胃肠舒片是我院研制的一种中药制剂，由大黄、白芍、甘草等成分制成，具有消食、导滞、通便等功效。其中大黄泻热通便、凉血解毒[1]，是主要药味之一，其中大黄素和大黄酚等苷类是大黄的主要的泻下成分。为更好的控制该药品的质量，笔者试用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定胃肠舒片内的总大黄素和大黄酚含量，取得了满意效果，现报告如下。

观察两组患者的护理满意度,护理满意度采用医院自制的护理满意度调查表进行调查,90-100分为非常满意,60-89分为基本满意,60分以下为不满意。

1 仪器、试药与方法

1.1 仪器和试药 P-1000高效液相色谱仪，P-100UV检测器(美国Spectra- Physics公司)；色谱工作站为大连Frank-1000(大连依利特科学仪器有限公司)；大黄素和大黄酚对照品(购自中国药品生物制品检定所，经HPLC分析，按面积归一化法测得含量大黄素为99.8%；大黄酚为99.6%)；胃肠舒片为我院制剂室自制(批号为20040202，20040306，20031005)；甲醇为色谱纯。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱： BDS(4.6 mm×200mm Hypersil 5μm) 大连依利特科学仪器有限公司，流动相：甲醇-0.1%磷酸(85：15)，流速： 1.0 ml·min-1，检测波长：254 nm，柱温：30℃。

1.2.2 溶液的制备

1.2.2.1 对照品溶液 分别精密称取大黄素和大黄酚对照品5 mg 、10 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

1.2.2.2 样品溶液[1，2]取本品20片，研细，精密称取0.2 g，置100 ml锥形瓶，精密加甲醇50 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密取续滤液10ml，置150ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol·L-1硫酸25ml，超声处理5 min，加氯仿30 ml，加热回流1 h，冷却，转移至分液漏斗中，分取氯仿层，酸液继续用氯仿振摇提取2次，每次20 ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，定量转移到10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

1.2.2.3 阴性对照液 按处方比例取缺大黄的处方药，制备不含大黄的阴性对照样品，按样品溶液制备方法制备阴性对照液。

1.2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照液10 μL注入色谱仪，记录色谱图，见图1。大黄素和大黄酚峰保留时间约为7.5、10.6 min 阴性对照色谱图在大黄素和大黄酚峰位置无假阳性峰，表明其它组分对测定无干扰。理论塔板数以大黄素峰计为5 678，以大黄酚峰计算为8 520。

对照品 t/min 样品 t/min 阴性对照 t/min

图1 HPLC色谱图

1.2.4 线性关系试验 精密量取对照品贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分别置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。每个浓度点进样2次测定，各进样10 μL，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归，结果表明，峰面积与进样量呈良好线性关系，回归方程为：大黄素：Y=4.176×106X-5.425×103，r=0.9996，线性范围为0.025～0.250 μg。大黄酚：Y=1.052×107X-5.425×103，r=0.9992，线性范围为0.050～0.500 μg。

1.2.5 方法精密度考察 依法对同一对照品溶液连续进样5次，每次10 μL进行测定，测定结果大黄素和大黄酚峰面积的RSD分别为0.96%，1.14%(n=5)。结果表明：本法具有一定的精密性。所选定的色谱条件系统稳定。

1.2.6 稳定性实验 取同一样品溶液(批号为20040202)，在0、2、4、6、12、24 h分别进样测定含量，结果大黄素和大黄酚含量的RSD分别为1.06%，1.28%(n=6)，表明本法在1 日内稳定。

1.2.7 重复性试验 取同一胃肠舒片样品5份，按样品测定项下方法，分别依法测定。结果其总大黄素和大黄酚平均含量的RSD分别为1.08%，1.12%(n=5)，表明本法重复性好。

1.2.8 加样回收实验 取已知含量的胃肠舒片适量，精密称定，精密加入大黄素和大黄酚对照品液适量，按“1.2. 2.2 样品溶液”项下方法，制备回收实验液，按“1.2.9样品测定”项下方法测定含量，计算回收率，见表1。

表1 加样回收率实验结果

样品含量/mg大黄素大黄酚测得量/mg大黄素大黄酚回收率/%大黄素大黄酚平均回收率/%大黄素大黄酚RSD/%大黄素大黄酚1．0171．6062．0783．12396．097．60．9681．5302．0693．10499．699．00．9241．4601．9922．99696．796．01．0271．6232．1283．18399．699．90．9871．5612．0493．09396．197．697．698．12．041．86

注：大黄素加入量均为1.105 mg，大黄酚加入量均为2.158 mg

2 结果

取对照品溶液和样品溶液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，各进样10 μL，读取峰面积值，按外标法计算含量，见表2。

病耻感的概念已被广泛应用到各个临床疾病，如精神疾病[21]、癌症[22]、结核病[23]等。通过国内十年帕金森病患者研究的可视化分析发现，针对帕金森病患者的心理学研究已经成为热点，主要集中在抑郁、焦虑、生活质量、认知功能障碍等领域。但目前为止国内还未见有帕金森病患者病耻感的相关研究。

表2 3批样品测定结果

组分名称20040202含量/mg/gRSD/%20040306含量/mg/gRSD/%20031005含量/mg/gRSD/%大黄素2．0341．12．0741．42．3021．6大黄酚3．2131．03．5261．93．4691．5

3 讨论

本文通过参考相关文献[1-8]，对样品的制备过程和流动相分别进行筛选，确定了最终的试验方法，结果表明该方法结果准确，稳定性、重复性好，可用于胃肠舒片的质量控制。鉴于大黄酚和大黄素的含量会影响胃肠舒片的质量与安全性，建议将该含量测定纳入质量标准，用以保证用药安全。

3.1 样品溶液制备方法的选择 本试验曾将6 mol·L-1硫酸10 mL直接加入胃肠舒片10 mL中进行酸水解，分离效果较本法差，且含量略低于本法，故采取本法进行样品的制备。

3.2 流动相的选择 筛选了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸等不同配比、不同比例的流动相，试验发现在流动相为酸性的条件下色谱行为较好，可能原因是大黄中含大黄素和大黄酚和大黄酚甲醚等多种蒽醌类化合物，该类化合物呈弱酸性，且流动相中加酸能有效的改善色谱峰拖尾状况。但流动相的酸性越强对色谱柱损害越大，故将水与磷酸的比例控制在100∶0.1。

参 考 文 献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2015年版.北京:化学工业出版社,2015:23．

[2] 许乾丽,茅向军.高效液相色谱法测定痤疮愈中大黄素、大黄酚的含量[J].中国中药杂志,2003,28(1):85-87.

[3] 杨希,聂晶,谭静玲,等.一清系列制剂中大黄素和大黄酚的含量比较[J].中国药师,2014,17(8):1340-1342,1352.

[4] 母小东,苏晶,汪杨丽.HPLC测定八正片中大黄素及大黄酚含量[J].食品与药品,2014,16(3):203-207.

[5] 祁秀玲,孙会昌,王晓琦,等.香黄通便胶囊中大黄素、大黄酚含量测定的研究[J].中国医药导报,2014,11(17):93-95,99.

[6] 廖欣,乔立业,王银娟,等.HPLC测定肾炎宁片中大黄酸、大黄素、大黄酚及雷公藤甲素的含量[J].中国现代应用药学,2017,34(4):567-570.

[7] 廖华卫,李瑞珍,陈飞苑.大黄中大黄酚的提取、分离和纯化方法研究[J].中国药房,2006,17(12):956-958.

[8] 杨振涛,陈霞,李黎明,等.正交实验法提取网果酸模中大黄素和大黄酚的工艺研究[J].西北药学杂志,2011,26(1):24-25.