脑梗死(cerebral infarction，CI)作为威胁人类健康的常见病，不仅严重影响患者的预期寿命和生活质量，还会带来沉重的经济负担。探讨脑梗死疾病环境和遗传等相关影响因素，早期筛选易感人群，是一个研究热点。研究表明，载脂蛋白B(apolipoprotein B，ApoB)作为主要的载脂蛋白之一，对维持体内脂质水平的恒定起重要作用[1]，其基因多态性的表达及特殊的分子功能与血脂水平及心脑血管疾病有着密切的关系[2-5]。本文探讨唐山地区汉族人群ApoB基因7673C/T、11039G/A多态性与脑梗死的关系，从遗传学角度分析可能引起脑梗死的危险因素，为脑梗死易感人群的筛选和早期预防提供参考。

当没有专门的部门进行管理时，虽然地方政府承担起文化古城可持续发展的保护角色，但其内部的职能分配的专业化、细分性不足，使其本身在某种程度上既是作为领导者、组织者和建设者，同时也成为了检验成果时的监督者和评价者。更何况，在具体实施中出现问题时，负责工程的相关部门往往会互相推卸责任。因此，专门管理机构的缺失使职能界限模糊，很难实现其可持续发展战略。

对象和方法

1 研究对象 选取2016年6 - 12月本院住院的初发脑梗死患者90例，男52例，女38例，平均年龄(58.86±6.15)岁，均为长期生活在唐山地区的汉族人，个体之间无血缘关系，均经CT和(或)MRI确诊(符合全国第四次脑血管疾病学术会议修订的诊断标准)。选取同一时期健康体检者82例为对照组，男47例，女35例，平均年龄(57.71±5.96)岁，除外心脑血管疾病、糖尿病、血液病、传染性疾病、自身免疫系统等疾病。两组性别、年龄差异无统计学意义(P＞0.05)。

2 基因组DNA的提取 抽取研究对象清晨空腹静脉血，EDTA抗凝管收集，参照美国Axygen公司血液基因组DNA试剂盒的操作步骤提取样本DNA。

3 PCR-RFLP检测基因多态性 参照GeneBank(http：//www.ncbi.nlm.nih. gov/Genbank)提供的人类基因组中DNA的ApoB基因序列和相关文献设计引物，ApoB C7673T引物：上游GGAGACTATTCA GAAGCTAA，下游GAAGAGCCTGAAGACTGACT；ApoB G11039A引物：上游TCTCGGGAATATTCAG GAACTATTG，下游CTAAGGATCCTACAATGTCAA GGT。PCR扩增体系：Template 10 μl，上下游引物各 1.0μl，2×Master Mix 12.5 μl，ddH2O 0.5 μl，总体积25 μl。PCR循环条件：94℃预变性3 min，94℃变性 30 s，55℃退火 30 s，72℃延伸 1 min，30个循环后72℃再延伸5 min，4℃恒温保存。以1.5%琼脂糖凝胶电泳检查PCR扩增产物。PCR扩增产物经XbaⅠ酶切，电泳谱上出现710 bp片段为野生纯合子CC型，出现433 bp和277 bp两条片段为突变纯合子TT型，同时出现以上3条片段为突变杂合子CT型(图1)。PCR扩增产物经MspⅠ酶切，电泳谱上出现395 bp和85 bp两条片段为野生纯合子GG型，仅出现480 bp片段为突变纯合子AA型，同时出现以上3条片段则为突变杂合子GA型(图2)。

  

图1 7673C/T酶切产物电泳图1、 4、 5、 7、 8为CC型； 2、 3、 6为CT型Fig. 1 7673C/T digestion products electro phoresis 1, 4, 5, 7, 8 for CC type; 2, 3, 6 for CT type

  

图2 11039G/A酶切产物电泳图2、 3、 4、 7为GG型； 5、 6、 8为GA型；1为AA型Fig. 2 11039G/A digestion products electrophoresis 2, 3, 4, 7 for GG type; 5, 6, 8 for GA type; 1 for AA type

由于案例教学法能够有效提升”会计学基础”的教学效果，那么如何更好地将其应用于课堂教学过程中则成为了丞待解决的重要问题。因此，本文提出了几个应用要点。

6 统计与分析 采用SPSS13.0软件包，基因计数法计算基因型和等位基因频率，组间比较采用χ2检验；符合正态分布的计量资料以-x±s表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

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5 分析指标 比较两组血脂水平、基因型和等位基因分布，分析脑梗死危险因素。

基于PoS的共识机制还包括PPCoin[21]、Casper[22]、Snow-White[23]等。

结 果

3 脑梗死危险因素分析 以脑梗死为因变量，高血压、吸烟、饮酒、血脂各项指标、7673C/T基因型、11039G/A基因型为自变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示高血压、吸烟、TG、7673C/T CT基因型进入模型，是脑梗死的危险因素；11039G/A GA+AA基因型则未进入模型，不是脑梗死的危险因素。见表3。

2 两组7673C/T和11039G/A基因型和等位基因分布 脑梗死组出现7673C/T突变基因型和等位基因的频率高于对照组(P＜0.05)，提示随着T等位基因的增加，脑梗死的风险可能增加；两组11039G/A GG、GA+AA基因型频率差异无统计学意义(P＞0.05)，脑梗死组出现突变A等位基因的频率高于对照组(P＜0.05)。见表2。

 

表1 两组血脂水平比较Tab. 1 Comparison of blood lipid indicators between two groups

  

Indicator CI group (n=90) Control group (n=82) P TC (mol/L) 5.20±0.88 4.96±0.61 0.043 TG (mol/L) 1.72±0.57 1.44±0.46 0.000 HDL (mol/L) 1.19±0.32 1.36±0.27 0.000 LDL (mol/L) 3.17±0.72 2.92±0.55 0.000 ApoA (g/L) 1.04±0.29 1.18±0.24 0.001 ApoB (g/L) 0.99±0.29 0.89±0.26 0.016

 

表2 两组7673C/T和11039G/A基因型和等位基因分布Tab. 2 Genotype and allele distribution of 7673C/T and 11039G/A between two groups (n, %)

  

Item CI (n=90) Control (n=82) χ2 P Genotype frequency CC 74(82.2) 77(93.9) 5.461 0.019 CT 16(17.8) 5(6.1)TT 0(0) 0(0)GG 80(88.9) 79(96.3) 3.411 0.065 GA+AA 10(11.1) 3(3.7)Allele frequency C 164(91.1) 159(97.0) 5.106 0.024 T 16(8.9) 5(3.0)G 169(93.9) 161(98.2) 4.03 0.045 A 11(6.1) 3(1.8)

1 两组血脂水平比较 脑梗死组TC、TG、LDL、ApoA、ApoB水平均明显高于对照组(P＜0.05)，HDL水平明显低于对照组(P＜0.05)。见表1。

4 血脂指标的检测 抽取研究对象清晨空腹静脉血，促凝管收集，常温离心，分离血清，应用bayer1650全自动生化测定仪检测总胆固醇(total cholesterol，TC)、 三 酰 甘 油 (triacylglycerol，TG)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)、ApoA、ApoB水平。

 

表3 脑梗死危险因素的Logistic回归分析Tab. 3 Logistic regression analysis of risk factors of cerebral infarction

  

Risk factors OR 95% CI P Smoke 2.631 1.087-6.370 0.032 Hypertension 4.767 2.051-11.081 0.000 TG 3.058 1.179-7.933 0.022 CT genotype 6.190 1.388-27.606 0.017

讨 论

随着人类基因组计划的初步完成，脑血管疾病相关基因的定位和识别已经成为功能基因组学的研究热点之一。目前，在脑血管疾病基因的研究中，载脂蛋白是较受关注的一组，其基因多态性可影响血脂代谢[6]，而血脂异常与心脑血管疾病[7-9]、动脉粥样硬化和心脑血管疾病均密切相关[10]。

ApoB作为主要的载脂蛋白之一，位于2号染色体的短臂(2P23)，长约43 kb，由29个外显子和28个内含子构成。XbaⅠ酶切位点是由于ApoB基因cDNA序列上第7673位碱基发生C→T的突变，使2 488位密码子改变(ACC→ACT)所致。多数研究认为ApoB基因7673C/T多态性与血脂异常[11]、动脉粥样硬化、心脑血管疾病有着密切的联系[12-14]。Boekholdt等[15]通过Meta分析发现含有T等位基因人群血清的TC、LDL水平较高。我们分析，7673C/T多态性可能因为C→T突变，影响了血清TG水平，从而增加了脑梗死的易感性，成为脑梗死发生、发展的危险因素。

MspⅠ酶切位点是由于ApoB基因cDNA序列上第11 039位碱基发生G→A的突变，使3 611位密码子改变(CGG→CAG)，精氨酸被谷氨酰胺取代。ApoB基因11039G/A多态性分布具有种族差异[16]。Stepanov等[17]和Rantala等[18]的研究发现，A位基因频率分别为0.111、0.057；我们的研究发现，唐山地区汉族人群A等位基因频率为0.018，显著低于白种人，存在种族差异。众多学者对ApoB基因RFLP与脑梗死的关系进行了研究，多数认为脑梗死组ApoB基因不含有MspⅠ酶切位点的频率高于对照组，但11039G/A多态性是否是脑梗死的危险因素尚无明确结论。我们的研究发现ApoB基因11039G/A多态性不是脑梗死的危险因素，但该基因是否与其他基因多态位点存在连锁关系或通过其他途径参与脑梗死的发生、发展，有待进一步研究。

综上所述，ApoB基因多态性可能通过影响血脂代谢，成为参与心脑血管疾病发生、发展的重要因素。但目前对载脂蛋白B基因多态性的调节机制和研究结论尚未统一，可能与研究样本量、分组标准、种族差异、基因间的连锁关系等因素有关，需要进一步研究，以更好地了解脑梗死发生、发展机制，对临床疾病的早期检测及预防提供重要指导意义。

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