L)中，每桶放幼体20 000尾。将南美白对虾无节幼体随机分为7组，包括对照(C)组和试验(Y1、Y2、Y3和R1、R2、R3)组，每组设3个重复。试验期21 d(2016年8月28日— 9月18日)。育苗过程中的饲养管理方法见表1，Y1、Y2、Y3等3个试验组分别在0 d(放入无节幼体的前1 d)、1 d、6 d、11 d和16 d添加芽孢杆菌制剂，使育苗水体芽孢杆菌制剂分别达到10 g/m3、15 g/m3和20 g/m3；R1、R2、R3等3个试验组在0 d、1 d、6 d、11 d和16 d添加乳酸菌制剂，使育苗水体乳酸菌制剂分别达到20 g/m3、25 g/m3和30 g/m3；C组不添加任何微生态制剂。试验期间不换水，所用海水盐度为30‰～32‰，pH值为7.5～8.0，24 h不间断充气，溶解氧保持在5.0 mg/L以上。

 

表1 南美白对虾育苗期间饲养管理

  

生长阶段投喂饵料投喂时间温度/℃充气量光照强度无节幼体不投喂,利用自身卵黄营养生长30微波状忌强光蚤状幼体开口饵料(单细胞藻类、虾片)每隔3 h投喂1次30微沸状忌强光糠虾初期轮虫、虾片每隔4 h投喂1次30沸腾状加强光照糠虾中期、仔虾增投丰年虫幼体每隔6 h投喂1次30强沸腾状增强亮度

1.3 测定指标

1.3.1 生长指标 在无节幼体变态至糠虾幼体后，用1 L的采水器分别在桶的4个角落的上层和底层以及桶的中心取9个点，统计1 L水中糠虾幼体数量的平均值，重复3次，计算出水桶中糠虾幼体的数量。在幼体变态至仔虾后，用同样的方法统计桶中虾苗的数量。在试验结束时，将每个桶中的虾苗收集至滤网中称取总质量(W1,精确至0.001 g)，再于每个桶中取100 ind虾苗，称取其质量(W2)，计算每尾虾苗的平均质量(W)及虾苗的成活率(SR)。计算公式如下：

20世纪90年代，微生态制剂开始逐渐应用于水产养殖中[17]。微生态制剂主要有以下2种作用机制：一是直接作用于养殖动物本身，可作为养殖动物的饵料被其直接利用，从而促进养殖动物的生长以及提高养殖动物的消化机能和对饲料的利用率[18-20]；二是作用于养殖水体，通过对养殖水体环境的改善，使养殖生物有一个良好的生存环境，从而达到生态养殖、健康养殖的效果[10,21-22]。研究表明，芽孢杆菌可以提高水产养殖动物消化酶活性，增加动物机体对饲料的消化利用率，从而提高摄入营养物质的转化率[23]；乳酸菌可以降低水中氨氮的含量，分解养殖水体底质的腐败物质，有效地调控水质[8-9]。本试验中，在南美白对虾育苗期间定期添加芽孢杆菌和乳酸菌，可不同程度提高虾苗的体质量，这一结果与袁成玉等[24]在刺参上的研究结果一致。芽孢杆菌能够分解有机物，改良育苗水体水质[25]，本试验中，添加芽孢杆菌的试验组可观察到絮状物质，虾苗可以将这些絮状物质作为食物进行摄食，因此，添加适量的芽孢杆菌可明显提高虾苗的体质量。乳酸菌的主要作用是调控水质，抑制有害菌类的生长和繁殖[12]，因此，添加相对少量的乳酸菌的试验组在提高虾苗体质量方面无明显作用，而高剂量组作用显著。

W= W2/100

(1)

SR= [(W1/W)/20 000]×100%

(2)

3.2 庞大的足球师资体系 根据2015年英国足球总会财政报告中统计，英国现在各级各类注册教练员共计约300 000人，此外还有各类足球活动志愿者400 000人[6]。

采用 Excel 对虾苗各个阶段的成活率、体质量以及抗逆性等进行样本频率的假设检验，以此来统计各组间的差异性。采用SPSS 19.0软件的One-way ANOVA分析进行差异性比较，并利用Duncan’s多重比较法分析不同组之间的差异显著性，数据用平均数±标准差表示。

当南美白对虾虾苗变态至糠虾阶段时，各组之间的糠虾幼体成活率差异均不显著，成活率为70%～80%(图2)。当虾苗变态至仔虾幼体后，虾苗成活率差异整体显著，其中对照组的成活率显著低于试验组，R3组的仔虾幼体成活率最高，较C组显著提高10.45%。且芽孢杆菌组虾苗成活率均低于乳酸菌组。虾苗出苗时，R3组虾苗的成活率最高，较C组提高34.86%。

1.4 数据分析

温度突变存活率：每桶随机取虾苗100 ind，放入低于养殖桶温度5 ℃的同盐度水中2 min，立刻全部捞出放至原养殖桶水中，15 min后统计虾苗的数量。

2 结果与分析

2.1 不同微生态制剂对南美白对虾虾苗体质量的影响

由图3可见，将虾苗放至淡水中30 min后，存活率均约为100%，且各组之间无显著性差异。放置在淡水中的时间延长至60 min后，试验组的存活率均显著高于对照组，与对照组相比，Y1组、Y2组、Y3组、R1组、R2组和R3组的存活率分别提高14.05%、16.53%、14.05%、13.22%、14.05%和14.88%，各试验组之间差异不显著。

  

不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，下同

 

图1 不同微生态制剂对南美白对虾虾苗体质量的影响

2.2 不同微生态制剂对南美白对虾各个变态阶段成活率的影响

线性一直以来是护栏外观追求的一项重要指标，也是为护栏涂粉增光的重要手段，所以线性的好坏很重要。既然重要，就会在此追求中投入太多，如果前面按要求做了，全线走两遍就基本可以达到线性美观、直顺的要求。第一遍对线形边走边调整高低、左右，紧跟进行螺丝的紧固，对于螺丝不能拧紧的地方进行重新钻眼，保证螺丝全部就位；第二遍就是对紧螺丝后线形不合适的地方进行调整。然后进行防盗螺丝的就位，顺带对松的螺丝进行加固。以往线型调整多次，仍有部分段落线形不顺直，就是不能采取好的施工顺序，不注重螺丝的紧固时间和二次进行螺丝紧固。一般都是紧好螺丝进行调整或者螺丝不紧，板的受约束力太小，调过的地方，前面调后面又有变形。

1.3.2 虾苗抗逆性 淡水存活率：每桶随机取虾苗100 ind，放入盐度为0的水中，分别在30 min和60 min时统计存活虾苗的数量。

  

图2 不同微生态制剂对南美白对虾各变态阶段成活率的影响

2.3 不同微生态制剂对南美白对虾虾苗抗逆性的影响

从图1可知，C组虾苗的体质量最小，Y3组的虾苗体质量最大，较C组显著提高27.18%，R3组次之。

  

图3 淡水试验中虾苗的存活率

温度突变试验结果显示，与对照组相比，Y1组、Y2组、Y3组、R1组、R2组和R3组的存活率分别显著提高9.29%、9.84%、10.38%、8.74%、9.29%和10.38%，各试验组之间差异不显著(图4)。

  

图4 温度突变后虾苗的存活率

3 结论与讨论

3.1 微生态制剂对虾苗生长性能的影响

碳足迹（carbon footprint），是对二氧化碳这种温室气体（greenhouse gas）量化的一种方式。二氧化碳是温室气体的主要构成部分，约占温室气体总量的85%以上，是气候暖化的最大威胁，因此碳足迹是量化低碳可持续发展的关键指标。有关旅游碳足迹的国外研究成果丰硕，主要是旅游交通、旅游建筑、旅游商品、娱乐方式等方面的量化研究。本研究主要涉及旅游目的地饭店建筑全生命周期碳足迹排放的量化，因此本文文献梳理主要集中在这个方面的研究成果。

按照H公司规定，销售人员要与客户签订销售合同。但公司并没有制定完善的合同制度，也没有严格按照合同执行，销售人员常会降低标准，甚至不签订销售合同，公司合法权益就失去法律保障。一旦顾客未及时还款，或没有偿还能力时，公司只能将这笔账作为坏账来处理，由于合同制度不完善带来的风险全部转嫁给H公司承担。例如，H公司规定对于先发货后收款业务，增值税专用发票开票前提是必须拿到汇款单。但日常工作中很多客户要求先开具增值税发票，销售人员为维持与客户的关系常提前开票。而由于公司合同制度不完善，并未增设相关保护条款，客户一看无束缚条件就会延长还款时间，造成该笔账款长期留在账面上成为呆账坏账。

不同微生态制剂对南美白对虾各个变态阶段成活率有不同的影响。当南美白对虾变态至糠虾幼体时，试验组和对照组糠虾幼体成活率无明显差异，这一结果与杨章武等[25]的研究结果一致，这是由于育苗期前期水质状况相对良好，在饵料充足、条件适宜的情况下，健康的虾苗均可变态至糠虾幼体。当糠虾幼体变态至仔虾幼体时，由于投喂的虾片等高蛋白质残饵的积累分解，加之粪便的积累，水质发生一定程度的恶化。益生菌的使用，可在一定程度上调节水质，因此，试验组虾苗在变态至仔虾幼体时的成活率显著高于对照组。在试验组中， R3组变态至仔虾幼体的成活率最高，且芽孢杆菌组成活率均低于乳酸菌组，这可能由于乳酸菌对水质的调节能力优于芽孢杆菌，也可能是由于乳酸菌在育苗水体的繁殖速度大于芽孢杆菌，因此，下一步还需要对育苗水体水质指标及不同细菌总数加以测量。

3.2 微生态制剂对虾苗抗逆性的影响

抗逆性是动物对环境突然变化的适应能力的衡量指标，当遇到环境温度、盐度的突然升高或降低、细菌病菌感染、饲料的突然变化等状况时，动物都会产生应激反应，而抗逆性的大小既与遗传有关，也受动物本身健康状况的影响[16,26]。水温、盐度突变是养殖过程中常见的胁迫因子[16]，虾苗抗逆性的强弱是对胁迫因子耐受性的关键，因此，对于虾苗抗逆性的探究非常必要。本试验中，将各组虾苗置于盐度为0的水中30 min后，虾苗几乎无死亡现象；随着在淡水中时间的延长，对照组虾苗的存活率明显低于试验组，而各试验组之间差异不明显，温度突变试验也得到了相同的结果。以上结果表明，在南美白对虾育苗过程中少量添加微生态制剂可显著提高虾苗的抗逆性能。芽孢杆菌作为虾苗的饵料，可增强虾苗的消化机能，同时可以提高苗体蛋白酶活力；而乳酸菌对育苗水环境的改良作用则可以为虾苗提供适宜的生存生长环境。因此，在南美白对虾育苗过程应添加微生态制剂，以提高虾苗的抗逆能力，从而降低虾苗运输过程及下塘后的死亡率。

综上，南美白对虾育苗过程中定期添加一定量的微生态制剂能够提高虾苗的成活率及个体体质量，同时可增强虾苗的抗逆性能，以泼洒乳酸菌效果较好。微生态制剂的泼洒周期以及泼洒量与苗池负载量、水源情况等因素密切相关，施用时应按照各种微生态制剂的有效微生物含量、生理活性、生态特点进行调整，以达到最佳效果。

（2）绩效体系有待不断完善。指标体系建设特别是三级个性指标的设置，关系到项目资金使用绩效评价的好坏。部分项目前期可行性研究不充分，个性目标设置上不够科学、合理，对项目工作量的预估偏差较大。

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