宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤，其发病率有逐年上升和年轻化的趋势，已成为严重威胁女性生命健康的恶性肿瘤之一[1]。人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染是宫颈癌及宫颈上皮内 瘤 变 (cervical intraepithelial neoplasia，CIN)发生的高危因素，而CIN是宫颈癌的癌前病变，早期诊断和治疗CIN对于预防宫颈癌有着重要的意义。近年研究表明，微小核糖核酸(microRNA，miRNA)在肿瘤的增殖、凋亡、侵袭和转移等多种生物学过程中起着重要的作用，其中miRNA-155与多种恶性肿瘤的发生有关，可能在肿瘤发生过程中发挥癌基因的作用[2-3]。另有研究表明，持续高风险HPV感染会引起细胞癌基因或有抑癌作用的miRNA表达失调[4]，进而导致细胞增殖及恶性转化。本研究通过检测血浆miRNA-155在HPV阳性宫颈癌患者中的表达情况，分析其早期诊断宫颈癌的价值，旨在为宫颈癌的早期诊断及靶向治疗提供依据。

资料和方法

1 一般资料 选取2014年3月- 2017年3月本院妇产科收治的HPV阳性宫颈癌患者126例(宫颈癌组)，年龄29 ～ 74(46.82±10.63)岁。纳入标准：1)符合国际妇产科联合会(FIGO)分类标准和WHO分级标准，且经病理确诊为宫颈癌；2)高危型 HPV(HR-HPV)阳性，如 HPVl6、18、31、33、35、39、45；3)术前未接受放射治疗、化疗及生物免疫治疗；4)能配合本次研究且病历资料完整。宫颈癌临床分期：I期47例，Ⅱ期59例，Ⅲ期14例，Ⅳ期6例；病理类型：鳞状细胞癌118例，腺癌8例；病理分级：G1 19例，G2 45例，G3 62例；有淋巴结转移22例，无淋巴结转移104例。另取同期与宫颈癌患者年龄匹配的HPV阳性宫颈上皮内瘤病变患者65例(CIN Ⅱ 21例、CIN Ⅲ 44例)作为CIN组，HPV单纯阳性或HPV阳性子宫良性病变者65例作为对照组。本研究经医院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

一是爱在“困难”处。通过入户走访了解群众困难诉求，分析研究对策解决。帮助170人实现就业，解决117人看病难、75名学生上学难、11户贫困户住房难问题；二是爱在“细微”处。通过换灯泡、修马桶、探望住院群众等一个个微行动，增进了和职工群众的感情赢得群众信任。截至目前，为群众扶贫帮困298户次，为民办实事近300件；三是爱在“急需”时。共开展互助帮扶活动110余次，逢年过节走访慰问，给特殊困难家庭发放慰问款物6.24万元。

2 miRNA-155检测 所有研究对象均于清晨空腹抽静脉血5 ml，离心分离血浆后保存于-80℃冰箱待检。RNA提取试剂盒购自德国Qiagen公司，在ABI 7500型荧光定量PCR仪上进行实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)。取300μl血浆样本，加入1 ml总miRNA提取液，按照血液总miRNA快速提取试剂盒(miRNeasy血浆提取试剂盒)说明书从血浆中提取总RNA。以U6为实验内参，miRNA逆转录反应体系：5μl RNA模板，3μl U6及miRNA特异性茎环引物，0.15μl 100 mmol/L dNTPs(with dTTP)，1.00μl逆转录酶 (50 U/μl)，1.50μl 10×反转录缓冲液，0.19 μl RNase抑制剂 (20 U/μl)，4.16 μl无菌三蒸水。反应条件：16℃ 30 min，42℃30 min，85℃ 5 min， 4℃保存，进行逆转录反应。以U6为实验内参，反应体系：1.00 μl TaqMan Small RNA Assay(20×)溶液，10μl TaqMan⑧Universal PCR Master MixⅡ(2×)溶液，1.33 μl反转录产物cDNA，7．67μl DEPC水。扩增条件：95℃10 min 1个循环，95℃15 s、60℃ 60 s进行40个循环，实验重复3次。每个反应体系中荧光信号达到所设定的阈值的经历的循环数即为Ct值，以U6为内参照，采用2-△△Ct法计算miRNA-155的相对表达水平，其中△ Ct=Ct目的基因-CtU6。

3 SCCA及CA125检测 分别采用贝克曼和罗氏电化学发光免疫分析仪及配套试剂盒，化学发光法测定SCCA和CA125水平，操作过程严格按照说明书进行。

4 分析指标 分析miRNA-155表达与宫颈癌临床病理特征的关系，ROC曲线评价miRNA-155对HPV阳性CIN及宫颈癌的诊断价值。

宫颈癌的发生是多基因、多因素和多阶段共同作用的过程，其病理机制目前尚不完全明确。微小核糖核酸(miRNA)是一类内源性非编码的小RNA，在肿瘤生理病理过程中发挥着重要的调控作用，有望成为一种新的疾病诊断、分类和预后判断的工具[5]。HPV检测是临床上筛查宫颈癌的常用方法，而HR-HPV与宫颈癌的发生发展密切相关[6]。HR-HPV主要通过早期表达的调节蛋白作用于宿主细胞的miRNA，引起宿主细胞生物学行为改变，进而导致宿主细胞发生癌变。近期的研究发现，血浆miRNA-155在多种恶性肿瘤中异常表达，是诊断恶性肿瘤患者的特异性标记物[7-8]。然而，血浆miRNA-155能否作为宫颈癌早期诊断的分子标记物，目前尚未明确。

1 各组血浆miRNA-155、SCCA及CA125表达水平比较 宫颈癌组血浆miRNA-155、SCCA及CA125表达水平均明显高于CIN组和对照组，差异有统计学意义(P均＜0.01)；CIN组血浆miRNA-155表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

结 果

学校及教室里的图画书阅读，无论是以校本课程形式还是以教学研究课形式呈现，从性质上看，主要还是课外阅读向课内阅读教学的转化和延伸，不应或不必等同于基准的语文教学或讲授课程，也不适合进行与语文课文（含儿童文学作品改编课文）相类的教学效果评估与评测。这样性质的定位，会保留并突出这类图画书阅读课程的特色，为教师和学生在相关课程中的教学行为预留出开阔的、自由的空间，将师生多种形式的共读、各种组合的互动讨论、学生个体反应的展示与分享等环节更多包含其中。

5 HPV阳性宫颈癌患者血浆miRNA-155与SCCA、CA125的相关性分析 Pearson相关分析显示，血浆miRNA-155与SCCA呈正相关(r=0.702，P＜0.01)；血浆miRNA-155与CA125无明显相关性(r=0.115，P＞0.05)。见图3。

 

表1 各组血浆miRNA-155、SCCA及CA125表达水平比较Tab. 1 Comparison of levels of plasma miRNA-155, SCCA and CA125 in each group (-x±s)

  

aP＜0.01, vs control group; bP＜0.01, vs CIN group

 

Control group (n=65) CIN group (n=65) Cervical cancer group (n=126) F P miRNA-155 (2-△△Ct) 6.27±1.48 9.53±2.26a 15.28±6.37ab 18.264 ＜ 0.001 SCCA (ng/ml) 1.38±0.36 3.25±0.92 10.25±2.47ab 15.183 ＜0.001 CA125 (U/ml) 16.73±6.12 20.28±7.46 48.72±11.93ab 9.263 ＜0.001

 

表2 HPV阳性宫颈癌患者血浆miRNA-155表达与临床病理特征的关系Tab. 2 Relationship between plasma miRNA-155 expression and clinicopathological characteristics in patients with HPV positive cervical cancer

  

Characteristics n miRNA-155(2-△△Ct) t/F P Age (yrs) 0.493 0.472＜45 59 15.05±6.35≥45 67 16.13±6.42 Clinical stages 20.246＜0.001Ⅰ-Ⅱ stage 106 13.63±5.28Ⅲ-Ⅳ stage 20 21.46±8.75 Pathological type 0.725 0.419 Squamous cell carcinoma 118 15.74±6.51 Adenocarcinoma 8 15.06±6.38 Pathological grading 0.506 0.468 G1 19 15.08±6.14 G2 45 15.35±6.29 G3 62 15.43±6.62 Tumor size 0.937 0.264≤4 cm 70 15.18±7.03＞4 cm 56 15.72±6.47 Lymph node metastasis 23.816＜0.001 Yes 22 25.83±9.14 No 104 13.57±5.36 Menopause 0.427 0.526 Yes 40 15.42±6.71 No 86 15.15±6.24 Depth of infiltration 5.813 0.004≤1/2 Muscle layer 47 14.26±5.83＞1/2 Muscle layer 79 18.35±7.47

上周（11月12日-11月16日）国内环保压力加大，尿素开工率有所下跌，市场价格保持高位。11月19日中国尿素批发价格指数（CNPI）为 2119.37点，环比上涨13.31点，涨幅为0.63%；同比上涨303.96点，涨幅为16.74%；比基期上涨256.12点，涨幅为13.75%。11月19日中国尿素零售价格指数（CNRI）为2221.62点，环比上涨5.04点，涨幅为0.23%；同比上涨304.30点，涨幅为15.87%；比基期上涨316.66点，涨幅为16.62%。

4 血 浆miRNA-155、SCCA及CA125对 HPV阳性宫颈癌的诊断价值 血浆miRNA-155诊断HPV阳性宫颈癌的AUC(95%CI)为[0.885(0.803 ～0.967)]， 显 著 高 于 SCCA[0.783(0.715 ～ 0.865)]及CA125[0.681(0.604 ～ 0.757)](Z=7.115、5.108，P均＜0.05)；SCCA与CA125差异无统计学意义(Z=1.630，P＞0.05)。血浆miRNA-155诊断HPV阳性宫颈癌的最佳截值为12.65，敏感度和特异度为87.2%和84.6%。见图2和表4。

2 HPV阳性宫颈癌组血浆miRNA-155表达与临床病理特征的关系 随着宫颈癌临床分期的进展，miRNA-155表达水平逐渐升高，Ⅲ～Ⅳ期HPV阳性宫颈癌患者miRNA-155表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差异有统计学意义(P＜0.01)。血浆miRNA-155表达水平与淋巴结转移、浸润深度也相关(P＜0.05)，而与年龄、病理类型、病理分级、肿瘤大小及绝经状态无关(P均＞0.05)。见表2。

 

表3 血浆miRNA-155、SCCA及CA125对HPV阳性CIN的诊断价值Tab. 3 Value of plasma miRNA-155, SCCA and CA125 in diagnosis of HPV positive CIN

  

cut-off S-x AUC (95% CI) Sensitivity (%) Specificity (%) Positive predictive value (%) Negative predictive value (%)miRNA-155 7.82 0.047 0.832(0.751-0.908) 81.3 80.4 84.5 78.3 SCCA 2.46 ng/ml 0.058 0.705(0.627-0.784) 72.4 70.5 73.6 69.2 CA125 16.84 U/ml 0.068 0.628(0.552-0.703) 64.8 66.2 69.5 61.7 Optimum

 

表4 血浆miRNA-155、SCCA及CA125对HPV阳性宫颈癌的诊断价值Tab. 4 Value of plasma miRNA-155, SCCA and CA125 in diagnosis of HPV positive cervical cancer

  

cut-off S-x AUC (95% CI) Sensitivity (%)Specificity (%) Positive predictive value (%) Negative predictive value (%)miRNA-155 12.65 0.034 0.885(0.803-0.967) 87.2 84.6 87.5 84.6 SCCA 8.27 ng/ml 0.048 0.783(0.715-0.865) 80.5 77.0 80.2 77.8 CA125 38.25 U/ml 0.061 0.681(0.604-0.757) 74.2 65.8 62.7 71.8 Optimum

  

图1 血浆miRNA-155、SCCA及CA125诊断HPV阳性CIN的ROC曲线Fig. 1 ROC curve of plasma miRNA-155, SCCA and CA125 in diagnosis of HPV positive CIN

  

图2 血浆miRNA-155、SCCA及CA125诊断HPV阳性宫颈癌的ROC曲线Fig. 2 ROC curve of plasma miRNA-155, SCCA and CA125 in diagnosis of HPV positive cervical cancer

讨 论

5 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件分析，计量资料以-x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用SNK-q检验；两组间比较采用两独立样本t检验。绘制受试者工作特征曲线(ROC)评价血浆miRNA-155等指标对HPV阳性宫颈癌的诊断价值，曲线下面积(area under curve，AUC)的比较采用Z检验。相关性分析采用Pearson相关检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

3 血浆miRNA-155、SCCA及CA125对HPV阳性CIN的诊断价值 血浆miRNA-155诊断HPV阳性 CIN 的 AUC(95%CI)为 [0.832(0.751 ～ 0.908)]，显著高于 SCCA[0.705(0.627 ～ 0.784)]及 CA125[0.628(0.552 ～ 0.703)](Z=6.713、4.705，P均＜ 0.05)；SCCA与CA125差异无统计学意义(Z=1.043，P＞0.05)。血浆miRNA-155诊断HPV阳性CIN的最佳截值为7.82，敏感度和特异度为81.3%和80.4%。见图1和表3。

本研究结果显示，宫颈癌组血浆miRNA-155、SCCA及CA125表达水平均明显高于CIN组和对照组，CIN组血浆miRNA-155表达水平明显高于对照组。在HPV阳性宫颈癌患者临床病理分期中，Ⅲ～Ⅳ期患者血浆miRNA-155的表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者。说明血浆miRNA-155在HPV阳性宫颈癌患者中异常高表达，对细胞的癌基因和抑癌基因具有调控作用，可作为癌基因或抑癌基因参与肿瘤的发生发展。既往研究表明，miRNA-155对肿瘤细胞的增殖、分化、迁移、凋亡及机体肿瘤免疫应答等方面发挥着重要的作用，并与恶性肿瘤的预后判断、临床病理分期及转移情况有关[9]。Gocze等[10]研究认为，宫颈癌患者miRNA-155表达水平异常升高，miRNA-155通过调节基因表达水平促进宫颈癌细胞的增殖。另有研究表明，miRNA-155表达水平上调与宫颈癌组织中临床病理分期、淋巴结转移、血管侵犯、HPV感染和生存情况相关，它可以作为宫颈癌潜在的预后标记物和治疗靶点[11]。此外，进一步分析miRNA-155表达与宫颈癌临床病理特征的关系，发现有淋巴结转移及浸润深度＞1/2肌层的宫颈癌患者miRNA-155表达水平明显升高，提示miRNA-155与HPV阳性宫颈癌患者的病情进展有关，分析其原因可能是存在淋巴结转移的患者肿瘤负荷往往较大，肿瘤组织可释放更多的具有原癌基因作用的miRNA进入血液，同时可抑制机体原有的具有抑癌作用的miRNA水平表达，进而导致机体miRNA表达水平异常升高；浸润越深的患者病情进展越快，肿瘤组织miRNA表达水平升高越明显。Lao等[12]研究也证实，miRNA-155是宫颈癌病理过程的重要调节因子，miRNA-155上调可促进宫颈癌细胞的增殖，miR-155下调可抑制宫颈癌细胞的生长。

  

图3 miRNA-155与SCCA、CA125的相关性Fig. 3 Correlation of miRNA-155 and SCCA,CA125

应用ROC曲线分析，结果显示血浆miRNA-155对HPV阳性宫颈癌和CIN的诊断效能明显优于传统肿瘤标记物SCCA和CA125，其敏感度和特异度分别为87.2%和84.6%，81.3%和80.4%。相关性分析显示，血浆miRNA-155与SCCA呈正相关。说明血浆miRNA-155在HPV阳性宫颈癌的早期诊断和CIN鉴别诊断方面具有一定的临床价值。有研究表明，miRNA作为一种新的生物标记物，可用于监测宫颈癌的进展和诊断HPV感染导致的宫颈癌[13]。Liu等[14]研究也表明，miRNA异常高表达与CIN分级和宫颈癌相关，是宫颈癌早期诊断和预后判断的可靠生物学标记物。本研究中，血浆miRNA-155和SCCA水平升高是HPV阳性宫颈癌发生的独立危险因素，而与年龄、病理类型、病理分级、肿瘤大小及绝经状态无关。提示miRNA-155可独立作为宫颈癌早期诊断的分子标记物。Chen等[15]研究认为，miRNA的异常表达与宫颈癌的淋巴结转移情况、化疗耐药性以及整体生存情况明显相关，它可以作为宫颈癌预后的重要评判指标。Wang等[16]研究也发现，miR-155在宫颈癌的发生、发展中发挥了一定的促进作用，有望成为宫颈癌早期诊断的潜在标记物。另有研究表明，血浆miR-155高表达对恶性肿瘤的总生存率有显著影响，它可作为恶性肿瘤诊断和预后评估的一种新型肿瘤标记物[17]。由此可见，血浆miR-155测定提供了一种无创的宫颈癌检测/辅助诊断方法，在未来有较好的应用前景。

解码模块 播放器的解码模块包含音频解码和视频解码两部分，这两部分是分开进行的，单线程情况下二者交替进行，多线程则能够对音频、视频进行并行解码。解码模块运行的第一步是读取输入模块拉流后缓存到缓冲队列的视频和音频数据；第二步是将这些数据传入对应的音频/视频解码器进行解码，等待显示模块将它们显示出来。

综上所述，血浆miRNA-155在HPV阳性宫颈癌患者中异常高表达，与SCCA和CA125传统肿瘤标记物相比，其诊断HPV阳性宫颈癌的敏感度和特异度均较高，有望作为HPV阳性宫颈癌早期诊断和CIN鉴别诊断的生物学标记物。但本研究为单中心的临床研究，其结果可能存在一定的偏差，尚需多中心、大样本的前瞻性研究来进一步验证。

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