禽白血病(Avian leukosis，AL)是由禽C型反转录病毒群病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，是致鸡肿瘤的主要疾病，以淋巴白血病最为常见，其次是成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病等，对养鸡业危害巨大[1-3]。根据病毒囊膜糖蛋白抗原差异，禽白血病病毒(ALV)被分为A、B、C、D、E、和J等亚群。自然条件下，由ALV导致的肿瘤病例主要是由A、B亚群引起的；C、D亚群引起的肿瘤鲜有报道；E亚群属于内源性禽白血病病毒，没有致瘤性和致病性；J亚群于1989年在商品肉鸡中发现，与鸡的髓细胞性白血病有关，现在是最常分离到的禽白血病病毒亚群。禽白血病可以引起患病鸡生长受阻、免疫抑制，或与其他疾病混合感染而导致大批禽只死亡或淘汰[4-9]。目前，禽白血病造成机体免疫抑制或免疫耐受的分子机制仍未明确，也无有效的疫苗可以使用。鉴于禽白血病对鸡群的危害，《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》提出要求，国内所有种鸡场在2020年底前完成禽白血病的净化工作。由于禽白血病既可垂直传播又可水平传播，净化和防控难度较大。信阳地区以丘陵为主，近年来林地经济发展迅速，林下土鸡养殖蓬勃发展，部分鸡场有禽白血病发生，并混合感染其他病毒性或细菌性疾病，造成鸡只死亡，给土鸡养殖户带来较大的经济损失。为了解信阳地区土鸡群禽白血病A-B亚群带毒情况，采用美国IDEXX公司生产的禽白血病病毒抗体检测试剂盒(ALV-Ab)对土鸡群进行检测调查，以期为信阳地区禽白血病的净化防控提供参考。

1 材料和方法

1.1 血清样品采集及处理

2016年3月—2017年7月，对信阳地区77个不同规模肉蛋兼用型土鸡场的鸡只采血，每只鸡通过翅静脉无菌采集全血不少于2 mL，共采集不同日龄血样1 351份，冷藏条件下送达实验室。血样3 500 r/min离心3 min，取上清液于2.0 mL灭菌离心管中，统一登记编号。处理好的血清均置于-20 ℃冰箱保存，备用待检。

1.2 主要试剂及仪器

禽白血病病毒抗体检测试剂盒(ALV-Ab)购自美国IDEXX公司。Eppendorf 10～1 000 μL单道移液器及25～300 μL多道移液器，购自德国Eppendorf公司；ELX-800全自动定量绘图酶标仪购自美国Thermo公司；LC-800低速离心机购自科大创新股份有限公司中佳分公司；303系列电热恒温培养箱购自上海树立仪器仪表有限公司。

1.3 抗体检测方法

血清学检测在信阳市动物疫病预防控制中心实验室进行，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法操作，按照试剂盒说明书进行。具体步骤如下。

取出抗原包被板并在记录表上标记好被检样品的位置；取100 μL未稀释的阴性对照加入A1孔和A2孔中，取100 μL未稀释的阳性对照加入A3孔和A4孔中，取100 μL稀释的被检样品液加入相应的孔中，所有被检样品都进行双孔测定，室温(18～25 ℃)下孵育30 min；吸取各孔的液体弃入废液筒，每孔加约350 μL去离子水进行洗板，洗3～5次；每孔加100 μL的酶标羊抗鸡抗体(HRPO)，室温下孵育30 min；吸取各孔的液体弃入废液筒，每孔加约350 μL去离子水进行洗板，洗3～5次；每孔加100 μL的TMB底物液，室温下孵育15 min；每孔加入100 μL终止液；测定并记录各孔于650 nm波长的吸光值A650。

土鸡禽白血病A-B亚群血清学调查覆盖信阳地区77个土鸡场，调查结果显示，26个鸡场阳性，阳性率为33.8%；淮滨县、潢川县、商城县的鸡场阳性率均在50%以上，商城县最高，为75.0%，息县未发现阳性鸡场(表1)；对不同县区鸡场阳性率进行卡方检验，χ2=83.30>20.09,P<0.01，df=8，各县区间鸡场阳性率差异极显著。 共调查检测样品1 351份，阳性75份，阳性率5.6%；商城县阳性率最高，为20.9%，其次是光山县，为12.5%，息县未检出阳性样品；对不同县区检测样品阳性率进行卡方检验，χ2=10.22<15.507，P>0.05，df=9，差异不显著。

检测结果采用SPSS 19.0软件进行分析，不同县区抗体阳性率和个体阳性率、不同月份抗体阳性率及不同场点类型抗体阳性率，进行χ2检验分析差异显著性。

1.4 数据处理

衔接理论研究以Halliday和Hassan的Cohesion in English一书为标志创立。衔接是进行语篇分析的一个重要手段。衔接不是一种结构关系，在小句之间也有衔接。衔接与句子边界没有关系，因为它是语义关系，不是结构关系。Halliday和Hassan将衔接归为五种类型：照应（reference）、替代（substitution）、省略（ellipsis）、连接（conjunction）和词汇衔接（lexical cohesion）。

2 结果与分析

2.1 不同县区土鸡群A-B亚群禽白血病鸡场阳性率和个体阳性率

结果判定：检测样品中是否含有禽白血病病毒的抗体，主要由该样品的测定值A650与阳性对照值的比值决定(S/P)。如果S/P值小于或等于0.40，样品应判定为抗体阴性；如果S/P值大于0.40，应判定为抗体阳性。

选择特异性的通用引物338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)、806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)[8]扩增细菌16Sr RNA 序列V3+V4区，并利用Illumina Miseq高通量测序平台对PCR扩增产物进行分析，所用引物均由上海美吉生物有限公司合成。

 

表1 样品来源及禽白血病A-B亚群抗体检测情况

  

采样地点检测鸡场数/个阳性鸡场数/个鸡场阳性率/%总样品数/份总样品阳性数/份总样品阳性率/%淮滨县15853.3351185.1平桥区21523.818694.8浉河区12325.015531.9罗山县7228.615221.3潢川县2150.05012.0光山县7342.91441812.5新县4125.010610.9商城县4375.01102320.9息县5009700合计772633.81 351755.6

2.2 不同月份土鸡群A-B亚群禽白血病鸡场阳性率和个体阳性率

反观网络营销领域，过去学者对用户间沟通的分类普遍从沟通内容上进行划分，如划分为任务相关的和非任务相关的[2]、礼仪性质的和社交性质的[9]等；或是从空间维度上划分，如根据顾客间接触所发生的场所划分为“现场内(on-site)”和“现场外(off-site)”。[3]现场内指的是具体服务环境，现场外则是网络口碑或品牌社区等。然而，针对沟通方式在时间维度上的划分，进而探讨两者对消费者行为的影响却鲜有提及。因此本研究将从这个角度切入，探讨其在同步沟通和异步沟通两种模式中所存在的差异。

 

表2 不同月份土鸡群禽白血病A-B亚群抗体检测情况

  

1月2月3月4月5月6月7月8月9月10月11月12月合计检测鸡场数/个381527209-49--77阳性鸡场数/个2281165-10--26鸡场阳性率/%66.725.053.350.014.330.055.5-25.00--33.8检测样品数/份9285312617305184-92258--1 351阳性样品数/份531423839-10--75样品阳性率/%5.43.54.533.317.62.621.2-1.10--5.6

2.3 不同规模场点土鸡群A-B亚群禽白血病鸡场阳性率和个体阳性率

禽白血病是目前国内家禽需净化的4种重要疫病之一，采用ELISA方法检测禽白血病抗体，进而淘汰阳性病例，是目前国内鸡群净化禽白血病的重要手段。本次调查覆盖信阳市所有县区77个鸡场，能够较全面代表信阳地区禽白血病A-B亚群带毒情况，发现阳性鸡场26个，鸡场阳性率为33.8%。国内其他地区禽白血病A-B亚群检测调查情况显示，河南部分地区鸡场阳性率为100%[10]，广东省5个黄羽肉鸡场阳性率为100%[11]，贵阳地区阳性率为55.5%[12]，这些地区阳性率均高于信阳地区；湖北、黑龙江、山东、辽宁、吉林、广东、宁夏、安徽等8个省区的平均阳性率为12.8%[13] ，远低于本次调查结果。个体阳性率方面，贵阳地区为25.8%[12]，河南部分地区为17.4%[10]，均高于信阳地区，但广东省5个黄羽肉鸡场阳性率较低，为0.31%[13]。可见，不同地区禽白血病流行广泛，信阳地区比较严重。

 

表3 不同场点类型土鸡群禽白血病A-B亚群抗体检测情况

  

场点类型检测鸡场数/个阳性鸡场数/个鸡场阳性率/%总样品数/份总样品阳性数/份总样品阳性率/%规模场391538.5731405.5散养户381128.9620355.6合 计772633.81 351755.6

3 结论与讨论

3.1 信阳地区土鸡A-B亚群禽白血病整体感染状况

由表3可知，土鸡群禽白血病A-B亚群抗体调查分规模场和散养户，从鸡场阳性率看，规模鸡场阳性率为38.5%，高于散养户(28.9%)；从个体阳性率看，规模场的个体阳性率为5.5%，与散养户个体阳性率(5.6%)相近。对不同规模场点鸡场阳性率进行卡方检验，χ2=0.78<3.842，P>0.05，df=1，规模场和散养户差异不显著；对不同规模场点总样品阳性率进行卡方检验，χ2=0.02<3.842，P>0.05，df=1，差异不显著。

从表2可以看出，除8月、11月、12月未检测外，全年有8个月检出阳性样品，其中1月鸡场阳性率最高，为66.7%， 10月未检出阳性样品。对不同月份鸡场阳性率进行卡方检验，χ2=12.48<15.507，P>0.05，df=8，各个月份鸡场阳性率差异不显著。4月个体阳性率最高，为33.3%， 10月个体阳性率为0，对不同月份检测样品阳性率进行卡方检验，χ2=124.45>20.09，P<0.01，df=8，各个月份个体阳性率差异极显著。

3.2 信阳地区土鸡A-B亚群禽白血病感染率季节性变化情况

通过检测发现，信阳地区不同月份土鸡禽白血病A-B亚群感染鸡场阳性率及个体阳性率有差异，10月未检出阳性样品， 1月、3月、4月、7月鸡场阳性率较高，均在50%以上；从个体阳性率来看，4月最高，为33.3%，5月、7月较高，分别为17.6%、21.2%。

2.2.2推进农药减量增效 支持长江经济带11省(市)实施农药使用量负增长行动，建设一批病虫害统防统治与绿色防控融合示范基地、稻田综合种养示范基地，选择一批重点县开展果菜茶病虫全程绿色防控试点，大力推广一批行之有效简便易行的绿色防控技术，扩大绿色防控覆盖范围。推进统防统治减量，推行政府购买服务等方式，扶持一批农作物病虫防治专业服务组织。推进高效药械减量，示范推广高效药械、低毒低残留农药，引导农民安全科学用药。

3.3 信阳地区不同规模场点土鸡A-B亚群禽白血病感染情况

信阳地区不同规模场点均有A-B亚群阳性检出，规模场阳性率为38.5%、散养户为28.9%；从检测个体看，规模场的个体阳性率为5.5%，散养户个体阳性率为5.6%。

病原净化是禽白血病防控最根本的措施，开展检测净化工作势在必行。以ELISA方法为主的抗体和抗原检测是制定净化方案的基础。禽白血病以垂直传播为主，疫苗防治作用不大，且当前无有效疫苗，该病主要通过减少种群感染率、根据检测结果淘汰阳性鸡、建立无白血病的种群及综合性防控等措施进行防控。一是严格控制禽白血病的源头和流行。通过对种源的检疫和净化实现对该病的有效防控。二是加强鸡群日常管理，减少应激因素。控制合理的饲养密度，做好场舍和器具消毒，减少水平传播概率。三是提供营养合适的日粮配方，提高鸡群抵抗力。

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