宫颈上皮内瘤变(CIN)是宫颈癌的前期病变，包括CINⅠ级、CINⅡ级和CINⅢ级。宫颈癌是由子宫颈上皮内瘤变逐步发展形成的， 其发病过程经历了CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级、早期浸润癌、浸润癌几个阶段；有研究证实近年来我国宫颈癌的发生有明显上升和年轻化趋势， 发病以每年2%-3%的速度增长，因此，早期诊治宫颈上皮内瘤变是降低宫颈癌发生的关键[1-2]。一直以来，宫颈组织活检+免疫组织化学染色是确诊宫颈上皮内瘤变的“金标准”，但这是一项侵入性检查，患者不易耐受；而目前广泛应用的液基薄层细胞学检查技术(TCT)，方法简便无创，诊断特异性可达60%- 80%左右，但其敏感性偏低，尤其对于早期及低级别的肿瘤敏感性约为40%-60%；且受观察者主观影响较大。

近年来，随着对宫颈上皮内瘤变研究的深入，人们发现人乳头瘤病毒(HPV)持续感染是发生宫颈上皮内瘤变(CIN)的主要病因[2]，HPV感染具有极高的预测价值[3]。第二代杂交捕获检测技术(HC2)可通过检测宫颈采集样本中的脱落细胞有无上述变化，从而实现对宫颈上皮内瘤变的早期筛查[4]；目前，该技术已在欧美国家中广泛应用于宫颈癌早期筛查的临床检测中[5-7]。而分子原位杂交技术可同时进行高危及低危HPV检测，可与HC2技术进行互补。 该研究使用第二代杂交捕获技术(HC2)检测被WHO确认的13种高危HPV亚型：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68。同时对该活检标本进行原位分子杂交HPV检测，探讨两种方法在宫颈上皮内瘤变(CIN)诊断中的特异性及敏感性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集2015年4月-2017年4月九江学院附属医院1 500例妇产科就诊和健康体检患者，年龄21-80岁，所有患者在该次筛查前均未见宫颈上皮内瘤变病史。

1.2 检测方法

使用窥器暴露宫颈， 用专用的HPV 采样刷置于宫颈口，逆时针方向转3 圈，并停留10 s。把采样刷放入专用的标本储存瓶里， 折断采样刷多余的部份，将采样刷留在标本储存瓶里，以保留足够量标本。盖好盖子，作好标记进行HC2检测。对HPV DNA检测为高危型感染者行阴道镜检查，醋酸实验阳性或碘实验阴性患者进行多点活检，并进行原位杂交分子检测，病理结果由3位资深病理医生阅片后诊断。宫颈病理组织学诊断≥CINⅠ级判定为阳性。判断HC2检测技术和原位杂交技术对宫颈上皮内瘤变的敏感性和特异性，从而实现对宫颈上皮内瘤变的诊断、尤其是早期诊断。

1.3 统计学方法

计算HC2与原位杂交技术检测CIN的灵敏度与特异度。

2 结果

2.1 HPV检测结果

[1]郎景和.子宫颈上皮内瘤变的诊断与治疗[J].中华妇产科杂志，2001，36(5)：261.

 

表1 1500例筛查者中HC2和HPV检测结果

  

筛查结果HC2检出率(%)CIN检出率(%)HPV感染率(%)阴性84 55 913 6阳性15 566 354 5

2.2 HC2检测结果

1 500例被筛查对象中检测HC2阳性比例为15.5%(233/1 500)，HC2阴性比例为84.5%(1 267/1 500)。在233例HC2阳性患者中，101例患者进行了宫颈活检病理组织学诊断，检出CIN患者共67例，比率为66.3%(67/101)。HC2筛查阴性者当中，有117例进行了宫颈活检病理组织学诊断，检出CIN患者7例，比率为5.9%(7/117)，见表1。根据HC2检测结果，计算得出HC2检测CIN的灵敏度和特异度分别为89.3%和76.2%。

实验结果显示，1 500例被筛查者中HC2阳性检出率为15.5%(233/1 500)，101例HC2阳性患者当中CIN患者67例(阳性率为66.3%)，117例HC2阴性患者当中CIN患者7例(阳性率为5.9%)。HC2阳性者中伴HPV感染比例为54.5%(12/22)，HC2阴性者中伴HPV感染比例为13.6%(3/22)。HC2检测CIN的灵敏度与特异度分别为89.3%和76.2%， HPV检测CIN的灵敏度和特异度分别为54.5%和86.4%。

3 讨论

杂交捕获2代技术(HC2)原理是基于信号放大的酶标板技术和化学发光检测法的核酸杂交检测方法进行检测。含有目标DNA的标本与一种特殊的HPV RNA 探针鸡尾酒杂交，反应形成的RNA、DNA杂交体被捕获到包被有RNA、DNA杂交体对应特异抗体的酶标板小孔杯的表面上。被固定好的杂交体然后与结合了RNA、DNA杂交体对应特异抗体的碱性磷酸酯酶反应，然后再用化学发光底物进行检测。几个碱性磷酸酯酶分子与每一个抗体结合，多个结合抗体结合到每个被捕获的杂交体上，这些杂合体导致了真正的信号放大作用。由于底物附着有结合碱性磷酸酯酶，光发射出来可以用照度计测量其相对光单位，发出光的强度指出了标本中存在或不存在目标DNA。HC2技术主要用于同时检测被WHO确认的13种高危HPV亚型：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68的研究，这些高危亚型可以反映肿瘤在基因组水平的改变，研究这些高危HPV亚型的DNA组成将有助于肿瘤发病机制的阐明[8-10]。

依据HPV与肿瘤的关系，不同类别的HPV感染可导致不同的临床病变，因此HC2技术成为精确诊断和分型的指标。另一方面，同时对该患者活检标本进行原位杂交分子检测，可弥补HC2检测技术的不足。基于此，该研究采用HC2和原位杂交分子检测技术相结合，探讨其在CIN诊断中的灵敏度和特异度。

1.2.2 对3T3-L1前脂肪细胞活力的影响 将3T3-L1前脂肪细胞置于完全培养基中培养(90%的DMEM高糖培养基，10%胎牛血清)，放置于培养箱中培养至对数生长期，消化，计数，接种于96孔板(接种密度为5×103/孔)或24孔板中(接种密度为1×104/孔)。

[2]陈娇梅，魏传珍.1524例妇女HPV感染与宫颈病变相关性分析[J].赣南医学院学报，2015，35(3)：439.

之前我听过这样的说法，只要进入北大，就能感受到“北大的空气也是养人的”，我这次试着去感受，果然能感觉到空气中有一种说不出的好味道，身心惬意无比。

[5]尹维花.HC2联合TCT在宫颈病变筛查中的应用分析[J].基层医学论坛， 2012，16(22)：2885.

HC2阳性患者中HPV的感染率为54.5%(12/22)，HC2阴性者中HPV的感染率为13.6%(3/22)，详见表1。HPV检测CIN的灵敏度和特异度分别为54.5%和86.4%。

绞好的肉、食盐和亚硝酸钠(用水溶解)放入搅拌机中搅拌为10min，肉出料温度控制在3～6℃。用塑料薄膜覆盖肉的表面进行腌制，腌制温度为2～6℃，腌制时间控制为20h。

1165 小成像视野薄层靶扫描胰腺动脉计算机断层扫描增强检查在胰腺癌诊断中的应用 朱 寻，尹 伟，陆建平

[3]赖有娣，钟波涛，周根秀.阴道镜联合三阶梯技术在宫颈癌及癌前病变筛查中的应用价值[J].赣南医学院学报，2015，35(3)：442.

[4]文英.人乳头瘤病毒检测联合液基细胞对宫颈上皮内瘤变的诊断价值[J].中国当代医 药，2011，18(17)：28.

参考文献：

[6]Schiffman M，Herrero R，Hildesheim A，et al. HPV DNA testing in cervical cancer screening：results from women in a high-risk province of Costa Rica[J].JAMA，2000，283(1)：87.

与传统检测手段相比较，HC2联合原位杂交检测技术能够显著提高CIN检测的敏感性和特异性，在CIN的早期诊断中具有较好的临床应用价值。

[7]Zur Hausen H. Papillomaviruses and cancer：from basic studies to clinical application[J].Nat Rev Cancer，2002，2(5)：342.

[8]张玉梅，曹维克.高危HPV病毒第2代杂交捕获法检测应用于宫颈癌以及癌前病变检查[J].武汉大学学报(医学版)，2011，32(4)：489.

[9]杨毅，王友芳，郎景和，等.高危型人乳头瘤病毒杂交捕获法Ⅱ评估宫颈上皮内瘤变的临床价值[J].中国医学科学院学报，2006，28(3)：395.

Lut对照品，批号111520-201605，质量分数99.6%，中国食品药品检定研究院；香叶木素对照品，批号P0587，质量分数99.4%，上海源叶生物科技有限公司；聚乙烯吡咯烷酮（PVK 30），批号25000240379，Ashland公司；卵磷脂，批号PC-98T，辅必成上海医药科技有限公司；其他试剂均为分 析纯。

[10]肖克林，吴丽娟，郑有为，等.第二代杂交捕获法诊断宫颈高度病变的临床评价[J].检 验医学，2009，24(6)：409.

北宋初创，便将宵禁制度的“一更”宵禁变为“三更”宵禁，一方面说明赵氏官家们统治变得人性化，另一方面也可见宋朝皇帝们的自信，认为在自己的统治下，扩大夜间的开放程度，并不会引起太大的治安问题。为了方便市民夜间贸易，汴京城门很晚才关，而城内却无时间限制。