胃癌是目前世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一，其死亡率居癌症相关死亡的第二位[1]。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，HP)是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、淋巴瘤和胃癌的主要致病因素，被世界卫生组织列为胃癌的I类致癌因子，已被证实与胃癌的发生、发展密切相关[2]。大多数研究表明，在“慢性胃炎-胃黏膜萎缩-肠化生-异型增生-胃癌”这一癌变模式中，HP可能具有先导作用[3-4]。因此，明确HP感染与胃癌发生、发展及临床病理学特征的关系，对胃癌的预防、治疗及预后判断具有重要的临床价值。本研究分析了HP感染与胃癌组织中Ki67及表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)表达的关系，探讨了HP感染对胃癌组织细胞增殖和血管生成的影响，为研究HP感染的在胃癌发生、发展中的作用研究提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 筛选2015年1月至2015年12月滨州医学院附属医院手术切除的胃癌组织标本76例，所有均接受快速尿素酶法HP检测及胃癌根治性手术治疗，术后均经病理明确诊断，术前均未接受放化疗及其他治疗。根据是否合并HP感染将其进行分组，HP阳性组41例，平均年龄为(58±8.7)岁。HP阴性组35例，平均年龄为(60±9.6)岁。收集可能影响肿瘤组织中Ki67表达及EGFR表达的临床参数，包括年龄，性别，分化程度，分期等进行统计学分析。纳入标准：原发性胃癌；经病理学检测确诊；既往未接受过正规的抗HP感染治疗。排除标准：继发性胃癌；伴有其他恶性肿瘤疾病；既往接受过规律的抗HP感染治疗；术前接受过放化疗及其他针对胃恶性肿瘤的治疗。

1.2 HP感染检测及免疫组化检测EGFR及Ki67表达 兔抗人ki-67，EGFR抗体购自Santa Cruz公司，生物素标记的羊抗兔抗体及免疫组化试剂盒购自深圳英翰斯生物科技有限公司，快速尿素酶检测卡购自深圳市赛尔生物技术有限公司。试验方法：采用快速尿素酶法检测HP感染情况。EGFR及Ki67蛋白检测采用免疫组化SP法，具体步骤按照试剂盒说明操作。

HP感染判断：培养孔内出现玫瑰红色即为阳性，仍为黄色者为阴性。免疫组化结果判断：检测蛋白阳性表达判定标准为细胞核或细胞质内出现棕黄色或棕褐色颗粒。根据颜色强度评分：-为无色，+为浅黄色，2+为深黄色，3+为棕黄色或深褐色；根据视野中阳性表达细胞数占所有细胞数的百分数评分：-为阳性表达细胞百分数≤10%，+为10%～50%，2+为50%～75%，3+为75%～90%，4 +为>90%。结果判断由2名经验丰富的病理科医师独立完成，二人评分平均值为最终得分。

1.3 统计学分析 采用SPSS 20.0对结果进行统计分析。组间比较采用χ2检验、Fisher确切概率法，采用spearman相关分析HP感染与检测指标表达的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HP检测阳性及阴性组患者一般情况比较 76例患者中HP阳性组41例，HP感染阳性率为53.94%，其中男25例，女16例，平均年龄(58±8.7)岁，早期胃癌5例，进展期胃癌36例，高-中分化19例, 低分化22例。HP阴性组35例，其中男23例，女12例，平均年龄(60±9.6)岁，早期胃癌4例，进展期胃癌31例，高-中分化16例，低分化19例。两组患者在性别、年龄、肿瘤学分期及分化程度方面的差异无统计学意义，见表1。

表1 胃癌患者的Hp感染情况与患者的临床资料分析表

组别例数性别男女年龄肿瘤分期早期进展期分化程度高⁃中分化低分化Hp感染阳性41251658±8．75361922Hp感染阴性35231260±9．64311619P值0．6690．630．9180．956

2.2 两组患者胃癌组织中EGFR表达差异分析 EGFR在胃癌组织中的表达情况分级见图1。76例患者中阴性表达28例，表达强度为“+”，“2+”，“3+”的分别为15例，21例和12例。两组患者胃癌组织中EGFR表达情况分析表明，HP阳性组患者胃癌组织中EGFR表达阳性率显著高于HP阴性组，二者差异具有统计学意义(P<0.05)，相关性分析表明(表2)，EGFR表达与HP感染呈现明显的负相关(r=-0.401，P=0.001)

由于建筑工程施工复杂，存在着多方面的安全隐患。但是，由于安全措施的实施复杂复杂，影响工程进度，目前仍有不少土建安全管理人员对施工人员的安全问题不太重视。因此，他们不想在执行安全措施上花费过多的精力，以及缺乏对施工人员的安全教育，导致团队内部人员忽视人员安全问题，最终发生安全事故。

A 阴性表达； B 表达强度为“+”；C 表达强度为“2+”； D 表达强度为“3+”

图1 EGFR在胃癌组织中的表达强度

表2 HP的感染情况与胃癌组织中EGFR表达的相关性分析

项目EGFR表达-+2+3+r值P值HP感染阳性79178HP感染阴性21644-0．4010．001

2.3 两组患者胃癌组织Ki67表达差异分析 胃癌患者中Ki67表达情况(图2)。阴性表达患者为22例，表达强度为“+”为18例，“2+”为18例，“3+”为13例，“4+”为5例。统计学分析表明：HP感染阳性组患者胃癌组织中Ki67表达阳性率显著高于阴性组，二者差异具有统计学意义(P<0.05)，见表3。相关性分析表明，Ki67表达同样与HP感染存在显著负相关(r=-0.370，P=0.003)。

力争水利管理改革实现新突破。进一步完善水利规划体系、法治体系和科技支撑体系，全面推进依法治水和科技兴水；加快水资源管理体制、水利建设与运行管理体制、水利投融资机制、水价形成机制、基层水利服务体系等重点领域和关键环节改革攻坚，建立水资源有偿使用制度和水生态补偿制度；继续推进首批30个节水型社会建设重点县建设；全面推进农业水价综合改革等工作。

A 阴性表达；B 表达强度为“+”；C 表达强度为“2+”；D 表达强度为“3+”；E 表达强度为“4+”

图2 EGFR在胃癌组织中的表达情况。

表3 HP的感染情况与胃癌组织中Ki67表达的相关性分析

项目Ki67-+2+3+4+r值P值HP感染阳性4111583HP感染阴性187352-0．370．003

3 讨论

除了细胞增殖，肿瘤组织内的血管形成对肿瘤的发生、发展同样具有非常重要的作用[14]。EGFR是一种酪氨酸激酶型上皮生长因子受体，在肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡中扮演重要角色[15]。研究表明，HP除了会通过其毒力因子造成增殖和凋亡失衡促进肿瘤发生外，还可能通过其引发局部甚至全身的炎性反应，促进EGFR的相关配体如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor， VEGF)，成纤维细胞生长因子2(Fibroblast growth factor-2，FGF-2)等的产生，从而促进血管及淋巴管的形成[16-18]。本研究发现HP感染阳性胃癌患者肿瘤组织中的EGFR受体表达显著高于HP感染阴性患者，表明HP可能通过促进肿瘤组织血管形成促进肿瘤组织的发展。

目前有多个研究提示细胞毒相关基因A(cytotoxin associated gene A，CagA)阳性菌株发生胃癌的风险显著高于无HP感染的人群，而这一差别在无HP感染患者组并不显著，结果表明CagA基因可能在HP导致或影响胃癌发生、发展中具有重要作用[8-10]。另外，研究进一步表明[11-13]，CagA会通过影响细胞的增殖和凋亡起作用，CagA阳性的HP感染者组织细胞的凋亡指数降低，而阴性者的凋亡指数高，表明CagA阳性的HP可能改变了增殖和凋亡的平衡，从而导致了肿瘤发生。本例针对胃癌患者组织中Ki67表达研究也表明，HP感染者胃癌组织中Ki67高于无HP感染者。虽然本研究没有针对HP的毒力因子CagA与Ki67的表达情况相关性进行分析，但研究结果同样提示了HP可能在胃癌的发展中通过影响肿瘤细胞增殖发挥促肿瘤发展的作用。然而，本研究同样提示在今后研究中针对HP的毒力因子进行分型或者分组研究其与增殖相关指标的相关性是十分必要的。

流行病学研究表明，全球各地人群均有不同程度的HP感染，总体发病率估计为23.5%～79.4%[5]。2015年法国通过更新归因分数进行的研究发现HP感染形成的非贲门胃癌从所有癌症总数的5.2%上升至6.2%[6]。同样，韩国进行的一项研究表明，1833例胃腺癌患者中过去与近期感染HP的比率分别为75.2%和22.5%，而没有感染HP的患者仅占2.3%[7]。本研究发现，76例胃癌患者中HP感染率为53.94%，虽然其感染率低于韩国进行的相关研究，但结果同样表明了HP感染与胃癌发生、发展的相关性，说明了HP感染可能在胃癌的发生、发展中发挥重要作用。而感染率与其他文献不同的原因则可能与地区、种族及生活习惯等因素有关。

综上所述，笔者的研究发现，HP感染阳性胃癌患者肿瘤组织中Ki67和EGFR的表达高于HP感染阴性的胃癌患者，表明HP可能通过促进细胞增殖和肿瘤组织血管生成影响胃癌的发生、发展。

参 考 文 献

[1]Siegel R L,Miller K D,Jemal A.Cancer Statistics,2017[J].CA a cancer journal for clinicians,2017,67(1):7-30.

[2]Miftahussurur M,Yamaoka Y,Graham D Y.Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin and gastric cancer risk: reconsidered[J]. Translational cancer research,2016,5(Suppl 3):557-560.

[3]Ebule I A,Longdoh A N,Paloheimo I L.Helicobacter pylori infection and atrophic gastritis[J].African health sciences,2013,13(1):112-117.

[4]Zhang Y,Weck M N,Schöker B,et al.Gastric parietal cell antibodies,Helicobacter pylori infection,and chronic atrophic gastritis: evidence from a large population-based study in Germany.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2013,22(5):821-826.

[5]Diaconu S,Predescu A, Moldoveanu A,et al.Helicobacter pylori infection: old and new[J].Journal of medicine and life,2017, 10(2):112-117.

[6]Plummer M,Franceschi S,Vignat J,et al.Global burden of gastric cancer attributable to Helicobacter pylori[J].Int J Cancer,2015,136(2):487-490.

[7]Kwak H W,Choi I J,Cho S J,et al.Characteristics of gastric cancer according to Helicobacter pylori infection status[J].Journal of gastroenterology and hepatology,2014,29(9):1671-1677.

[8]Wang D,Li Q,Gong Y,et al.The association between vacA or cagA status and eradication outcome of Helicobacter pylori infection:A meta-analysis[J].PloS one,2017,12(5):e0177455.

[9]Khatoon J,Prasad K N,Prakash Rai R,et al.Association of heterogenicity of Helicobacter pylori cag pathogenicity island with peptic ulcer diseases and gastric cance[J].Br J Biomed Sci,2017,74(3):121-126.

[10] Kalani M,Hodjati H,GhamarTalepoor A,et al.CagA-positive and CagA-negative Helicobacter pylori strains differentially affect the expression of micro RNAs 21,92a, 155 and 663 in human umbilical vein endothelial cells[J].Cell Mol Biol (Noisy-le-grand),2017,63(1):34-40.

[11]Wang F,Qu N,Peng J,et al.CagA promotes proliferation and inhibits apoptosis of GES-1 cells by upregulating TRAF1/4-1BB[J].Molecular medicine reports,2017,16(2):1262.

[12]Hatakeyama M.Structure and function of Helicobacter pylori CagA,the first-identified bacterial protein involved in human cancer[J].Proceedings of the Japan Academy Series B,Physical and biological science,2017,93(4):196-219.

[13]Chen S Y,Zhang R G,Duan G C.Pathogenic mechanisms of the oncoprotein CagA in H.pylori-induced gastric cancer (Review)[J].Oncology reports,2016,36(6):3087-3094.

[14]Ronca R,Benkheil M,Mitola S,et al.Tumor angiogenesis revisited:Regulators and clinical implications[J].Med Res Rev,2017,37(6):1231-1274.

[15]Wee P,Wang Z.Epidermal Growth Factor Receptor Cell Proliferation Signaling Pathways[J].Cancers (Basel),2017,9(5):E52.

[16]Fazeli Z,Alebouyeh M,Rezaei Tavirani M,et al.Helicobacter pylori CagA induced interleukin-8 secretion in gastric epithelial cells [J].Gastroenterol Hepatol Bed Bench,2016,9(Suppl1):42-46.

[17]Zhang X Y,Zhang P Y,Aboul-Soud M A.From inflammation to gastric cancer.Role of Helicobacter pylori[J].Oncology letters,2017,13(2):543-548.

[18]Siregar G,Sari D,Sungkar T.Serum VEGF Levels in Helicobacter pylori Infection and Correlation with Helicobacter pylori cagA and vacA Genes[J].Open access Macedonian journal of medical sciences,2017,5(2):137-141.

手机APP软件的操作界面是否友好、人性化往往是决定使用者是否下载软件安装的关键。软件安装成功运行后，各种功能操作是否简单易学往往是使用者决定是否继续使用该手机软件的决定因素。因此，微信微课程设计在设计起始阶段就要充分考虑以上两个因素，尽量激发学习者的兴趣，积极地参与、投入与思考，从而提高学习效率。